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鼠γ疱疹病毒68(MHV68):研究γ疱疹病毒感染的模型
γ疱疹病毒成员遍及自然界,可感染包括人在内的多种哺乳动物.γ疱疹病毒的生物学特性主要有:(1)能在淋巴细胞中潜伏感染;(2)可以产生淋巴增生性疾病;(3)与淋巴组织和非淋巴组织肿瘤关系密切.开始γ疱疹病毒根据感染T或B细胞的不同而分为γ1和γ2疱疹病毒,前者主要感染B淋巴细胞,如感染人和棉顶绒猴的EBV(EpsteinBarr virus);γ2疱疹病毒则感染T淋巴细胞,以感染松鼠猴的疱疹病毒samiri(herpesvirus samiri,HVS)为代表.但后来证实γ2疱疹病毒可同时感染T、B淋巴细胞,而EBV亦可引起T淋巴细胞肿瘤.因此以后发现的γ疱疹病毒则根据其基因结构及基因组中代表性序列的特点,将其归为γ1或γ2亚类.如感染人的卡波氏肉瘤相关病毒(Kaposi's sarcomaassociated herpesvirus,KSHV)或称人疱疹病毒8(human herpesvirus-8,HHV8)就归为γ2[1].
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病毒巨噬细胞炎症蛋白vMIP-Ⅰ和vMIP-Ⅱ在Kaposi's肉瘤患者中的表达及意义
目的 初步探明KSHV编码的病毒巨噬细胞炎症蛋白vMIP-Ⅰ和vMIP-Ⅱ在新疆经典型Kaposi's sarcoma(KS)患者的肉瘤组织、血液、唾液和尿液中的表达情况.方法 对8例新疆经典KS患者的新鲜冰冻肉瘤组织、血液、唾液和尿液标本进行基因组DNA提取,应用PCR扩增各标本中的vMIP-Ⅰ和vMIP-Ⅱ基因.结果 8例新疆经典型KS患者的肉瘤组织、血液、唾液和尿液中均获得较好的基因组DNA;同时8例组织标本全部扩增出vMIP-Ⅰ、vMIP-Ⅱ基因,但是8例患者的血液、唾液和尿液标本都未出现vMIP-Ⅰ和vMIP-Ⅱ基因表达.结论 新疆经典型KS患者肉瘤组织中均检测到vMIP-Ⅰ和vMIP-Ⅱ基因片段的表达,为深入研究卡波氏肉瘤的血管形成机制提供初步的依据.
关键词： 病毒巨噬细胞炎症蛋白 卡波氏肉瘤 卡波氏肉瘤相关疱疹病毒 肉瘤 -
经血传播肝炎患者卡波氏肉瘤相关的疱疹病毒感染的血清学研究
卡波氏肉瘤相关的疱疹病毒(KSHV)，为近来发现的一种新的疱疹病毒，又称人类疱疹病毒8型(HHV-8)。国外研究发现该病毒主要经性途径传播，作者近报道了我国静脉吸毒者中有较高的KSHV感染，KSHV可经静脉吸毒传播。为进一步摸清我国KSHV的感染情况和感染途径，我们用抗原性、特异性强的KSHV ORF65基因重组蛋白作抗原，用ELISA法对1999年3月～12月间浙江省部分经血传播肝炎患者144例(乙型肝炎病人52例，丙型肝炎病人32例，非甲-庚肝炎病人60例)，正常献血员241例进行了KSHV感染的血清学研究，并初步分析KSHV感染与HBV、HCV复制的关系。
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新疆经典型卡波氏肉瘤患者不同样本HHV-8DNA病毒载量与临床分期关系初步分析
目的:了解新疆经典型卡波氏肉瘤(Kapos's sarcoma,KS)患者皮损、外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)、唾液和尿液中人疱疹病毒型(HHV8) DNA病毒载量水平及分布情况,探讨HHV8病毒载量与经典型KS临床分期之间的相关性.方法:选取2011-03-09-2012-11-11就诊于新疆医科大学第一附属医院皮肤科8例经典型KS患者的4种类型32份样本中扩增HHV8 DNA ORF26基因片段,应用RT-qPCR测定32份样本中HHV8病毒载量,评价载量负荷与经典型KS疾病临床分期之间的关系.结果:全部资料均获完整基因组DNA.新疆经典型KS患者不同样本中HHV8 DNA检出率为100％.标准曲线良好,扩增产物特异,其中,HHV8病毒载量负荷皮损组织为205.75±124.02,唾液为70.75±53.01,PBMC为39.88±26.98,尿液为28.25±12.26,差异有统计学意义,F=11.206,P＜0.001.HHV8病毒载量水平皮损组织＞唾液＞PBMC＞尿液.结论:新疆经典型KS患者多样本中均有HHV8DNA检出,HHV8病毒载量水平在皮损中高,在尿液中低,与新疆经典型KS临床分期之间未呈现相关性趋势.
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新疆经典型卡波氏肉瘤组织HHV-8与血清巨噬细胞炎症蛋白表达关系的分析
目的:初步探讨在新疆经典型卡波肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)组织人疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)阳性的患者血清中,巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammatory proteins-1α,MIP-1α)和MIP-1β表达水平差异与KS发病的关系.方法:采用PCR法扩增16例经典型KS肉瘤组织中HHV8ORF26基因片段,证实存在HHV-8病毒.采用ELISA法检测16例KS患者和20名健康对照者血清中MIP-1α和MIP-1β浓度水平.采用2组均数比较t检验来评价其与KS发病的相关性.结果:16例经典型KS患者HHV-8 DNA检出率为100％.MIP-1α在KS患者血清中呈现低浓度表达,为(126.72±70.26) ρg/mL；在健康对照组中均呈现高浓度表达,为(1 382.50±448.89) ρg/mL;差异有统计学意义,t=-11.05,P＜0.01.MIP-1β在KS血清和健康对照组中呈现高浓度表达,分别为(733.75士276.02)和(886.00±395.65) ρg/mL,差异无统计学意义,t=-1.304,P=0.201.结论:新疆经典型KS患者皮损组织中普遍存在HHV-8 DNA病毒,患者血清中MIPs水平的紊乱与新疆经典型KS的发病存在一定的关系.
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艾滋病与卡波氏肉瘤
艾滋病是人类免疫缺陷病毒引起的一种获得性免疫缺陷综合征.HIV病毒进入人体后,侵入体内各种细胞,主要的靶细胞是T4淋巴细胞,当T4淋巴细胞减少,人体免疫系统严重破坏,产生免疫缺陷,容易遭受某种机遇性感染和引起一些不常见肿瘤,如卡波氏肉瘤(Kaposis sarcoma,KS)及B细胞淋巴瘤.笔者于1996年6月至1999年6月在非洲博茨瓦纳首都玛丽娜公主医院及佛朗西医院工作期间,发现艾滋病卡波氏肉瘤17例,报告如下.
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1 例肾移植受者并发卡波氏肉瘤的护理
卡波氏肉瘤(Karposi's sareofna,KS)又称多发性特发性出血性肉瘤,由皮肤科医生Moeiz Kaposi于1872年首次描述[1,2],1960年出现了有关KS与器官移植后免疫抑制状态之间关系的报道[1].
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卡波氏肉瘤患者8型疱疹病毒套式PCR检测
目的探讨8型疱疹病毒(human herpesvirus 8,HHV 8)与新疆卡波氏肉瘤(kaposi's sarcoma,KS)发病的关系并探索HHV8 DNA的检测方法.方法采用巢式聚合酶链反应(nested-polymerase chain reaction, nested-PCR)方法检测29例新疆KS患者血清、43份石蜡包埋KS组织HHV8 DNA,并检测68份非KS患者血清HHV8 DNA作为对照.结果 KS组阳性率分别为86.21%(25/29)和95.35%(41/43),2种样本间HHV8 DNA检出率差异无统计学意义(χ2=1.90,P=0.173).对照组68例非KS患者血清HHV8 DNA阳性率为20.59%(14/68).KS组与对照组间差异有统计学意义(χ2=72.15,P＜0.001).结论结果提示HHV8是KS的病原,同时建立了比较灵敏的nested-PCR检测血清HHV8 DNA的方法.
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新疆卡波氏肉瘤血清细胞因子水平检测
卡波氏肉瘤(Kaposi's Sarcoma,KS)是一种缓慢进展的恶性多发性色素性血管肉瘤,好发于老年男性.KS在临床上分为经典型、非洲地方型、免疫抑制/器官移植相关型和艾滋病相关型4型.KS多见于欧洲意大利人、犹太人.在我国,主要为经典型KS,好发于维吾尔族和哈萨克族.其发病机制至今不明,认为KS可能与免疫功能抑制[1,2]和细胞因子调节网络紊乱[3～5]等因素有关.
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病毒感染在卡波氏肉瘤发病中的作用研究进展
卡波氏肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)是一种好发于老年男性的多发性色素性血管肉瘤,常见于欧洲意大利人、犹太人、非洲南部班图族人;其发病部位以皮肤为多,亦可发生于肺和淋巴结等.临床上分为经典型、非洲地方型、免疫抑制与器官移植相关型,以及AIDS相关型卡波氏肉瘤.KS的病因仍然不清楚,认为与某些病毒感染、遗传和激素等相关.其中,病毒感染,尤其是卡波氏肉瘤相关病毒(Kaposi's sarcoma associated virus,KSHV)的感染,认为是KS发病的不可缺少的因素.现就病毒感染在KS发病中的作用研究进展做一综述.
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新疆卡波西肉瘤组织中MT1-MMP和ARHGDIB蛋白的表达
目的:探讨新疆卡波氏肉瘤组织中膜型1型基质金属蛋白酶(Menberane 1 Matrix metalloproteinases,MT1-MMP),Rho蛋白解离抑制因子β(Rho GDP dissociation inhibitor GDI beta,ARHGDIB)的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学Envision二步法检测新疆17例卡波氏肉瘤和17例健康人正常皮肤组织内MT1-MMP和ARHGDIB的表达水平.结果:免疫组化显示MT1-MMP和ARHGDIB在卡波氏肉瘤组织阳性表达率为82.4%和100%,在正常皮肤组织中阳性率为6.9%和17.7%,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:新疆卡波西肉瘤组织中MT1-MMP和ARHGDIB蛋白呈异常表达,有可能在KS的发展过程中发挥了重要作用.
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miR-181b-5p对于卡波西肉瘤细胞SLK细胞增殖和凋亡的影响
目的:通过脂质转染miR-181b-5p模拟物及抑制物到卡波西肉瘤细胞系SLK,首次研究miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞SLK细胞增殖、凋亡生物学功能的影响,为进一步研究miR-181b-5p在卡波西肉瘤发病机制中的作用奠定理论基础.方法:应用脂质体对人卡波西肉瘤细胞株SLK进行转染,对转染miR-181b-5p模拟物及抑制物后的卡波西肉瘤细胞株行MTT检测观察细胞增殖曲线;应用流式细胞仪行检测转染48小时后各组细胞凋亡率比较.结果:与阴性对照组比较,miR-181b-5p模拟物组细胞的增殖能力明显上升,(P＜0.01).miR-181b-5p抑制物组细胞的增殖能力明显下降,(P＜0.01).miR-181b-5p抑制物阴性对照组细胞的增殖能力无明显变化.流式细胞仪测定SLK细胞转染miR-181b-5p模拟物后凋亡率(5.5±0.6)％,与阴性对照组凋亡率(7.6±0.4)％相比,差异有统计学意义,明显下降(P＜0.05);miR-181b-5p抑制物组凋亡率(14.8±1.0)％明显增高,有统计学差异(P＜0.05).结论:通过转染miR-181b-5p模拟物/抑制物,发现其对SLK细胞的增殖、凋亡造成一定影响,进一步开展miR-181b-5p生物学特性和其相关靶基因验证的相关研究有十分重要的意义.
关键词： miR-181b-5p 卡波氏肉瘤 增殖 凋亡 -
RANTES在新疆卡波氏肉瘤中的表达及其与KSHV感染的相关性探讨
目的:探讨调节活化正常T细胞的表达与分泌因子(RANTES)在新疆卡波氏肉瘤(KS)组织中的表达及其与卡波氏肉瘤相关病毒(KSHV)感染的相关性.方法:利用免疫组化方法对新疆卡波氏肉瘤组织及正常皮肤中趋化因子RANTES进行蛋白表达水平的检测.利用感染KSHV的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为卡波氏肉瘤研究的细胞模型,分别在含有佛波酯(TPA)和不含佛波酯的ECM培养基中培养.培养1d,3d,5d后各收取一批细胞,通过RT-PCR检测HUVEC细胞中趋化因子RANTESmRNA的表达水平.结果:KS切片中RANTES的阳性表达率明显高于正常皮肤组.感染KSHV的HUVEC,在含有TPA和不含有TPA的培养基中RANTES的表达都呈现出先低后高的变化趋势.5 d后,接受TPA刺激的HUVEC中RANTES表达显著上调.结论:RANTES在新疆卡波氏肉瘤组织中高表达,并且其表达受KSHV调节,感染细胞初期抑制RANTES的表达,之后促进其表达.
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miRNA与卡波氏肉瘤
microRNA(miRNA)是一类长度约为21～25个核苷酸RNA,它在转录后水平调节靶基因表达.miRNA在物种进化中相当保守,其表达有组织特异性和时序特异性,其主要功能是负调控基因表达.有研究表明,miRNA在发育、细胞增殖、凋亡、脂类代谢、激素分泌及肿瘤发生等多种生理和病理过程中密切相关.本文着重介绍miRNA的产生,作用机制,与肿瘤的关系,以及在卡波氏肉瘤中的研究进展.
关键词： 微小RNA 卡波氏肉瘤 卡波氏肉瘤相关疱疹病毒 肿瘤 -
8例经典型卡波氏肉瘤放疗加生物治疗的临床分析
目的 通过总结经典型卡波氏肉瘤(KS)的临床诊治经验,了解放疗加生物治疗的疗效.方法 回顾性分析8例经典型KS患者,对其临床表现、肿瘤特征、治疗方式、疗效和生存情况进行分析总结.8例均为少数民族,维吾尔族7例,哈萨克族l例.放射治疗采用直线加速器 6MV X线,常规分割照射,每周5次,每次200cGy,总量30～50Gy.同时配合使用生物治疗:干扰素300万单位,每天1次,2周;胸腺肽1.6mg,隔日1次,4周.结果 经典型KS主要发生在皮肤,常呈多发性,常累及四肢远端,较少发生远处转移.8例患者的完全缓解率75.0%,部分缓解率25.0%,有效率100%.结论 经典型KS是少见的软组织恶性肿瘤,新疆地区少数民族常见.放射治疗配合生物治疗是治疗经典型KS安全有效的方法,剂量以40Gy左右为宜.
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KSHV vFLIP在血管内皮细胞中的表达及其功能验证
目的:构建含卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的病毒FLICE抑制蛋白(viral FLICE inhibitory protein,vFLIP)基因的重组慢病毒表达载体,获得稳定表达vFLIP的人脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),并检测vFLIP在HUVECs中活化NF-κB信号通路的能力.方法:以真核表达质粒pEF-vFLIP为模板扩增vFLIP基因,插入至慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-IZs-Green中构建重组质粒pHAGE-vFLIP.利用脂质体将其与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293 T细胞,收集过滤后的培养上清获得慢病毒悬液.利用梯度稀释法测定病毒滴度后,以一定感染复数的慢病毒感染HUVECs,通过蛋白质印迹法检测vFLIP的表达.经绿色荧光蛋白(GFP)流式分选以及蛋白质印迹法验证获得稳定表达vFLIP的HUVECs.后,通过虫荧光素酶报告实验检测NF-κB的活性,免疫荧光染色检测NF-κB亚基p65的细胞定位,蛋白质印迹法检测IκBα蛋白的表达来评价稳定表达vFLIP蛋白的HUVECs功能.结果:核酸序列测定证实含vFLIP基因的慢病毒表达载体已构建成功.重组慢病毒感染HUVECs后可检测到vFLIP的表达.通过流式分选获得了稳定表达vFLIP的HU-VECs细胞,并且能通过抑制IκBα的降解,阻碍p65入核来活化NF-κB,从而激活经典NF-κB信号通路.结论:成功包装了含KSHV vFLIP基因的重组慢病毒,并获得具有激活NF-κB信号通路功能、稳定表达vFLIP的HUVECs株.
关键词： 慢病毒 卡波氏肉瘤 病毒FLICE抑制蛋白 人脐静脉内皮细胞 核因子-κB -
艾滋病的耳鼻咽喉表现
目的总结艾滋病患者在耳鼻咽喉的临床表现.方法10例艾滋病的临床资料回顾性分析.结果10例艾滋病患者,有卡波氏肉瘤8例,颈部肿块8例,皮肤、口腔咽喉黏膜溃疡4例,上呼吸道梗阻行气管切开术2例,单侧慢性化脓性中耳炎者1例.结论艾滋病患者以咽喉、口腔部卡波氏肉瘤及黏膜溃疡出现早,应引起高度警惕及重视.
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下肢静脉曲张伴体表卡波氏肉瘤1例
卡波氏肉瘤(Kaposi,KS)又称多发性、出血性肉瘤,可发生在皮肤、黏膜、淋巴结、内脏的恶性肿瘤,是一种少见的多中心性结缔组织肿瘤.而体表皮肤的卡波氏肉瘤在我国主要见于新疆地区的维吾尔族等少数民族,在我省更是罕见.其治疗取决于病变的范围和部位,同时需考虑患者的临床症状和免疫抑制的程度.我院普外科收治了一例下肢静脉曲张伴体表卡波氏肉瘤,通过手术切除加化疗、免疫治疗,取得一定效果.
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湖北地区普通人群卡波氏肉瘤相关疱疹病毒感染的血清学分析
卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)可导致人类产生卡波氏肉瘤(KS),即AIDS病人为常见的肿瘤.广泛的流行病学研究显示,KSHV的流行与KS相似并呈现明显的地域分布型.为调查KSHV在汉族普通人群中的感染情况,我们以KSHV ORF65编码的小衣壳蛋白(small capsid protein)为抗原,采用酶联免疫(ELISA)分析方法,对湖北地区560例汉族普通人群血清样品进行了KSHV抗体检测.在检测的560份血样中,KSHV抗体总阳性率为5.2%,其中,男性阳性率为5.7%,女性为4.5%.统计学分析显示,KSHV感染率在男女性别上无差异(P=0.542),但与年龄有一定的相关性:10岁以下儿童群体较之10岁以上人群KSHV感染率具有显著的统计学差异(P=0.006,OR=6.692,95%CI=1.710-26.198);60岁以上的老年人群KSHV感染率有上升趋势,但无统计学明显差异(P=0.052).上述结果表明,KSHV在这一地区的流行与西方成年人群的感染率相似,但在儿童群体中的相对较高的感染率与一些非洲地区的接近.由此提示在该群体可能存在特殊的传播模式.
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卡波氏肉瘤病因学的研究进展
卡波氏肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)是一种缓慢进展的软组织恶性多发性色素性血管肉瘤,主要见于皮肤,也可累及内脏.根据临床表现、生物行为及特点不同可分为经典型、艾滋病相关型、非洲地方型、免疫抑制/器官移植相关型[1].KS病因学一直未能确定,KS是AIDS的早期表现之一,也是艾滋病(AIDS)常见的原发性肿瘤和致死原因,鉴于其对AIDS的特殊价值,KS引起广泛关注.现将其病因学的研究进展综述如下.
