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通心络胶囊联合尼可地尔、辛伐他汀对冠脉慢血流的干预效果
目的 观察“通心络胶囊联合尼可地尔、辛伐他汀”方案对冠脉慢血流的干预效果.方法 选取2013年1月-2016年11月山西医科大学第一医院诊断为慢血流的120例胸痛住院病人,随机分为对照组(基础治疗+尼可地尔、辛伐他汀)、观察组(对照组治疗基础上加用通心络胶囊)各60例,观察6个月.观察比较两组冠脉血流速度(CTFC)、炎症因子表达、胸痛症状缓解情况.结果 观察期内对照组3例失访;观察组有1例因头痛不能继续服用尼可地尔,1例肝酶升高,0例失访.观察组病人治疗后左前降支(LAD)、左回旋支(LCX)、右冠状动脉(RCA)CTFC与治疗前相比均明显下降(P＜0.05),治疗后观察组LAD的CTFC较对照组下降(P＜0.05).观察组病人治疗后炎症介质高敏C反应蛋白(hs-CRP)、髓过氧化物酶、脂氧素A4水平较治疗前降低(P＜0.05);治疗后观察组炎症介质hs-CRP、髓过氧化物酶、脂氧素A4水平较对照组下降(P＜0.05).观察组在3个月、6个月时心绞痛频度、里克特量表评分与治疗前相比明显下降(P ＜0.05或P＜0.01);观察组里克特量表评分在3个月时较对照组降低(P＜0.05).结论 通心络胶囊联合尼可地尔、辛伐他汀可改善冠脉慢血流,安全性好,抗炎可能是其机制之一.
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脂氧素A4对脂多糖作用RAW264.7细胞的实验研究
目的 探讨脂氧素A4(LXA4)对脂多糖(LPS)作用巨噬细胞存活的影响作用.方法 取对数生长期的鼠源性RAW264.7巨噬细胞株进行培养、传代.采用免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度LPS处理巨噬细胞的pNF-κB p65蛋白水平,并应用CCK-8法观察LPS对巨噬细胞的毒性作用及LXA4对其存活率的影响.结果 LPS对巨噬细胞内pNF-κB p65蛋白水平存在影响,且在一定范围内呈剂量依赖关系;LXA4能够逆转LPS对巨噬细胞的毒性作用.结论 LXA4能够抑制LPS对巨噬细胞的作用及NF-κB的激活,从而减轻炎症反应.
关键词： 脂氧素A4 RAW264.7细胞 脂多糖 核转录因子 -
脂氧素A4抑制5-LOX合成对脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用
目的 探讨脂氧素A4(LXA4)在大鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用中5脂氧合酶(5-LOX)途径的作用和机制.方法 SPF级雄性Wistar大鼠随机分成假手术组、大脑中动脉区局灶性脑缺血(MCAO)组、MCAO+LXA4组及MCAO+ LXA4+ Boc2组.通过TTC染色法评估脑梗死体积;WB法测定5-LOX、ERK1/2、p-ERK1/2、p38/p-p38、JNK/p-JNK蛋白表达;ELISA法测定5-LOX产物LTB4/LTC4的表达.结果 MCAO+ LXA4组动物的神经功能缺损评分、脑含水量、梗死体积百分比较MCAO组明显改善(P＜0.05),并被Boc2部分阻断抑制作用;并且MCAO+ LXA4组大鼠脑组织中5-LOX、ERK1/2/p-ERK1/2蛋白表达量及其调控产物LTB4/LTC4较MCAO组也明显降低(P＜0.05),LXA4的抑制作用被Boc2部分阻断.结论 脂氧素A4对大鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用与其对5-LOX及其调控产物的抑制作用相关.
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脂氧素A4对脂多糖攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白5的影响
目的 探讨脂氧素A4(LipoxinA4,LXA4)对脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar type Ⅱ penumonoeyte,ATⅡ)水通道蛋白(aquaporin,AQP)5的影响.方法 对大鼠ATⅡ细胞进行分离、纯化,以1 μg/mL的LPS刺激ATⅡ 4 h建立LPS攻击ATⅡ细胞模型.将ATⅡ随机分为:空白对照(无血清的培养基不含任何药物)组;溶剂对照(乙醇,0.7μL/mL)组;LPS(1μg/mL)组;LXA4(1×107mol/mL)组;LPS+LXA4组.用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测大鼠ATⅡ中AQP5的信使核糖核酸(mRNA)的变化,免疫组织化学方法(IHC)检测ATⅡ中AQP5蛋白表达.结果 1μg/mL的LPs刺激ATⅡ4 h后,ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组明显减低(P<0.01),而LPS+LXA4组ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较LPS组明显增高(P<0.01),且LXA4组ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组也明显增高(P<0.01).结论 大鼠ATⅡ上表达有AQP5,LXA4能促进AQP5 mRNA和蛋白表达上调,提示LXA4可能通过上调AQP5的表达起到促进肺泡水肿液清除作用.
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脂氧素A4对内毒素诱导小鼠肺内炎症反应的影响
目的 探讨脂氧素A4对脂多糖诱导小鼠急性肺内炎症反应的影响.方法 36只雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组、脂氧素A4组、ZnPP组、内毒素组、脂氧素A4治疗组和ZnPP+脂氧素A4治疗组,每组6只.雾化吸入脂多糖8 h后,测定肺泡灌洗液总蛋白浓度和TNF-α含量,测定肺组织湿干质量比值、丙二醛(MDA)活性和一氧化氮(NO)浓度,免疫组化测定肺组织HO-1的蛋白表达.结果 与LPS组比较,脂氧素A4治疗组肺水肿减轻,肺泡灌洗液总蛋白浓度、TNF-α含量、肺组织MDA活性、NO含量均降低(P＜0.01),而HO-1的蛋白表达明显升高,肺组织损伤减轻.HO-1抑制剂ZnPP减弱脂氧素A4保护作用.结论 脂氧素A4能减轻内毒素诱导的肺部急性炎症反应,HO-1介导其保护作用.
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喘可治抑制哮喘大鼠炎症反应的机制研究
目的 探讨喘可治抑制哮喘大鼠炎症反应的可能机制.方法 选用Wistar大鼠90只,其中15只为正常对照组,另75只制作哮喘大鼠模型并随机分为用不同剂量喘可治治疗组、地塞米松治疗组、模型组,共5组.各组给予相应的处理措施,采用酶联免疫吸附法测定各组大鼠外周血脂氧素A4(LXA4)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、白介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)含量,采用流式细胞仪测定淋巴细胞亚群比例.结果 与正常组比较,模型组除CD4+ CD25+T调节细胞外,其余指标差异均有统计学意义(P＜0.05).高剂量喘可治治疗组大鼠血清LXA4、INF-γ浓度均明显增高,且高于中、低剂量喘可治和地塞米松治疗组,差异有统计学意义(P＜0.05).各剂量喘可治治疗组MIF浓度均较模型组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).各剂量喘可治治疗组IL-4浓度均较模型组明显下降,其中高剂量组下降明显,差异有统计学意义(P＜0.05).高、中、低剂量喘可治治疗组CD4+ CD25+T调节细胞百分比均明显上升,其中高剂量组升高明显,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05).高、中剂量喘可治治疗组CD3-CD161a+ NK细胞的百分比明显上升,与模型组、低剂量组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 高剂量喘可治腹腔注射可能影响哮喘模型大鼠外周血LXA4、MIF、IL-4、IFN-γ等多种抑炎因子或细胞因子的浓度,缓解哮喘大鼠的炎症反应,同时可能影响哮喘模型大鼠外周血Treg细胞和NK淋巴细胞亚群的比例,有利于预防和控制哮喘.
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脂氧素 A4对尿酸诱导的人脐静脉内皮细胞炎症反应的影响
目的：探讨脂氧素A4对尿酸诱导的人脐静脉内皮细胞( HUVECs)炎症相关因子的影响及其可能的机制。方法实验分为对照组、尿酸单独刺激组和不同浓度脂氧素A4(5、25、50 ng/ml)预处理组。ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素( IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α( TNF-α)的浓度；实时荧光定量PCR检测HUVECs TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA 表达水平；Western 印迹法检测 p38丝裂原活化蛋白激酶( MAPK)和NF-κB/p65磷酸化水平。结果12 mg/dl的尿酸刺激HUVECs 24 h,细胞培养上清中的TNF-α、IL-1β和IL-6水平均显著升高(P<0.01),脂氧素A4呈浓度依赖性地抑制尿酸诱导的TNF-α、IL-1β和IL-6产生(P<0.01)。尿酸刺激的TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达也被5、25、50 ng/ml脂氧素A4显著下调(P<0.05)。 Western印迹法证实12 mg/dl的尿酸可诱导HUVECs p38 MAPK和NF-κB/p65蛋白磷酸化水平增加(P<0.05),而50 ng/ml脂氧素A4预处理后能够显著降低HUVECs的p38 MAPK和NF-κB/p65磷酸化水平(P<0.01)。结论脂氧素A4可通过降低p38 MAPK和NF-κB/p65蛋白磷酸化水平而抑制尿酸诱导的血管内皮细胞炎症相关因子的表达,发挥抗炎作用。
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脂氧素A4、保护素D1、ResolvinD1抑制多种激动剂引起的NFκB的活化
目的 探讨脂质小分子脂氧素A4 (LXA4)、保护素D1 (ProD1)、ResolvinD1( RvD1)对核因子kB (NFkB)活性的影响及作用机制.方法 稳定表达NFkB荧光素酶报告基因的中国仓鼠卵巢细胞分别由100 nmol/L LXA4、ProD1、RvD1预处理30 min后,细胞被激动剂LPS、HSP70、HMGB1或S100A4刺激.通过检测荧光素酶活性以评价脂质小分子对激动剂激活NFkB活性的作用.细胞培养上清中TNFα的含量由ELISA检测,胞核中NFkB的含量由Western印迹检测.结果 LPS、H SP70、HMGB1和S100A4显著上调NFkB的活性,增加细胞分泌的TNFα的量.LXA4、ProD1、RvD1显著抑制NFkB激活,降低细胞分泌的TNFα含量,减少NFkB的入核.结论 LXA4、ProD1、RvD1显著抑制多种激动剂活化NFkB,其作用机制可能与其能降低NFkB的入核有关,这几个脂质小分子在研制新型抗炎药物方面具有进一步开发和研究的潜力.
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LXA4、ALDH1及PLGF在子宫内膜异位症患者中的表达及意义
目的 观察脂氧素A4(LXA4)、乙醛脱氢酶1(ALDH1)和胎盘生长因子(placental growth factor,PLGF)在子宫内膜异位症(endomeuiosis,FEMT)患者中的表达及意义.方法 选取2012年1月至2014年1月经病理诊断为EMT的患者165例为异位内膜组,选择同期健康妇女30例为健康对照组.根据r-AFS将EMT分为Ⅰ期45例、Ⅱ期48例,Ⅲ期37例和Ⅳ期35例,根据痛经评分标准分为:0分53例,1分43例,2分37例和3分32例.观察异位内膜组和正常对照组的LXA4、ALDH1和PLGF水平变化及EMT患者的LXA4、ALDH1和PLGF水平与EMT分期和痛经评分的关系.结果 异位内膜组的LXA4水平明显低于正常对照组(P＜0.01),ALDH1和PLGF水平明显高于正常对照组(P＜0.01).随着EMT分期的升高和痛经评分的增加,LXA4水平明显降低(P＜0.01),而ALDH1和PLGF水平明显升高(P＜0.01).结论 LXA4、ALDH1和PLGF的异常表达与EMT的发生发展具有重要联系,联合检测对EMT的早期诊断具有重要意义.
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脂氧素A4调节Smad7/3表达对糖尿病肾脏保护机制实验研究
目的 观察脂氧素A4对链脲佐菌素诱导的实验性糖尿病大鼠肾脏Smad7/Smad3表达调节,探讨其对糖尿病大鼠肾脏保护作用及机制.方法 选择年龄3月左右、体质量212～245 g清洁级健康雄性SD大鼠,以60 mg/kg体质量链脲左菌素诱导糖尿病大鼠模型,选择制模成功的糖尿病模型大鼠20只,分为脂氧素A4给药组(E组,n=10)、生理盐水对照组(C组,n=10).E组以1 mg/kg体质量脂氧素A4,C组则以相应剂量生理盐水尾静脉注射,隔日1次,连续4周,取大鼠肾脏标本,采用免疫组织化学法观察肾脏Smad7、Smad3以及转换生长因子β1表达.结果 E组与C组Smad7、Smad3以及转换生长因子β1阳性表达面积百分率对数(ln)分别为(3.15±0.04)％与(2.96±0.03)％、(2.58％±0.05)％与(2.88±0.05)％和(2.98±0.05)％与(3.16±0.04)％,E组Smad7阳性表达面积百分率明显高于C组,而Smad3以及转换生长因子β1则明显低于C组,差异均有统计学意义(P＜0.01、0.01、0.05).结论 脂氧素A4能上调糖尿病大鼠肾脏Smad7、下调Smad3及转换生长因子β1表达,对糖尿病大鼠肾脏具有保护作用.
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大剂量盐酸氨溴索对脂多糖致小鼠急性肺损伤的影响
目的 研究大剂量盐酸氨溴索(沐舒坦)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)所致小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的治疗作用.方法 雄性BALB/C小鼠24只,采用随机数字表法随机分为3组(每组8只):生理盐水组(A组)、LPS组(B组)、LPS±沐舒坦处理组(C组).B组和C组予以LPS(2 g/L)3 mg/kg气管滴入制成ALI模型,A组予以等体积生理盐水气管滴入作为对照.6h后,C组按100 mg/kg经尾静脉注入沐舒坦,A组和B组予以等体积的生理盐水,24 h后重复给药.造模后48 h收集肺泡灌洗液,测定灌洗液中脂氧素A4、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-10、蛋白含量,并行多形核细胞计数;测定各组的肺湿/干重比、肺组织中性粒细胞髓过氧化物酶(myeloperoxidase of leukocytes,MPO)含量;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察小鼠肺组织病理形态学变化.结果 造模48 h后C组肺泡灌洗液中脂氧素A4[(332±19) ng/L] 、IL-10含量[(36±-6)ng/L]高于B组[(273±25)、(9±3)ng/L] (P＜0.01);C组TNF-α[(243±65) ng/L]、蛋白含量[(0.328±0.037) mol/L]、多形核细胞计数[(39.99±14.41)×104/ml]低于B组[(391±105) ng/L、(0.444±0.283) mol/L、(137.94±28.98)×104/ml](P＜0.01);C组肺组织湿/干重比(3.65 ±0.18)及MPO含量[(6.4±0.4)U/G]低于B组[(4.37±0.58)、(137.9±29.0) U/g)](P＜0.01);C组肺组织病理改变较B组明显减轻.结论 100 mg/kg沐舒坦对LPS所致小鼠ALI有一定治疗作用,这一作用可能与促进炎症消退有关.
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脂氧素A4抑制结缔组织生长因子诱导的系膜细胞产生Fractalkine
目的:检测结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是否诱导肾小球系膜细胞产生Fractalkine;检测脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)是否调节CTGF对合成Fractalkine的作用,并探讨其作用机制. 方法:应用CTGF刺激培养的大鼠肾小球系膜细胞,应用逆转录多聚酶链反应测定Fractalkine mRNA表达,应用酶联免疫吸附试验测定上清液中Fractalkine蛋白表达.应用趋化试验测定上清液对单核细胞(THP-1)的趋化作用.应用Western blot测定分裂原激活的蛋白激酶(p42/44 mitogen-activated protein kinase, p42/44 MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase, PI3-K)、蛋白激酶B(protein kinase B, PKB).应用凝胶电泳迁移率试验测定核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB). 结果:CTGF刺激使系膜细胞Fractalkine mRNA表达与分泌量增加,增加磷酸化p42/44 MAPK、P-PI3-K、P-PKB及NF-κB表达.P-p42/44 MAPK抑制剂PD98059抑制CTGF诱导的p42/p44 MAPK磷酸化与Fractalkine分泌.PI3-K抑制剂LY294002抑制CTGF诱导的PI3-K、PKB、NF-κB活化与Fractalkine分泌.NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pyrrolidine dithio-carbamate, PDTC)抑制CTGF诱导的NF-κB活化与Fractalkine分泌.LXA4呈剂量依赖性地抑制CTGF所致的上述变化. 结论:LXA4可抑制CTGF引起的系膜细胞分泌Fractalkine,其机制依赖于抑制p42/p44 MAPK、PI3-K/PKB的磷酸化与NF-κB活化.
关键词： 脂氧素A4 结缔组织生长因子 Fractalkine 系膜细胞 -
脂氧素A4在脑缺血再灌注中的保护作用
脂氧素A4是一种花生四烯酸代谢产物,是机体内重要的内源性抗炎介质,被称为炎症的“刹车信号”.炎症反应是造成脑缺血再灌注损伤的重要因素.脂氧素A4能通过抑制炎症反应发挥神经保护作用.此外,脂氧素A4还能降低血脑屏障通透性、减轻脑水肿和促进神经功能恢复.文章对脂氧素A4在脑缺血再灌注中的保护作用及其机制进行了综述.
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脂氧素A4对脂多糖诱导小胶质细胞内活性氧自由基生成的机制研究
目的 探讨脂氧素A4(LXA4)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠小胶质细胞株BV2细胞内活性氧自由基(ROS)生成的影响及其机制.方法 以100 ng/ml LPS刺激体外培养的BV2细胞为炎症模型.LPS组用含0.035％乙醇的无血清培养基处理30 min后,LXA4+ LPS组用含LXA4(100 nmol)的无血清培养基预处理30 min后,各亚组在相应时间点分别加入LPS(100 ng/ml).用荧光酶标仪分别检测各组ROS的荧光值.免疫印迹法检测细胞浆与细胞膜上p47 phox蛋白的表达,免疫荧光共聚焦显微镜观察BV2细胞p47 phox亚基的膜移位.结果 与空白对照组比较,LPS组10 min、20 min、30 min、60 min、6h、12 h和24 h ROS水平均显著升高(均P ＜0.05).与LPS组相应时间点相比,LXA4+ LPS组10 min、20 min、30 min、60min、6h、12 h和24hROS水平均显著降低(均P＜0.05).与LPS组比较,空白对照组、LXA4组及LXA4+LPS组胞浆p47phox蛋白表达水平均显著增高(均P＜0.05).与LPS组比较,空白对照组、LXA4组及LXA4+LPS组胞膜p47phox蛋白表达水平均显著降低(均P＜0.05).与空白对照组比较,LPS组BV2胞浆p47phox荧光值减少;与LPS组比较,LXA4组及LXA4 +LPS组胞浆p47phox荧光值增多.结论 LXA4可以抑制LPS诱导的BV2细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶亚基p47phox的膜移位及ROS的生成,对小胶质细胞发挥了抗炎症与促炎症消退的保护作用.
关键词： 脂氧素A4 脂多糖 活性氧自由基 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶 神经炎症 -
脂氧素在对乙酰氨基酚所致急性肝损伤中的保护作用及机制研究
目的 探讨脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)在对乙酰氨基酚所致肝损伤中的保护作用及可能机制.方法 100只雄性新西兰大白兔随机分为空白对照组、对乙酰氨基酚组(PCM组)、N-乙酰半胱胺酸组(NAC组)和脂氧素A4组(LXA4组)4组,每组25只.除空白组兔外给其他3组兔对乙酰氨基酚灌胃24 h后NAC组静脉注射NAC,LXA4组静脉注射LXA4,36 h后,麻醉动物取肝脏组织进行免疫组化及RT-PCR分析并检测肝组织中TNF-α和IL-10的表达,Western blot检测NF-κB p65的表达.结果 PCM组NF-κB p65的表达水平明显高于空白对照组(P＜0.01),NAC、LXA4治疗组NF-κB p65的表达显著低于PCM组且具有统计学意义(P＜0.01).对乙酰氨基酚组肝脏组织中TNF-α mRNA水平高于脂氧素A4组和空白对照组(P＜0.05).脂氧素A4组中IL-10mRNA表达水平明显高于对乙酰氨基酚组(P＜0.05).结论 脂氧素A4通过抑制对乙酰氨基酚中毒所致急性肝损伤中NF-κB p65的活化,下调促炎因子TNF-α基因的表达,促进抗炎因子IL-10基因的表达,从而控制炎症反应进程,继而发挥其肝脏保护作用.
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脂氧素A4抑制结缔组织生长因子诱导的肾小管上皮细胞表达整合素连接激酶
目的:结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)可诱导人肾小管上皮细胞HK-2表达整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK),本研究观察脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)是否调节CTGF对合成ILK的作用,并探讨其作用机制.方法:对体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞株),用不同浓度的LXA4预刺激,再加入CTGF共同孵育;或单用CTGF刺激HK-2细胞.应用RT-PCR和Western blot方法测定ILK mRNA和蛋白表达,应用Western blot法测定分裂原激活的蛋白激酶(p42/44 mitogen-activated protein kinase,p42/44 MAPK)(也称为ERK1/2)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3-K).结果:CTGF刺激使HK-2细胞ILKmRNA表达和蛋白合成增加,磷酸化ERK1/2、磷酸化PI3-K的表达增加.LXA4呈剂量依赖性地抑制CTGF所致的上述变化.结论:LXA4可抑制CTGF引起的HK-2细胞表达ILK,其机制依赖于抑制ERK1/2、PI3-K的磷酸化.
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脂氧素A4拮抗CTGF所致的人肾小管上皮细胞转分化
目的:探讨脂氧素A4(LXA4)对结缔组织生长因子(CTGF)诱导的肾小管上皮细胞HK2转分化的影响.方法:在体外培养的人肾小管上皮细胞(HK2细胞)中,加入CTGF和LXA4刺激48 h后,用倒置显微镜观察细胞形态学变化,应用RT-PCR、Western blot方法测定上皮细胞E钙黏蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA与蛋白的表达.结果:CTGF刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形,下调E钙黏蛋白mRNA与蛋白表达,上调α-SMA的mRNA与蛋白表达.LXAc能够抑制CTGF所致的上述变化,E钙黏蛋白mRNA与蛋白的相对表达值分别为0.270±0.082和0.827±0.177,分别高于CTGF刺激组的0.067±0.015(P<0.05)和0.257±0.221(P<0.05);α-SMA的mRNA与蛋白表达的相对表达值分别为0.070±0.046和0.023±0.023,分别低于CTGF刺激组的0.653±0.256(P<0.05)和0.167±0.050(P<0.05).结论:外源性CTGF能导致HK2细胞转分化为肌成纤维细胞.LXA4可抑制CTGF对HK2细胞的转分化,这为治疗肾间质纤维化提供了一条新途径.
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脂氧素A4通过激活PPARγ/Nrf2/HO-1途径保护HK-2细胞缺氧/复氧损伤
目的:探讨脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)在人肾脏近曲小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧损伤中的保护作用及可能机制.方法:LXA4预处理HK-2细胞后进行缺氧/复氧处理,CCK-8法检测细胞活性水平,ELISA法检测细胞上清液γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、氨基葡萄糖苷酶(NAG)和亮氨酸氨基肽酶(LAP)水平,羟胺法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测细胞丙二醛(MDA)水平,实时定量PCR和Western blot法分别检测HK-2细胞的过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ)和血红素加氧酶-1(HO-1)的mRNA和蛋白表达的变化,利用RNA干扰技术干扰PPARγ表达后检测HO-1和核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达.结果:LXA4预处理的缺氧/复氧组细胞活性和SOD活性明显升高,细胞中γ-GT、NAG、LAP和MDA水平降低,而加入HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)和转染PPARγ的siRNA后,LXA4对HK-2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用被阻断;此外,LXA4预处理的缺氧/复氧组HO-1、PPARγ和Nrf2表达均明显升高,并且LXA4预处理诱导的HO-1和Nrf2过表达能够被PPARγsiRNA所抑制.结论:LxA4预处理能够通过诱导HK-2细胞的HO-1高表达对抗HK-2细胞缺氧/复氧损伤,其机制与激活PPARγ/Nrf2有关.
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脂氧素A4对高氧损伤肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12的保护作用
目的:探讨脂氧素A4(LipoxinA4,LXA4)对高氧损伤肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12的保护作用及机制.方法:体外传代培养MLE-12细胞,随机分为:空气组、高氧组、高氧+LXA4组、高氧+转化生长因了(TGF)-1中和抗体组、高氧+LXA4+TGF-β1中和抗体组.倒置相差显微镜下观察各组MLE-12形态学变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)、肌腱蛋白C (tenascin-C)、TGF-βR1、TGF-βR2和Smad3的mRNA水平.Western blot检测TGF-β1/Smads信号(TGF-βR1、Smad2、Smad3、Smad4、p-Smad2和p-Smad3)蛋白表达.结果:①细胞形态:高氧组MLE-12明显失去原有正常细胞形态,细胞变圆,核固缩;药物干预组正常细胞数增多,大部分细胞形态与正常细胞形态基本相似;②细胞外基质(extracellular matrix,ECM)mRNA表达:LXA4和TGF-β1中和抗体能抑制高氧介导的collagen Ⅰ和tenascin-C mRNA的表达量升高(P＜0.05),其中高氧+LXA4+TGF-β1中和抗体组作用为显著(P＜0.05);③TGF-β1/Smads信号mRNA和蛋白含量:LXA4和TGF-β1中和抗体能抑制高氧介导的TGF-βR1、TGF-βR2和Smad3的mRNA水平以及下调TGF-31/Smads信号相关蛋白的表达量(P＜0.05),其中高氧+LXA4+TGF-β1中和抗体组细胞的表达量下调为显著(P＜0.05).结论:LXA4对高氧损伤肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12的保护可能与调控TGF-β1/Smads信号以及collagen Ⅰ和tenascin-C的表达有关.
关键词： 脂氧素A4 TGF-β1/Smads信号通路 细胞外基质 高氧损伤 -
脂氧素A4调控转化生长因子-β1干预小鼠支气管肺发育不良的机制研究
目的:探讨脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)对新生小鼠高氧诱导所致的支气管发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的保护作用及可能机制.方法:利用高氧损伤诱导BPD动物模型,将新生C57BL/6J小鼠随机分成:空气对照组、模型组、LXA4干预组、转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)中和抗体(1D11)干预组,记录仔鼠体重和生存情况,HE染色观察出生后肺组织病理改变,qPCR法检测肺纤维化指标及转化生长因子-β I型受体(transforming growth factor-β receptor 1,TGF-βR1)和转化生长因子-βⅡ型受体(transforming growth factor-β receptor 2,TGF-βR2)的表达水平.结果:①模型组新生小鼠较空气对照组体重减低且活力差.②肺组织大体标本观察:与空气对照组相比,各组小鼠肺体积减小,色泽暗淡.与空气对照组(d13)相比,LXA4干预组和1D11干预组小鼠肺外观与之相仿.③HE染色:除空气对照组外,各组肺组织均产生类似BPD的病理损伤.较模型组(d13)相比,LXA4干预组与1D11干预组的肺泡结构趋于正常化.④qPCR:与空气对照组相比,各组肺纤维化指标:纤维连接蛋白、平滑肌肌动蛋白--α、弹性蛋白、肌腱蛋白C、组织金属蛋白抑制剂-1及TGF-βR1、TGF-βR2的表达量均增加(P＜0.05).与空气对照组相比,各组基质金属蛋白酶1相对表达量减少(P＜0.05);其中与模型组相比,LXA4干预组和1D11干预组基质金属蛋白酶1表达量上调(P＜0.05),且LXA4干预组上调更为显著(P＜0.05).与空气组对照比较,模型组、LXA4干预组和1D11干预组I型胶原表达量增高(P＜0.05);其中与模型组相比,LXA4干预组和1D11干预组I型胶原表达减少(P＜0.05).结论:LXA4可能是通过抑制TGF-β1信号通路下调肺纤维化相关因子,实现对高氧诱导BPD的保护作用.
