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胞内、外Ca2+在水杨酸诱导丹参幼苗迷迭香酸生物合成过程中的作用
目的:为探讨胞内、外钙离子是否在水杨酸诱导丹参迷迭香酸生物合成中起作用.方法:以生长50 d的丹参幼苗为材料,通过喷施水杨酸诱导迷迭香酸合成量增加,再利用胞外钙通道抑制剂verapamil (Vp)和LaCl3、胞内钙调素拮抗剂trifluoperazine (TFP)和胞内钙通道上IP3受体抑制剂LiC1处理,分别考察水杨酸、钙离子通道抑制剂/钙调素拮抗剂处理后迷迭香酸的合成量及其合成相关酶(PAL,TAT)的活性变化.结果:2.0 mmol·L-1的水杨酸处理24 h后可诱导迷迭香酸合成量升高到(40.51 ±2.16) mg·g-1,是对照的1.97倍,迷迭香酸合成相关酶PAL活性升高到对照的1.42倍,TAT活性升高到对照的1.29倍;Vp,LaC13,TFP,LiC1处理均抑制了水杨酸诱导的PAL,TAT活性的升高,从而导致了迷迭香酸合成量降低.结论:水杨酸诱导丹参迷迭香酸生物合成过程中,胞内、外钙离子发挥着重要的信号转导作用.
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钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基)-丁基-小檗胺对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR的耐药逆转作用
目的研究钙调素拮抗剂O-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR的耐药逆转作用.方法采用四唑盐(MTY)比色法测定药物敏感性,分析联合应用低剂量EBB(≤IC20)时阿霉素(ADR)对MCF-7/ADR细胞的半数抑制浓度(IC50)值及其增敏倍数;应用流式细胞术测定EBB对细胞周期的影响,同时观察细胞内药物浓度的积累;采用逆转录-多聚酶链反应检测EBB对多药耐药基因-1(mdr1)及拓扑异构酶Ⅱb(topⅡb)mRNA表达水平的影响.结果EBB对MCF-7/ADR的多药耐药具有明显逆转作用,3、7.5 μmol/L浓度的EBB可以明显提高MCF-7/ADR对ADR的敏感性,平均增敏倍数分别为50.40、89.80倍,逆转强度明显高于阳性逆转剂维拉帕米(VPL)的14.88倍(P=0.0097).6 μmol/L的EBB处理2 h后,细胞内积累的P糖蛋白底物罗丹明123(Rh123)荧光强度峰值发生明显右移;同时EBB可明显增强ADR对MCF-7/ADR细胞在G2/M期的阻滞作用.6和12μmol/L的EBB处理MCF-7/ADR细胞48h后,mdr 1的mRNA表达水平有一定的降低趋势,但无统计学差异;top Ⅱb基因表达差异亦无显著性.结论EBB对MCF-7/ADR细胞具有较强的逆转多药耐药作用,其可能的逆转机制在于增强ADR对耐药细胞在G2/M期的阻滞以及抑制P糖蛋白外排泵作用.
关键词： 钙调素拮抗剂 O-(4-乙氧基)-丁基-小檗胺 多药耐药 逆转 -
钙调素拮抗剂EBB对HT1080细胞系侵袭能力的影响
目的研究钙调素拮抗剂EBB抑制HT1080人纤维肉瘤细胞侵袭的作用.方法采用四唑盐(MTT)比色试验测定药物敏感性,Zymogrophy测定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及MMP-9明胶酶活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MMP-2、MMP-9及基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达,Transwell小室进行细胞侵袭分析.结果MTT测得半数抑制浓度(IC50)为(8.2±1.2)μg/ml.钙调素拮抗剂EBB使HT1080细胞的侵袭能力明显下降(P＜0.001),表现为MMP-2和MMP-9基因表达及酶活性下降.同时TIMP-1的基因表达量相应升高.结论钙调素拮抗剂EBB可以降低HT1080人纤维肉瘤细胞的侵袭能力,基质金属蛋白酶分泌受抑制可能是抑制细胞转移的机制之一.
关键词： O-(4-乙氧基丁基)小檗胺 钙调素拮抗剂 肿瘤 侵袭 -
钙调素拮抗剂EBB抗小鼠肝癌的作用及其机制的研究
目的本项目研究了国产新型CaM拮抗剂EBB的抗肝癌作用.方法体外实验表明EBB对人肝癌细胞系7402和鼠肝癌细胞系H22均有明显抑制作用,并有剂量依赖关系,其IC50分别为3.312 μg/ml和1.167 μg/ml,无毒剂量(IC10)的EBB与5-Fu(IC50) 联合应用可明显提高H22细胞对5-Fu的敏感性,5-Fu的IC50由0.75 μg/ml降至0.15 μg /ml,敏感性提高5倍.体内实验证明,EBB可使腹水型肝癌小鼠动物长期健康存活(3个月以上),长期存活率高达64%,对照组均在18天左右死亡.EBB的无毒剂量(5 mg*kg-1 *d-1)与5-Fu (25 mg*kg-1*d-1)联合应用,EBB组的长期存活率 (73%)明显高于5-Fu组(27%),证明EBB对5-Fu的抗肝癌有增敏作用,统计学上有显著性. 结果 EBB作用机制的研究显示,EBB组P53蛋白表达水平明显高于对照组,提示EBB对P53在翻译水平上有较强的上调作用;EBB作为拮抗剂使肝细胞内CaM含量下降;使增殖的细胞阻断于G2 M期,在G0/G1期间,有二倍体峰以及超微结构可见凋亡细胞.结论 CaM拮抗剂EBB具有强抗肝癌作用,对5-Fu有增敏作用,对肝癌细胞凋亡有诱导作用,它可上调P53蛋白表达及下调CaM含量,提示它是一种新型的、有前途的化疗药物 ,有进一步研究和开发价值.
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电话传输远程心电监测苄普地尔治疗慢性房颤的剂量效应
苄普地尔(bepridil)是一种新型的长效钙通道阻断剂,同时具有钠和钾通道阻断剂活性,可在细胞内作为钙调素拮抗剂发挥作用.苄普地尔具有抗心绞痛作用,以及Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ类抗心律失常作用.
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钙调素拮抗剂小檗胺诱导K562细胞凋亡及其机制的研究
小檗胺(Berbamine,BBM)是一种双苄基异喹啉类生物碱,广泛用于白细胞减少症且无明显不良反应,近研究表明BBM及其衍生物均属钙调素拮抗剂(Calmodulin antagonist),对多种肿瘤细胞具有明显的增殖抑制作用,为明确BBM体外抗白血病的作用及其机制,我们以K562细胞为对象进行研究.
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钙调素拮抗剂对癫痫动物模型抗痫作用的研究
目的了解钙调素拮抗剂有无抗痫作用,为临床上开发新型的抗痫药以进一步控制癫痫提供理论依据.方法采用记录小鼠脑电图同时观察其行为的方法,观察钙调素拮抗剂W-7对 L型钙离子通道激动剂±Bayk-8644致痫小鼠行为和脑电图的影响.结果钙调素拮抗剂明显延长了痫性发作和痫波发放的潜伏期,减轻了痫性发作程度,减少了痫波发放频率;同时还发现钙调素拮抗剂有一定的镇静作用.结论钙调素拮抗剂对±Bayk-8644致痫小鼠有抗痫作用.
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钙调素拮抗剂E6对大鼠脑一氧化氮合酶活性和突触体谷氨酸释放的影响
目的探讨钙调素拮抗剂E6的抗脑缺血作用机制.方法用[3H]-L-Glu(glutamic acid,Glu)标记大鼠脑突触体,测定突触体的Glu释放量和用一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)试剂盒测定成年大鼠脑匀浆上清中NOS活性.结果 E6促进Glu释放(与对照组比,10-5mol@L-1组增加81.0%),但对KCl(50 mmol@L-1)引起的Glu释放有抑制作用,10-5mol@L-1E6的抑制率为23.2%.E6浓度依赖性地抑制NOS活性.钙调素(calmodulin,CaM)(30μg@ml-1)可逆转E66的抑制作用(10-6mol@L-1E6的抑制率为13.7%),N-硝基-精氨酸((N-nitro-arginine,L-NNA)(10 μmol@L-1)可加强E6的抑制作用(10-6mol@L-1的抑制率为76.5%).结论 E6是与CaM结合后发挥抑制NOS活性效应的,E6对Glu释放的影响可能与其对NOS活性及其对神经细胞内Ca2+影响有关.
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钙调素拮抗剂EBB抑制ES-2细胞转移作用机制初探
目的 研究钙调素拮抗剂EBB-O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺体外对人卵巢癌ES-2细胞的转移抑制作用及其机制.方法 采用MTT法测定EBB对ES-2细胞的增殖抑制作用;Transwell小室法分析细胞侵袭能力,细胞损伤实验检测细胞迁移能力;共聚焦显微镜技术检测细胞内[Ca2+]i变化. 结果 EBB对ES-2细胞具有增殖抑制作用,IC50为(13.67±1.56) μmol·L-1,EBB使ES-2细胞的侵袭迁移能力明显下降(P<0.01),伴随[Ca2+]i呈时间及剂量依赖性增高. 结论钙调素拮抗剂EBB可抑制ES-2细胞增殖,降低ES-2细胞的侵袭转移能力,与细胞内游离钙离子浓度增高相关.
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钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺对人白血病细胞K562和K562/A02生长的抑制作用
目的 研究钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺(EBB)体外抗白血病作用及机制.方法 四唑盐(MTT)比色法评价EBB的细胞毒作用;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光分光光度计检测细胞ROS水平;激光共聚焦显微镜检测[Ca2+]i含量.结果 EBB明显抑制敏感K562和耐药K562/A02细胞增殖,IC50分别为(8.22±1.67)mol·L-1和(8.97±1.48)mol·L-1.EBB作用早期诱导凋亡,晚期引起坏死.K562/A02细胞的ROS静息值是K562细胞的2倍,EBB诱导两种细胞ROS生成呈浓度和时间依赖性,加入SOD明显降低坏死率.K562/A02细胞的[Ca2+]i低于K562细胞.EBB能明显增加两种细胞的[Ca2+]i.结论 EBB明显抑制K562和K562/A02细胞增殖.信号分子Ca2+、ROS参与了EBB的细胞毒作用.
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钙调素拮抗剂小檗胺逆转K562/ADR细胞株多药耐药的研究
目的:研究钙调素拮抗剂小檗胺(BBM)抑制白血病细胞增殖并逆转细胞多药耐药的作用.方法:以四唑氮蓝(MTT)法测定小檗胺对K562细胞、耐阿霉素K562细胞(K562/ADR)的增殖抑制作用并求得其IC50;测定联合应用阿霉素和BBM后K562/ADR细胞对阿霉素的IC50值及其增敏倍数.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小檗胺作用前后K562/ADR细胞多药耐药基因(MDR)在mRNA 水平的表达,应用免疫组织化学方法测定P170表达量.结果:小檗胺能显著抑制K562及K562/ADR细胞增殖,其IC50值分别为5.32 μg*mL-1 和10.97 μg*mL-1.联合应用阿霉素和1 μg*mL-1 小檗胺使K562/ADR细胞对阿霉素的IC50由5.94 μg*mL-1 降低至2.93 μg*mL-1 ,其增敏倍数为 2.03倍.8 μg*mL-1 小檗胺作用K562/ADR细胞24 h后P170的表达量由85.45%降低至 63.86%,72 h后MDR1mRNA的表达以β-actin为内参照的半定量比值也由处理前的1.625降至0.877.结论:小檗胺对K562、K562/ADR有显著的增殖抑制作用,小檗胺能部分逆转K562/ADR细胞对阿霉素的耐药,其作用是通过抑制MDR1在mRNA和 P170水平的表达而实现的.
