在SW480细胞中沉默survivin基因抑制细胞增殖及hTERT表达

目的 观察生存素(survivin)基因干扰对SW480细胞增殖的影响,探讨其干扰对hTERT基因表达的影响及机制.方法 构建携带survivin小发夹干扰RNA的重组表达载体pGenesil-1.1-survivin,转染结肠癌SW480细胞,MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞增殖周期;荧光定量PCR和Western blot检测survivin、h TERT和Sp1的mRNA和蛋白表达,TRAP-ELISE法检测端粒酶活性.构建靶向Sp1基因的RNA干扰载体转染SW480细胞,检测hTERT基因mRNA和蛋白水平及端粒酶活性.结果 Survivin基因干扰后,SW480细胞增殖受到明显抑制,增殖抑制率为34.44％ (P ＜0.05),G0/G1期细胞增加,S期和G2/M期细胞减少(P＜0.01).hTERT和Sp1基因的mRNA和蛋白表达水平显著降低,端粒酶活性降低(P＜0.01).Sp1基因干扰后,hTERT基因的mRNA和蛋白表达水平及端粒酶活性下降(P＜0.01).结论 靶向沉默survivin基因对SW480细胞增殖有明显的抑制作用;同时下调hTERT基因表达,其机制可能与Sp1基因表达下调有关.

转录因子Sp1抑制K562细胞红系分化

目的 研究转录因子Sp1在K562细胞诱导向红系分化过程中的表达变化,并确定其对于红系分化及珠蛋白表达的影响.方法 用定量PCR及Western blot的方法确定Sp1在红系分化过程中的表达情况.通过RNAi的方法抑制Sp1的表达,并通过联苯胺染色确定K562细胞中血红蛋白的表达情况,同时定量PCR的方法分析红系分化相关基因的表达,流式细胞技术检测红系分化过程中表面标志蛋白的表达情况.结果 在hemin诱导的K562细胞以及促红细胞生成素EPO诱导的造血干细胞向红系分化过程中,Sp1的mRNA及蛋白水平均呈明显下降,提示其可能负调节红系分化过程.在K562细胞中抑制Sp1的表达则可明显提高K562细胞中的血红蛋白含量,促进γ-,ε-珠蛋白,CD71,CD235a基因的表达,同时CD71,CD235a阳性细胞比例明显增加.结论 以上结果说明转录因子Sp1负调节红系分化过程,抑制Sp1的表达可提高K562细胞中珠蛋白的表达,并促进K562细胞向红系分化.

Objective:The epithelial-mesenchymal transition ( EMT) is an important factor in the invasion and metastasis of gastric cancer, and increasing evidences have demonstrated that Sp1 play critical roles in EMT of some cancer. However, few studies indicated whether Sp1 is involved in the EMT of gastric cancer, whether abnor-mal expression of Sp1 in gastric cancer EMT is regulated in apost-transcriptional manner, and whether miRNAs are key players in this regulation. The purpose of this study is to identify miRNAs targeting Sp1 and determine theirex-pression and function in gastric cancer. Methods and Results:we examined the expression of Sp1 in gastric canc-ers, their liver metastases and para-carcinoma tissues to determine the relationship between Sp1 expression and metastasis. Quantification of Sp1 mRNA and protein levels revealed that abnormal Sp1 expression in gastric cancer and metastatic tissues is attributed toalterations in post-transcriptional regulation. We next investigated the mecha-nism by which miRNA regulates Sp1 . Using bioinformatics we identified a putative miRNA-223 target site in the 3'-UTR of the SP1 gene. This target site was validated using aluciferase reporter system and miRNA-223 expression was found to negatively correlate with Sp1 protein levels. A TGF-beta1 -dependent model of EMT was established for gastric cancer cell lines and used in conjunction with miRNA-223 and Sp1 over expression studies to determine the role of miRNA-223 in gastric cancer cell proliferation, apoptosis and invasion. The expression of EMT-associ-ated proteins was analyzed in parallel to investigate at the molecular level the role of miRNA-223/Sp1/EMT in the regulation of gastric cancer invasion. Conclusions: We demonstrate that miRNA-223, through suppression of Sp1 expression, inhibits the proliferation and invasion of tumor cells and promotes apoptosis, and thereby suppresses the EMT-associated metastasis of cancer cells.

Sp1介导雌激素上调LRP16基因表达的研究

目的:研究Sp1在雌激素上调LRP16基因表达中的作用.方法:采用ERα,Sp1特异性单抗对雌激素作用不同时间点的MCF-7细胞进行染色质免疫共沉淀,snPCR扩增沉淀DNA上LRP16基因启动子区;化学合成Sp1小干扰RNA,与pS10荧光素酶报告重组子共转染MCF-7细胞,双荧光素酶测定法检测Sp1-SiRNA对LRP16基因表达的抑制作用.结果与结论:染色质免疫共沉淀结果提示Sp1蛋白直接结合于LRp基因-213 bp至-24 bp区域,雌激素激活的ERα增强其与DNA的结合力上调LRP16基因表达;应用Sp1小干扰RNA有效抑制了LRP16基因的雌激素反应性,明确了Sp1所结合的DNA顺式元件,从反面证实了Sp1蛋白对LRP16基因启动子区域递呈E2转激活活性的增强效应.

非小细胞肺癌中Survivin和Sp1的表达及意义

目的 探讨Survivin和Sp1在非小细胞肺癌( Non-Small Cell Lung Cancer ,NSCLC )组织中的表达与组织分化程度、淋巴结转移和临床分期的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测 NSCLC患者120例手术标本和良性肺疾病患者40例手术标本中Survivin和Sp1的表达.结果 NSCLC组织中Survivin和Sp1的阳性表达率分别为81.6%(98/120)和62.5%(75/120);良性肺疾病组织中阳性表达率分别为无表达和7.5%(3/40) ,Survivin和Sp1在组织分化程度差、有淋巴结转移和临床分期为三期的NSCLC中表达显著升高;且二者表达呈正相关(rs=0.355,P=0.005).结论 Survivin和Sp1在NSCLC组织中均有高表达,且与组织分化程度、淋巴结转移和临床分期密切相关.

二氧化硅诱导巨噬细胞中核转录因子Sp1的表达活化

目的 研究二氧化硅(SiO2)刺激的巨噬细胞中核转录因子(Sp1)表达和定位的动态变化.方法 将40只健康SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组各20只.采用非暴露式气管插管,实验组每只大鼠一次性注入1 ml无菌生理盐水与SiO2混悬液(0.2 g/kg);对照组大鼠注入等量的无菌生理盐水;分别于灌注后第1、7、14、21和28天各处死4只.免疫组织化学检测体内SiO2刺激的肺巨噬细胞中Sp1蛋白表达的定位及其动态变化.体外培养小鼠腹腔巨噬细胞系(RAW264.7细胞),逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测体外SiO2刺激的巨噬细胞中Sp1 mRNA的动态变化;免疫细胞化学、Western blot法检测体外SiO2刺激的巨噬细胞中Sp1蛋白表达的定位及其动态变化.结果 实验组与对照组比较,肺巨噬细胞中Sp1蛋白表达上调,于第14天达高峰;体外SiO2作用RAW264.7细胞30～960 min,Sp1 mRNA表达明显升高,呈现先升高而后下降的趋势,峰值位于240 min;Sp1总蛋白和核蛋白表达亦呈现先升高而后下降的趋势,总蛋白表达峰值位于240 min,核蛋白峰值位于480 min;Sp1蛋白于120 min开始发生明显的核移位,480 min时核移位明显.结论 SiO2能激活巨噬细胞中Sp1,Sp1可能在矽肺的发生发展过程中起重要的调控作用.

Survivin与Sp1关系研究进展

Survivin是近年来发NN一凋亡抑制基因,属凋亡蛋白抑制因子家族的新成员.Survivin在正常组织中不表达,高度表达于人类肿瘤组织.其功能复杂,可直接或间接抑制细胞调亡.Sp1是Sp1-like/KLF家NN一员,在多种组织中广泛表达,参与多种基因的转录调控,在保证管家基因、组织特异性表达基因和病毒基因正确表达过程中有重要作用.本文就近年来Sp1与Survivin关系进展作一综述.

胃腺癌中Sp1的表达与临床病理参数关系的研究

目的 研究转录因子Sp1在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达特征,并探讨其与临床病理参数之间的关系.方法 用免疫组织化学SP法,检测63例胃腺癌组织、19例胃黏膜不典型增生组织及10例因胃良性病变行部分切除的正常胃黏膜组织中Sp1的表达.结果 Sp1在胃癌组织中的阳性表达率为59%,明显高于在胃黏膜不典型增生组织(21%)及正常胃黏膜组织(10%)中的表达率,差异具有统计学意义(P<0.05).Sp1蛋白的表达与肿瘤的浸润深度及TNM分期、淋巴结转移密切相关.结论 Sp1蛋白对胃癌的发生发展起重要作用,检测其蛋白表达水平对于评价患者的预后有一定价值.

miR-124靶向Sp1对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的调控

目的 探讨miR-124是否能够通过靶向抑制Sp1基因调控入骨肉瘤MG-63细胞的增殖.方法 利用荧光素酶报告基因实验验证Spl基因是否为miR-124的靶基因,应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-124 mimics或inhibitor转染至MG-63细胞,利用real-time PCR和Western blotting分析转染后MG-63细胞Sp1 mRNA和蛋白表达的变化,通过MTT法分析转染后MG-63细胞增殖水平变化.结果 荧光素酶报告基因实验证实Sp1基因为miR-124的靶基因.与对照组相比,转染miR-124 mimics后,MG-63细胞Sp1 mRNA与蛋白的表达均显著降低,增殖能力明显下降(P＜0.01);与对照组相比,转染miR-124 inhibitor后,MG-63细胞Sp1mRNA与蛋白的表达均显著升高,增殖能力明显升高(P＜0.01).结论 miR-124抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖可能与靶向Sp1基因相关.

TNF-α抗体对Sp1和NF-κB p65在兔粘连腹膜表达的影响

目的 探讨TNF-α抗体对实验兔腹膜损伤粘连修复演变过程中核转录因子Sp1和NF-κ B p65活化的影响.方法 实验兔随机分3组:正常对照组(不做任何处理)、模型组(腹膜腔内注入生理盐水)、TNF-α抗体组(造模后后腹膜腔内注入TNF-α抗体),每组30只,共90只.建立实验兔腹膜回盲部手术动物模型,ELISA检测腹水Sp1、NF-κB p65的表达,Masson染色检测Sp1在腹膜的表达、免疫组化SP法检测NF-κB p65在腹膜的表达,监测腹膜粘连分级变化.结果 TNF-α抗体导致Sp1和NF-κB p65在损伤腹膜和腹水中的表达水平显著减低(P＜0.01),并有效减轻腹膜粘连形成.结论 TNF-α抗体有效减轻腹膜粘连形成可能与其下调Sp1和NF-κB p65表达相关.

NAC壳聚糖膜干预大鼠腹部术后腹膜核转录因子Sp1和NF-κB的表达

目的 探讨NAC(N-乙酰半胱氨酸)生物膜对大鼠腹膜损伤粘连修复演变过程中核转录因子Sp1和NF-κB活化的影响.方法 建立大鼠腹部回盲部手术动物模型,术中腹膜创面覆盖留置NAC壳聚糖多孔膜,术后腹腔镜连续观测、提取相应腹膜粘连组织,监测腹膜粘连分级变化.大鼠分4组:正常腹膜组,腹膜损伤组(无生物膜覆盖处理),NAC壳聚糖多孔膜组,壳聚糖多孔膜组,每组40只.应用EMSA方法检测Sp1含量,Western blot检测NF-κB,Masson染色法检测Sp1和SP染色法检测NF-κB表达.结果 腹膜损伤导致Sp1和NF-κB被激活,壳聚糖多孔膜和NAC壳聚糖多孔膜覆盖损伤的腹膜可以一定程度抑制Sp1和NF-κB的表达.在抑制Sp1和NF-κB表达方面,NAC壳聚糖多孔膜显著优于壳聚糖多孔膜.NAC壳聚糖膜组比壳聚糖膜组更显著减低粘连级别(P＜0.05或P＜0.01).结论 NAC壳聚糖生物膜可显著下调核转录因子Sp1和NF-κ B表达,并有效减轻腹膜粘连形成.

Ⅰ型胶原α1 Sp1多态性与骨密度和骨折关联性的Meta分析

背景：到目前为止，多项研究已经对Sp1多态性对骨质疏松和骨折的风险做出了评估。有报道称这种多态性与骨密度降低和骨折有密切联系，但也有研究称未发现类似联系，这些结果导致了很大的争议。目的：通过仅纳入病例对照研究的Meta分析来评价Ⅰ型胶原α1 Sp1多态性对骨密度和骨折的影响。方法：检索MEDLINE，EMBASE，PubMed数据库有关Ⅰ型胶原α1 Sp1对骨密度和骨折影响的病例对照研究，计算合并效应值比值比(ORs)及其95%可信区间(95%CI)。并对异质性和偏倚进行评估。结果与结论：共32篇文献符合纳入标准。其中有22项研究评价了Sp1多态性对骨折的影响，在5个基因模型中均可发现 Sp1多态性与骨折危险性有关联，但在亚组分析中，仅在欧洲人群有类似结果。有13项研究评价了Sp1多态性对骨密度降低的影响，结果发现Sp1与骨密度降低有密切关系，亚组分析在欧洲和美洲人群中有类似结果，但是在亚洲人群中并无类似发现。总体来说，Ⅰ型胶原α1 Sp1多态性是骨折和骨密度降低的危险因素，但也存在地区即地理性差异性。

环氧合酶－2抑制剂降低结肠癌细胞血管内皮生长因子表达的影响及机制

目的：探讨选择性环氧合酶（ COX）－2抑制剂celecoxib影响结肠癌HT－29细胞血管内皮生长因子（ VEGF）表达的机制。方法体外培养结肠癌HT－29细胞，采用MTT法检测celecoxib对HT－29细胞增殖的影响。同时针对Sp1和Sp4进行RNA干扰，应用RT－PCR和Western印迹法联合检测celecoxib组和干扰组对HT－29细胞Sp1、Sp4和VEGF mRNA和蛋白表达的影响。结果随着药物浓度的增加（5、10、20、40和80μmol／L）和作用时间的延长（2、4、8、16和32 h），celecoxib 对 HT－29细胞的增殖具有显著抑制作用，在2、4、8、16和32 h 时的半数抑制浓度（IC50）分别为40．36、33．15、31．67、30．94和31．54μmol／L。 RT－PCR和Western印迹检测显示，celecoxib可显著降低HT－29细胞Sp1、Sp4和VEGF mRNA和蛋白的表达水平，同时经RNA干扰Sp1（Sp4）后，HT－29细胞Sp1（Sp4）和VEGF mRNA和蛋白的表达水平明显降低，但 Sp4（Sp1）mRNA和蛋白表达变化不明显。结论 celecoxib可抑制结肠癌HT－29细胞增殖，其作用机制可能是通过下调Sp1和Sp4表达水平而降低结肠癌细胞中VEGF的表达水平。

晶状体上皮源性生长因子对MGARP基因的调控作用研究

目的:研究HEK-293T细胞中晶状体上皮源性生长因子(lens epithelium-derived growth factor,LEDGF)对富含酸性氨基酸的线粒体定位蛋白(Mitochondria-localized Glutamic Acid Rich Protein,MGARP)基因表达的调控作用.方法:将不同剂量的含有LEDGF基因的载体,转入HEK-293T细胞中,通过Western blot和启动子报告分析检测的方法,检测细胞内MGARP的表达水平.并采用LEDGF和Sp1共同转染的方法,来检测二者对MGARP转录活性的协同调控作用.结果:与空载体对照组相比,随着含有LEDGF基因载体剂量的增加,HEK-293T细胞内MGARP的表达也明显上调(P＜0.05),同时共同转染LEDGF和Sp1后,细胞内MGARP的转录活性比单独过量表达LEDGF或者Sp1的转录活性明显增高(P＜0.05).结论:在HEK-293T细胞中,LEDGF可以调控MGARP的表达,而且,LEDGF和Sp1对MGARP的调控具有协同作用.

转录因子Sp1及其与肿瘤的关系

转录因子Sp1是一种序列特异性的DNA结合蛋白,可调控某些启动子中富含GC/GT序列的细胞核病毒基因的转录过程,参与多种生理和病理过程的调控.Sp1蛋自在肿瘤组织中的异常表达和活化可参与调控肿瘤的增殖、血管生成和转移潜能.

转录因子SP1调控血管平滑肌细胞表型转化在主动脉夹层发病中的作用

目的:探讨转录因子SP1在主动脉夹层组织中的表达情况及与主动脉夹层血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的关系. 方法:收集人主动脉夹层血管壁组织(n=10)及正常主动脉壁组织(n=4),分别采用RT-PCR和Western blot检测主动脉壁组织中SP1和收缩型VSMC表型标志物SM22α的mRNA和蛋白表达水平;体外培养正常人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC),以转染SP1过表达腺病毒(Ad-SP1)的HA-VSMC为Ad-SP1组,以转染仅表达荧光蛋白腺病毒(Ad-GFP)的HA-VSMC为对照组,分别采用RT-PCR和Western blot检测转染后HA-VSMC中SM22α mRNA和蛋白表达水平.结果:与正常主动脉壁组织相比,人主动脉夹层血管壁组织中SP1 mRNA(3.81±2.84对0.91±0.67,P＜0.05)和蛋白(2.09±0.32对0.90±0.09,P＜0.05)表达水平均明显升高,SM22α mRNA(0.39±0.20对1.01±0.51,P＜0.05)和蛋白(0.75±0.10对1.01±0.09,P＜0.05)表达水平均明显下降;腺病毒转染HA-VSMC后,与对照组相比,Ad-SP1组中SM22α mRNA(0.36±0.03对0.95±0.11,P＜0.05)和蛋白(0.84±0.11对1.06±0.06,P＜0.05)表达水平均明显下降. 结论:转录因子SP1在主动脉夹层组织中表达水平升高,与VSMC表型转化密切相关,参与主动脉夹层的发病过程.

腺苷酸活化的蛋白激酶通过SP1抑制下丘脑GT1-7神经元KiSS-1基因表达的机制研究

在GT1-7细胞用实时定量PCR检测腺苷酸活化的蛋白激酶(AMPK)对KiSS-1mRNA水平的影响,以报告基因技术检测KiSS-1基因启动子的活性,用Western印迹法检测AMPK对转录因子SP1蛋白表达及其在亚细胞中分布的影响.结果显示,AMPK能降低GT1-7细胞KiSS-1mRNA的表达水平,并能抑制KiSS-1基因的启动子活性；SP1能够增强KiSS-1基因的启动子活性；AMPK能够抑制SP1向细胞核的转位.提示AMPK可能通过抑制转录因子SP1的转位而降低KiSS-1基因的表达.

无精,少精人群中新的与UBE2B相关的多态性

目的:评定UBE2B基因的异常是否存在于男性不育人群中,建立所有已发现的UBE2B突变的生物学合理性.方法:在一组可育和不育男性人群中针对UBE2B基因5’非翻译区和6个外显子(包括之间的内含子区域)进行PCR扩增和序列分析.鉴定出一个10个CGG重复区内存在一个或两个三联体缺失的公认启动子区域后,我们通过DNA-蛋白凝胶迁移试验来比较这种多态性序列和野生型序列与转录因子SP1的结合力.结果:在5%不育男性中发现,在第四外显子上存在一个新的外显子区域的单核苷酸多态性(SNP)位点.计算机模拟建立的蛋白3D结构模型显示一个无关的异亮氨酸变成了缬氨酸.在其它的外显子中未发现其它的突变.在生育能力正常的男性组中发现了三个新的内含子区域的SNP位点,在不育男性组中发现了7个新的内含子区域的SNP位点.DNA-蛋白凝胶迁移试验发现,与野生型相比,CGG的单一或双缺失,与SP1的结合能力大约提高两倍.阴性对照表明没有其它非特异蛋白的结合.结论:CGG的单一或双缺失本身可能没有生物学意义,但是这种启动子区域的缺失与增强SP1的结合力相关,可能是造成UBE2B基因表达变化的原因之一.

抑癌基因LKB1对肺癌细胞血管内皮生长因子的表达调控

目的:了解抑癌基因LKB1对肺癌细胞A549血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的调控作用.方法:应用巢式PCR方法扩增LKB1基因编码区,构建LKB1的真核表达载体并以脂质体法转染A549细胞,G418筛选稳定表达细胞株;RT-PCR及Western印迹法检测LKB1、SP1和VEGF在A549细胞中的表达变化;siRNA技术干扰转录因子SP1的表达,RT-PCR及Western印迹法检测SP1和VEGF的表达变化.结果:外源性LKB1在A549细胞中稳定表达;LKB1蛋白下调SP1和VEGF的表达;SP1可被特异性siRNA分子有效抑制,siRNA介导的SP1沉默伴随VEGF表达下调.结论:LKB1可能通过负调控转录因子SP1的表达从而调控VEGF的表达.

大鼠失血性休克及复苏后肝脏EPHX2和Sp1基因表达的变化

目的 观察失血性休克及复苏对大鼠肝脏EPHX2基因及预测转录因子Sp1表达的影响.方法 通过软件预测EPHX2转录因子,筛选出Sp1为研究对象.将25只SD大鼠随机平均分为5组:对照(CON)组、失血性休克(HS)组、休克复苏1 h( HSR1)组、休克复苏3 h(HSR3)组、休克复苏6 h(HSR6)组.采用real-time RT-PCR和蛋白质印迹法检测大鼠肝脏中EPHX2和Sp1的表达.结果 HS、HSR1、HSR3、HSR6组EPHX2 mRNA表达低于对CON组(P＜0.05),HSR1、HSR3、HSR6组EPHX2 mRNA表达低于HS组(P＜0.05),HSR1组EPHX2 mRNA表达低于HSR3、HSR6组(P＜0.05).CON组Sp1 mRNA表达和其他组比较差异无统计学意义(P＞0.05),HS、HSR1组Sp1 mRNA表达低于HSR6组(P＜0.05).HSR1、HSR3、HSR6组EPHX2蛋白表达较CON组降低(P＜0.05),Sp1蛋白在各组间表达差异无统计学意义.结论 失血性休克可引起肝脏EPHX2基因表达下调,而复苏不能快速逆转这种趋势;失血性休克及复苏对预测转录因子Sp1表达没有影响.