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缺血后处理对大鼠脑缺血-再灌注中细胞凋亡的作用及其机制研究
目的 观察缺血后处理(IP)对大鼠脑缺血-再灌注(I/R)中细胞凋亡的影响,并探寻其机制.方法 开颅永久性阻断大脑中动脉+临时夹闭双侧颈总动脉法制作模型.将大鼠随机分为空白对照组(Control组)12只、假手术组(Sham组)、I/R组、IP组各48只、I/R+ caspase-3抑制剂组(I/R+ Z-DEVD-FMK组)、I/R+溶剂组(I/R+ DMSO组)各12只.通过免疫荧光及Western blot法检测细胞凋亡数、细胞色素c(cyt-c)释放及caspase-3活性.结果 IP组较I/R组TUNEL阳性细胞数减少(P＜0.05).Sham组、IP组和I/R组均有细胞呈cyt-c/TUNEL双阳性,但cyt-c阳性不全伴有TUNEL阳性.I/R组与IP组cyt-c呈双峰样释放(再灌注3h和48 h),在48 h时IP组较I/R组降低(P＜0.05).I/R组caspase-3活性在再灌注3h时开始升高,12h和24 h时高.各相应时点IP组较I/R组的caspase-3活性降低(P＜0.01和P ＜0.05).I/R+ Z-DEVD-FMK组cyt-c后期释放量小于I/R+ DMSO组(P＜0.01),但完整细胞数多于I/R+ DMSO组(P＜0.01).结论 IP可以抑制凋亡；cyt-c参与凋亡,并与caspase-3形成相互作用的反馈回路.IP对该反馈回路具有调节作用.
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银杏内酯对脑缺血再灌注大鼠线粒体ATP 敏感性钾通道的影响
目的 研究银杏内酯抗脑缺血-再灌注损伤作用与线粒体ATP敏感性钾通道(mito K-ATP)开放的关系.方法 用Longa法制作大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型.造模前静脉给予银杏内酯15 mg·kg-1 和(或)选择性mito K-ATP拮抗剂5-羟基癸酸(5-HD)10mg·kg-1 预处理,以脑梗死体积、神经缺陷评分、SOD活性和丙二醛含量评价银杏叶提取物抗脑缺血-再灌注损伤的作用与mito K-ATP开放的关系.结果 银杏内酯能够改善大鼠缺血-再灌注引起的脑功能和组织损伤,但此作用可被预先给予的5-HD减弱.结论 银杏内酯抗脑缺血-再灌注损伤作用与mito K-ATP开放有关.
关键词： 银杏内酯 线粒体ATP敏感性钾通道 脑缺血-再灌注 -
正常及脑缺血-再灌注大鼠静脉注射清开灵后黄芩苷在脑、肝、肺中的分布
目的研究清开灵注射液(QKL)中黄芩苷(BC)在生理及病理大鼠效应器官(脑、肝、肺)分布的不同.方法取正常和脑缺血-再灌注大鼠,尾静脉注射QKL 800mg·kg-1后,于不同时间点处死,取脑、肝、肺组织,HPLC-MS测定BC含量.结果静脉给药后,正常大鼠肺中BC含量明显高于肝、脑,脑部浓度低;脑缺血-再灌注大鼠脑中BC浓度较正常大鼠明显升高,肝中分布也有显著增加,但肺中BC浓度较正常组明显降低.结论QKL中BC在正常及病理大鼠的效应器官均有分布,但两种状态下分布具有明显区别,脑缺血-再灌注状态有利于BC快速透过血脑屏障.
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颅痛定对心肺复苏患者血清 NO 及 CO 浓度的影响
目的：观察心肺复苏成功患者血清 NO 和 CO 浓度的变化以及颅痛定对这种变化的影响。方法：把患者随机分为治疗组（20例）和对照组（15例），从心跳骤停到开始复苏时间以15分钟为界进一步把治疗组和对照组分为早期组和晚期组。于心肺复苏成功后第6h、24h、48h、72h 抽取病人外周静脉血，用硝酸还原酶法测定血清 NO 含量，可见分光光度计法测定 CO 含量。结果：心肺复苏后6h 血清 NO 浓度上升，24h 达高峰，随后又下降，48h 降到低谷，然后再次上升。颅通定表现出对 NO 产生的抑制作用，早期治疗组和对照组 NO 含量变化曲线几乎平行，两组 NO含量差别在6h、24h 无显著性，在48h、72h 有显著性。晚期治疗组与对照组 NO 浓度变化方向几乎相反，颅通定也表现出对 NO 生成的抑制作用，但与对照组无平行关系。晚期治疗组和对照组中任何时间段血清 NO 含量的差别均无显著性。早期对照组的 CO 浓度在复苏后6h 下降，24h 降到低谷，48h 略有上升，后又再次下降。而治疗组 CO 浓度在复苏后6h 开始上升，随后急剧下降，48h 达到低谷，然后再次上升。早期治疗组和对照组的 CO 浓度变化曲线几乎呈相反方向。晚期对照组 CO 浓度在复苏后6h 急剧下降，24h 降到低谷，随后一直上升。颅通定表现出对 CO 生成的抑制作用，治疗组从复苏后6h 到72h 几乎呈直线下降趋势。但无论是早期组或晚期组在各个时间点之间 CO浓度差别均无显著性。结论：颅通定可能通过调控心肺复苏患者体内 NO 含量发挥抗脑缺血再灌注损伤作用，且在早期复苏（≤15min）患者中作用更明显。而颅通定对心肺复苏患者体内 CO 含量的影响不明显。
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丹参酮ⅡA对I/R大鼠脑组织NF-κB和IκB活性的影响
目的:观察TanⅡA干预缺血-再灌注(I/R)大鼠脑组织病理学特征的变化,以及NF-κB、IκB的表达,研究TanⅡA对血管性痴呆的影响及其作用机理.方法:将80只大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血-再灌注7d和15 d模型组及TanⅡA低、高剂量7d和15 d组,每组10只.TanⅡA低剂量组(4 mg/kg)和高剂量组(8 mg/kg)分别于术后连续腹腔注射给药7d和15 d,1次/d,假手术组和模型组给予等体积生理盐水腹腔注射.后用HE染色观察大脑组织的病理学变化,免疫组织化学染色法检测TanⅡA处理后各组NF-κB和IκB表达水平的改变.结果:TanⅡA组脑组织病变程度较MCAO模型组有不同程度减轻,其中以15 d高剂量组改变为明显,免疫组化结果也显示模型组的NF-κB和IκB表达水平在显著高于TanⅡA组和正常对照组(P＜0.05).结论:TanⅡA能有效降低缺血-再灌大鼠模型脑组织NF-κB和IκB蛋白的表达水平,其机制可能是通过抑制NF-κB和IκB的活性和生成有效的降低大脑中炎性反应的发生,从而发挥保护大脑神经元,改善缺血-再灌脑组织损伤的作用.
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丹参酮ⅡA对脑缺血-再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达的影响
目的:研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)对缺血-再灌注(I/R)大鼠神经元的保护作用及其机制.方法:线栓法建立局灶性大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型,选取造模成功动物64只SD雄性大鼠随机分为8组,分别为正常对照组、假手术组、I/R模型24h与72 h组、I/R +4 mg/kg TanⅡA治疗24h与72 h组、I/R+8 mg/kg TanⅡA治疗24h与72 h组,TanⅡA治疗后观察各组脑组织病理学变化,免疫组化法检测脑组织Caspase-3蛋白的表达水平及TUNEL法检测脑组织凋亡细胞的数量.结果:(1)8 mg/mL TanⅡA治疗可改善I/R模型大鼠脑组织形态病理变化,减少神经细胞凋亡和坏死;(2)TanⅡA治疗组Caspase-3阳性细胞数均有下调,其中以I/R 72 h+8 mg/mL TanⅡA组为显著(P ＜0.05);(3)TanⅡA8 mg/mL治疗组可见凋亡细胞减少(P＜0.05).结论:TanⅡA可显著减轻I/R大鼠的脑组织损伤,减少Caspase-3蛋白的表达及减少细胞凋亡,进而延缓、减轻神经元在I/R损伤后的凋亡和坏死,TanⅡA对脑I/R损伤大鼠有明显的神经保护作用.
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人参皂苷Rb3对脑缺血-再灌注后大鼠脑组织中兴奋性氨基酸的作用研究
目的:探讨人参皂苷Rb3对局灶性脑缺血-再灌注损伤大鼠脑组织中兴奋性氨基酸(EAA)含量的影响.方法:将大鼠随机分成6组:假手术组、模型组、血栓通注射液(XST)组及人参皂苷Rb3 20、40、80 mg/kg组；采用线栓法使大脑中动脉闭塞(MCAO)建立大鼠局灶性脑缺血模型,于造模24 h后进行行为学评分以及检测脑组织中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)含量.结果:人参皂苷Rb340、80 mg/kg能明显减轻脑缺血再灌注损伤大鼠的行为学评分,显著降低脑组织中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)的含量(与模型组比较P＜0.05或P＜0.01).结论:人参皂苷Rb3对抗缺血性脑损伤,防止缺血时EAA的升高,从而发挥对脑损伤的保护作用.
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映山红总黄酮对脑缺血大鼠ERK通路的影响
目的:观察映山红总黄酮(TFR)对大鼠全脑缺血-再灌注损伤是否具有保护作用,以及保护作用是否与ERK信号转导通路有关.方法:采用四血管结扎法建立大鼠全脑缺血-再灌注损伤模型.记录脑缺血前、缺血10min和再灌注后5、10、15、30、45、60 min的脑电图改变；采用蛋白免疫印迹方法,测定大鼠脑皮质和海马组织中ERK1/2和p-ERK1/2在脑缺血-再灌注后表达的变化,以及TFR对此变化的影响.结果:脑缺血时大鼠的脑电图幅度迅速下降,再灌注后脑电幅度逐渐恢复.再灌注45 min和60 min时,映山红总黄酮各剂量组脑电图幅度与模型组比较差异显著(P＜0.05或P＜0.01).蛋白印迹结果显示,与模型组比较,映山红总黄酮各剂量组p-ERK1/2的表达显著性升高(P＜0.05).结论:TFR对大鼠全脑缺血-再灌注损伤有保护作用,其机制可能与增加大鼠脑组织中ERK1/2的激活有关.
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局部亚低温对大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型NKCC1 mRNA水平的影响
目的:观察局部亚低温对大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型NKCC1 mRNA表达水平的影响,探索局部亚低温的脑保护机制.方法:雄性Wistar大鼠50只,随机分成常温组和亚低温组.应用"线栓法"实现大鼠右侧大脑中动脉阻塞,2h后拔出线栓进行再灌注,于再灌注3h、12h、24h和72h处死大鼠.应用RT-PCR方法观察NKCC1 mRNA水平的变化.结果:与假手术亚组相比,缺血-再灌注亚组大鼠缺血区皮质NKCC1 mRNA水平明显升高,开始于再灌注3h,12h～24h达到高峰,72h开始下降,亚低温组各再灌注时间点NKCC1 mRNA水平均低于常温组中相应亚组的水平.结论:局部亚低温通过抑制缺血-再灌注过程中NKCC1 mRNA水平的上调发挥脑保护作用.
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电针对脑缺血大鼠神经黏蛋白mRNA表达与细胞超微结构的影响
目的 观察电针对易卒中型肾血管性高血压大鼠(stroke prone renovascular hypertensive rats,RHRSP)脑缺血-再灌注后不同时间点神经黏蛋白mRNA(neurocan-mRNA)表达、细胞超微结构的影响.方法 用环形银夹使SD大鼠的双侧肾动脉狭窄,制成RHRSP,再用线栓法制成一侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlu-sion,MCAO)模型.运用原位杂交和电镜等技术观察电针对脑缺血2 h后再灌注1、7、14、30 d大鼠脑内神经黏蛋白-mRNA表达与细胞超微结构的干预作用,并与对照组比较.结果 电针组脑缺血-再灌注7、14、30 d大鼠脑缺血区周围及海马区neurocan-mRNA表达均低于同期对照组,差异有统计学意义(P<0.05);电针组神经元、血管壁等细胞超微结构的损伤较对照各组减轻.结论 电针对RHRSP脑缺血-再灌注损伤的保护作用,可能与其下调神经抑制因子neurocan-mRNA表达、减轻细胞超微结构损害等机制有关.
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电针穴位对脑缺血-再灌注大鼠海马内MDA含量及SOD、GSH-Px活性的影响
目的:观察电针对脑缺血-再灌注损伤的防护作用及可能机制.方法:采用结扎大鼠双侧颈总动脉造成的脑缺血-再灌注损伤模型,测定电针穴位前后海马内MDA含量和SOD、GSH-Rx活性.每日电针双侧"百会"、"风池"、"大钟"及"足三里"穴30min,持续7和14 d,疏-密波频率:2～20Hz,强度:2.0 A.结果:电针能降低缺血-再灌注组大鼠海马MDA含量、提高SOD及GSH-Px活性.结论:电针穴位能提高动物脑海马内氧化酶活性、抑制自由基生成.
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葡萄糖转运体3在大鼠脑缺血/再灌注后海马中的表达
[目的]研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、海马区葡萄糖转运体3(GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达.[方法]健康雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分成3组:①缺血1 h再灌注组(MCAO1h/R)28只;②缺血3 h再灌注组(MCAO3h/R)24只;③假手术组(pseudo operation)4只.用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用Kontron IBAS2.5全自动图像分析系统检测脑梗死体积比;剥取海马区皮质组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),测定GLUT3 mRNA水平的变化;用免疫组织化学半定量测定GLUT3蛋白水平的变化.[结果]脑缺血1 h后再灌注(MCAO1h/R)较缺血3h再灌注(MCAO3h/R)脑梗死体积明显减小.MCAO1h/R组:GLUT3 mRNA在6 h有1次升高,但以后各时相均低于正常对照组.MCAO3h/R组:各时间点GLUT3 mRNA的表达均低于正常对照组,在72h、1周不能测到GLUT3 mRNA的表达.GLUT3蛋白水平的表达与mRNA相符合.MCAO3h/R组与MCAO1h/R组在相应的各时间点比较,GLUT3 mRNA降低幅度差异有统计学意义.[结论]GLUT3在缺血海马区的表达下降,可能与脑缺血再灌注损伤后神经元退变或死亡有关.
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大鼠脑缺血/再灌注过程中脑型葡萄糖转运体在缺血半影区的表达
[目的]研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、皮质半影区脑型葡萄糖转运体(GLUT1、GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达.[方法]用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用KontronIBAS2.5全自动图像分析系统检测脑梗死体积比;剥取缺血半影区皮质组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),测定GLUT1、GLUT3 mRNA水平的变化;用免疫组织化学半定量测定GLUT1、GLUT3蛋白水平的变化.[结果]脑缺血1 h后再灌注(MCAO1h/R)较缺血3 h再灌注(MCAO3h/R)脑梗死体积明显减小.MCAO1h/R组GLUT1、GLUT3mRNA缺血后升高,24 h到达高峰,但GLUT1比GLUT3提前升高,且升高的幅度更大.MCAO3h/R组GLUT1在3 h开始升高,24 h到高峰;GLUT3在缺血3 h有一下降点,然后升高,24 h到高峰,一周恢复正常,同样GLUT1比GLUT3提前升高,且升高的幅度更大.MCAO3h/R组较MCAO1h/R组的GLUT1、GLUT3峰值低.GLUT1、3蛋白水平的表达与mRNA相符合.[结论]GLUT1、GLUT3在缺血半影区的表达上调,可能是机体对缺血/再灌注损伤的保护性反应.
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凯纷预处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤的实验研究
目的 探讨COX抑制剂凯纷对脑缺血一再灌注(I/R)损伤的保护作用.方法 36只雄性SD大鼠,随机均分为三组,即A组(I/R组)、B组(I/R+凯纷10 mg/kg)、C组(I/R+凯纷15 mg/kg).采用颈内动脉丝线栓塞大脑中动脉(MCAO)模型,再灌注后24、48、72 h分别观察大鼠神经功能缺损评分(NDS评分),72 h后处死实验大鼠,取大脑切片行10g/L 2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色,测量并计算脑梗死容积百分比.结果 再灌注后24、48、72 h各组NDS评分,B、C两组明显高于A组(P<0.05),B、C组间24、48、72 h NDS评分差异无统计学意义;灌注后72 h脑梗死容积百分比B、C两组均明显低于A组(P<0.01).结论 COX-2抑制剂凯纷可明显减轻大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤.
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淫羊藿苷对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及机制研究
目的 观察淫羊藿苷(ICA)对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用并探讨其机制.方法 SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、ICA低剂量组(30 mg/kg)和ICA高剂量组(80 mg/kg),每组10只.造模前假手术组、模型组予同体积0.9％氯化钠注射液,ICA高、低剂量组分别腹腔注射80、30 mg/kg剂量的ICA2 mL.给药7d后,采用颈总动脉夹闭法制备脑缺血-再灌注损伤模型.缺血0.5 h后,再灌注24h分别检测缺血脑组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性、一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血清白细胞介素-1β(IL-1β)的含量.结果 脑缺血-再灌注24 h后与假手术组比较,模型组GSH-Px、SOD活性值差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,ICA低剂量组和ICA高剂量组大鼠脑组织GSH-Px、SOD活性明显增高,差异有统计学意义(均P＜0.01).与假手术组比较,模型组MDA含量、MPO活性、NO含量、NOS活性、TNF-α含量、血清IL-1β含量差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,Ⅰ-CA低剂量组和ICA高剂量组大鼠脑组织MDA含量、MPO活性、NO含量、NOS活性、TNF-α含量、血清IL-1β含量明显减低,差异有统计学意义(均P＜ 0.01).结论 ICA对大鼠脑缺血-再灌注损伤具有神经保护作用,其机制可能与增高GSH-Px、SOD活性、降低MDA含量,抑制自由基损伤;降低NO含量、NOS活性,抑制神经毒性损伤;降低MPO活性、TNF-α、IL-1β含量抑制炎症反应损伤有关.
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芎芪合剂对大鼠脑缺血再灌注后自由基损伤相关指标的影响
目的 探讨芎芪合剂对局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用及机制.方法 30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芎芪合剂组.建立大鼠大脑中动脉脑缺血-再灌注损伤模型,检测缺血2h再灌注24h脑组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量进行测定.结果 芎芪合剂组SOD水平与模型组比较差异有统计学意义,与假手术组比较差异无统计学意义.芎芪合剂组MDA水平与模型组比较差异有统计学意义,与假手术组比较差异无统计学意义.结论 芎芪合剂能够通过升高脑组织中SOD的含量,同时降低MDA的含量来达到抗氧自由基氧化损伤的作用,从而对缺血再灌注脑组织产生一定的保护作用.
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急救穴刺血对实验性脑缺血大鼠大脑皮层、海马区c-fos mRNA表达的影响
目的 观察急救穴刺血疗法对实验性脑缺血再灌流大鼠大脑皮层和海马c-fos mRNA的影响.方法 结扎双侧颈总动脉复制大鼠全脑缺血再灌注模型,在再灌注不同时间点取相应穴位刺血治疗,以RT-PCR法检测相关脑区c-fos mRNA含量.结果 大鼠全脑缺血后缺血+刺血组不同时间点大脑皮层和海马区c-fos mRNA表达明显增加.结论 刺血可促进脑内c-fos mRNA表达,它可能通过与DNA的结合而调节其他基因的表达,从而成为对外界各种刺激的第三信使,影响细胞的生长、分化及再生等控制而达到神经保护作用.
关键词： 脑缺血-再灌注 c-fos mRNA 急救穴 刺血 -
刺血疗法对实验性脑缺血大鼠相关脑区HSP70m RNA的影响
目的 探讨刺血疗法对实验性脑缺血再灌流大鼠相关脑区(大脑皮层和海马区)HSP70 mRNA的影响.方法 复制大鼠脑缺血再灌注模型,并取相应穴位刺血,检测HSP70 mRNA含量.结果 大鼠缺血后刺血组大脑皮层和海马区HSP70 mRNA表达明显增加.结论 刺血可促进脑内HSP70 mRNA表达,通过HSP70调节细胞膜钙离子通道而达到神经保护作用.
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芪丹通脉片对脑缺血-再灌注大鼠神经细胞凋亡及Fas-L蛋白表达的影响
目的 观察芪丹通脉片对脑缺血-再灌注大鼠神经细胞凋亡及凋亡相关基因Fas-L蛋白表达的影响.方法 采用Longa报道的线栓法制备大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型.将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和芪丹通脉片组,并予相应处理以TUNEL法检测各组大鼠脑组织神经细胞凋亡,以免疫组织化学法与医学图像分析结合的方法检测各组大鼠脑组织Fas-L蛋白的表达.结果 与假手术组相比,模型组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性神经细胞及Fas-L阳性细胞表达增多;与模型组相比,芪丹通脉片组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性神经细胞及Fas-L阳性细胞表达减少.结论 芪丹通脉片可下调Fas-L蛋白的表达,从而抑制脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,这可能是芪丹通脉片对脑缺血再灌注损伤起神经保护作用的机制之一.
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芪棱汤对脑缺血-再灌注大鼠 Caspase- 3蛋白表达的影响
目的观察芪棱汤对脑缺血再灌注大鼠 Caspase- 3蛋白表达的影响.方法采用颈内动脉线栓加环扎法复制大鼠脑缺血再灌注模型,于再灌注后不同时间点采用免疫组化法检测大鼠 Caspase- 3蛋白表达,采用 TUNEL法检测凋亡细胞数.结果补阳还五汤组与芪棱汤组 Caspase- 3蛋白表达明显低于模型组,芪棱汤组 Caspase- 3蛋白表达明显低于补阳还五汤组;补阳还五汤组及芪棱汤组均能减少缺血半暗带神经元细胞的凋亡,而以芪棱汤组尤为显著.结论芪棱汤可以通过抑制 Caspase- 3蛋白表达,减少神经细胞的凋亡,达到神经保护作用.
