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RI-1对MSH2缺陷结直肠癌细胞系的杀伤作用
目的探讨RAD51抑制剂RI-1对MSH2缺陷结直肠癌细胞系的杀伤作用及可能的作用机制.方法Western blot法筛选MSH2差异表达的结直肠癌细胞系,MTT法检测不同结直肠癌细胞系对RI-1(10、20、30、40 或50 μmol/L)的敏感性;构建针对MSH2基因的重组shRNA慢病毒表达载体并感染HT29细胞.RI-1(40 μmol/L)处理细胞,流式细胞术检测细胞凋亡的变化;单细胞凝胶电泳实验分析细胞内DNA损伤情况;细胞免疫荧光法检测γ-H2AX foci的形成.结果与对照组相比MSH2缺陷的HCT8细胞有明显细胞凋亡现象(P<0.01);HCT8细胞和HT29 Shmsh2细胞尾部DNA含量、尾长和尾距均较对照组明显增加(P<0.05);HCT8细胞和HT29 Shmsh2细胞内γ-H2AX foci的形成数量较对照组明显增加(P<0.01).结论RAD51抑制剂RI-1可能通过增加细胞内DNA损伤参与RI-1对MSH2缺陷肿瘤的杀伤作用.
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错配修复蛋白 MSH2和 MSH6在宫颈癌中的表达及意义
目的：检测错配修复蛋白 MSH2和 MSH6在宫颈癌前病变组织和宫颈鳞癌组织中的表达，并探讨其与宫颈癌的相关关系。方法应用免疫组化 SP 法检测23例慢性宫颈炎、63例宫颈上皮内瘤变（CIN）及63例宫颈鳞癌组织中错配修复蛋白 MSH2和 MSH6的表达情况。所有数据采用 SPSS 19.0软件进行统计分析。结果错配修复蛋白 MSH2和 MSH6在慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ和宫颈鳞癌组织中的阳性表达率均逐渐增高。MSH2的表达依次为21.74%（5/23）、27.27%（6/22）、63.41%（26/41）和66.67%（42/63）；MSH6的依次为26.08%（6/23）、31.82%（7/22）、65.85%（27/41）、73.02%（46/63）；二者在各组的表达差异均具有统计学意义（P＜0.05）。 MSH2和 MSH6的表达与国际妇产科联盟（FIGO）临床分期、年龄、肿瘤大小及淋巴结转移无关，差异无统计学意义（P＞0.05）；但与宫颈鳞癌的病理分化程度有关，分化程度越低，蛋白的阳性表达率越高，且差异有统计学意义（P＜0.05）。结论错配修复蛋白 MSH2和 MSH6的表达与宫颈鳞癌的发生发展关系密切，在一定程度上反映宫颈癌的恶性程度，为宫颈癌的检测和治疗提供临床参考。
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MLH3和MSH2遗传变异与直肠癌患者术前同步放化疗敏感性和生存的关系
目的 探讨DNA错配修复基因MLH1、MLH3和MSH2遗传变异与局部进展期直肠癌患者术前同步放化疗敏感性及预后的关系.方法 采用Sequenom MassARRAY平台检测146例接受术前同步放化疗直肠癌患者MLH1、MLH3和MSH2基因14个标签SNP位点(htSNP)的基因型,并分析其与患者术前同步放化疗敏感性和总生存时间的关系.采用非条件Logistic回归模型和Cox比例风险回归模型计算影响局部进展期直肠癌患者术前同步放化疗敏感性和预后的独立影响因素.结果146例患者均接受卡培他滨和奥沙利铂双药的术前同步放化疗,其中敏感组64例,抵抗组82例.关联分析结果显示,MLH3基因的rs175057 C＞T和MSH2基因的rs13019654 G＞T变异与术前同步放化疗敏感性明显相关.与携带rs175057 CC基因型患者比较,携带CT和TT基因型患者对同步放化疗的敏感性增加,治疗抵抗风险降低(OR＝0.42,95％CI为0.19～0.91,P＝0.029).与携带rs13019654 GG基因型患者比较,携带GT和TT基因型患者对同步放化疗的敏感性增加,治疗抵抗风险降低(OR＝0.49,95％CI 为 0.24～0.98,P＝ 0.047).rs1540354、rs4026175、rs1981929、rs2042649、rs2303428、rs3771273、rs4608577、rs4952887、rs6544991、rs6544997、rs10188090和rs10191478与术前同步放化疗的敏感性未见明显相关.多因素生存分析结果显示,MLH3基因的rs175057 C＞T变异延长直肠癌患者的总生存时间,降低患者死亡风险(HR＝0.44,95％CI 为 0.20～0.96,P＝0.038); MSH2 基因的rs3771273 T＞A、rs10188090 A＞G、rs10191478 T＞G变异缩短直肠癌患者的总生存时间,增高患者死亡风险(HR＝1.74,95％CI为1.06～2.84,P＝0.028;HR＝1.64,95％CI为1.01～2.66,P＝0.046;HR＝1.71,95％CI为1.01～2.91,P＝0.047).rs1540354、rs4026175、rs1981929、rs2042649、rs2303428、rs4608577、rs4952887、rs6544991、rs6544997和rs13019654与患者的总生存时间未见明显相关.结论 MLH3基因的rs175057和MSH2基因的rs13019654为影响局部进展期直肠癌患者术前同步放化疗敏感性的独立因素,MLH3基因的rs175057和MSH2基因的rs3771273、rs10188090、rs10191478可能是预测局部进展期直肠癌患者术前同步放化疗预后的遗传标志,对于直肠癌患者的个性化治疗具有潜在价值.
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鼻咽刷洗物MSH2基因甲基化在鼻咽癌早期诊断及预后判断中的作用
目的 探讨鼻咽刷洗物检测MSH2基因甲基化在鼻咽癌早期诊断及预后判断中作用.方法 运用甲基化特异性PCR检测54例鼻咽癌患者、18例慢性鼻咽炎患者和20例健康志愿者配对鼻咽部组织及鼻咽刷洗物中MSH2基因启动子区甲基化情况.结果 鼻咽癌患者鼻咽部癌组织MSH2基因甲基化频率75.9％ (41/54),鼻咽刷洗物70.4％ (38/54);而在慢性鼻咽炎患者和健康志愿者鼻咽部组织及鼻咽刷洗物中均未检测到MSH2基因启动子甲基化.鼻咽癌组织与鼻咽刷洗物中MSH2基因甲基化密切相关(r=0.87),MSH2基因甲基化与患者临床病理特征无明显相关关系.结论 鼻咽刷洗物检测MSH2基因甲基化具有肿瘤特异性,对早期诊断鼻咽癌有一定的临床应用价值,但目前尚不能作为判断鼻咽癌临床预后预测指标.
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PCNA、MSH2和Fas-L基因在肺癌组织中的表达及意义
目的:探讨判定肺癌患者预后的分子生物学指标.方法:通过免疫组织化学方法观察PCNA、MSH2和Fas-L在肺鳞癌、腺癌、小细胞癌中的表达.结果:在肺鳞癌、腺癌和小细胞癌中PCNA、Fas-L表达高于正常组(P＜0.01),小细胞癌PCNA和Fas-L表达高于鳞癌、腺癌(P＜0.05);而鳞癌与腺癌比较差异无显著性(P＞0.05).MSH2在三种癌之间及三种癌与正常组之间差异无显著性(P＞0.05).结论:PCNA和Fas-L可作为判断预后的分子生物学指标.
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MLH1/MSH2在散发性结直肠癌中的表达及其与预后的关系
目的:探讨Ⅱ～Ⅲ期散发性结直肠腺癌组织中错配修复基因MLH1 (MutL homolog1)和MSH2 (MutS homolog 2)的表达及其临床意义.方法:收集2014年1月--2016年4月在南京市中医院就诊的490例Ⅱ～Ⅲ期散发性结直肠癌根治术后患者的组织标本及随访资料.应用免疫组织化学法检测结直肠癌组织中MLH1和MSH2的表达,分析MLH1和MSH2表达与结直肠癌患者临床特征及预后的关系.结果:结直肠癌组织中MLH1/MSH2表达缺失率为20.41％ (100/490). MLH1/MSH2表达缺失与肿瘤分化程度、肿瘤部位、有无黏液和淋巴结转移数有关(P值均＜0.05), MLH1/MSH2缺失多见于低分化癌、右半结肠、伴有黏液和1～3个淋巴结转移的患者.MLH1/MSH2表达缺失患者的中位无病生存期(disease-free survival,DFS)长于MLH1/MSH2表达正常的患者(33.9个月 vs 30.4个月,P＜ 0.001).肿瘤位于右半结肠、低分化癌、 TNMⅢ期、淋巴结转移数≥4个、有黏液、切缘阳性和MLH1/MSH2表达正常的患者预后较差(P值均＜0.05).肿瘤分化程度、肿瘤部位、有无黏液、切缘是否阴性及MLH1/MSH2表达是Ⅱ～Ⅲ期散发性结直肠癌患者术后预后的独立影响因素(P值均＜0.05).结论:Ⅱ～Ⅲ期散发性结直肠癌组织中存在MLH1/MSH2表达缺失,并且是结直肠癌患者预后的独立影响因素.
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错配修复基因hMSH2在宫颈腺癌组织中的表达
目的:探讨hMSH2基因在人宫颈腺癌组织中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测36例宫颈腺癌组织中错配修复基因hMSH2蛋白的表达.结果:36例宫颈腺癌组织中10例hMSH2呈阴性(28%),26例为阳性表达(72%),且与肿瘤分化程度相关,分化程度越低阳性率越低(P＜0.05),hMSH2的表达与肿瘤组织学类型和FIGO分期未见明显关系(P＞0.05).结论:hMSH2基因与宫颈腺癌的发生、发展及分化有关.
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食管鳞癌组织中FHIT和MSH2 mRNA的检测与分析
目的 探讨FHIT和MSH2在食管鳞状细胞癌中的作用及其临床意义.方法 采用原位杂交的方法检测62例食管鳞癌组织及62例正常食管黏膜组织中mRNA的表达.结果 食管鳞癌癌变过程中FHIT在癌组织中mRNA的表达率低于正常黏膜组织,组问比较差异具有统计学意义;食管鳞癌组织中MSH2 mRNA表达低于正常黏膜组织,但组间比较差异无统计学意义.FHIT和MSH2的mRNA的表达呈正相关关系.结论 联合检测FHIT和MSH2的表达有可能成为早期诊断食管癌和判断预后的分子指标之一.
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单链构象多态性分析和变性高效液相色谱分析技术检测hMLH1和hMSH2基因突变的比较
目的 比较单链构象多态性分析(SSCP)和变性高效液相色谱分析技术(DHPLC)应用于遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)分子遗传学诊断的灵敏性和特异性.方法 应用PCR-SSCP和DHPLC方法分析经测序验证有序列变异的7个家系的所有成员的相应PCR扩增产物.分别计算SSCP和DHPLC的灵敏度和特异度.结果 应用SSCP对hMLH1和hMSH2进行基因突变筛查的敏感性和特异性分别为51.6%和66.6%:而应用DHPLC进行基因突变筛查的敏感性和特异性则分别为100%和93.3%:两种方法进行基因突变筛查的结果差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DHPLC进行基因突变筛查的敏感性和特异性均高于SSCP,是理想的分子遗传学检测方法.
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错配修复基因hMSH2表达低下与人群肺癌发病的关系
目的:为探讨错配修复基因hMSH2与人群肺癌发病的关系而进行本研究.方法:用RT-PCR技术检测150例肺癌组织、40例正常肺组织、50对肺癌病例和对照外周血单个核细胞中hMSH2基因的mRNA表达;用免疫组化检测P53、C-MYC、K-RAS、BCL-2和hTERT等基因的蛋白表达;并分析有关暴露因素和肺癌的临床特征对修复基因hMSH2表达的影响,以及hMSH2基因与P53、C-MYC、K-RAS、BCL-2和hTERT等癌变相关基因的关系;用Logistic回归模型分析上述基因在肺癌发病中的作用.结果:32.0%(48/150)的肺癌组织和5.0%(2/40)的正常肺组织存在hMSH2基因表达低下;16.0%(8/50)的肺癌病人外周血和2%(1/50)的正常人外周血单个核细胞也可检出hMSH2基因表达低下.分析各种暴露因素和临床特征时hMSH2基因表达的影响,未发现与该基因表达相关的因素.但发现P53突变蛋白的过度表达与hMSH2表达低下有一定的关联,P值为0.02.hMSH2与C-MYC、K-RAS、BCL-2和hTERT基因的表达无显著性关系,P皆＞0.05.多因素Logistic回归分析表明,吸烟、P53突变蛋白、K-RAS癌基因蛋白和hTERT基因的过度表达是肺癌的危险因素,DNA修复基因hMSH2的正常表达是肺癌的保护因素,调整性别、年龄、吸烟状态和其他基因的影响后,hMSH2表达低下与发生肺癌的危险度OR值为9.17(1.31,64.09),P=0.035.结论:DNA修复基因hMSH2的正常表达在肺癌发生中起着重要的保护作用,该基因的低表达可作为判断肺癌易感性的标志.
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错配修复蛋白表达异常在低龄子宫内膜癌中的意义
目的 探讨MLH1和MSH2蛋白在低龄子宫内膜癌中的表达缺失情况,为HNPCC家系的筛选提供线索.方法 应用免疫组化方法检测65例年龄≤50岁子宫内膜癌患者中MLH1和MSH2蛋白的表达.结果 MLH1蛋白表达异常的为19例,占29.2%;MSH2蛋白表达异常的为2例,占6.2%;MLH1和MSH2蛋白二者表达均异常为3例;MMR蛋白表达缺失的总检出率为30.8%(20/65).结论 MMR蛋白在低龄子宫内膜癌中表达缺失率较高,以MLH1表达异常为主.免疫组化检测MMR基因的表达也可能成为筛选HNPCC家系的一种简单、重要的分子生物学方法.因此把低龄子宫内膜癌作为癌家族成员纳入HNPCC初筛范围,是很有价值的.
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DNA错配修复基因甲基化在H446细胞获得性耐药中的作用
目的 探讨DNA错配修复基因MLH1(human MutL homolog1)、MSH2(human MutS homolog 2)甲基化在人小细胞肺癌H446细胞获得性耐药中的作用.方法 RT-PCR及Western blot法检测H446细胞及其多药耐药细胞H446/DDP中MLH1、MSH2基因的mRNA表达和蛋白表达,甲基化特异性PCR(MSP)法检测MLH1、MSH2基因启动子CpG岛甲基化状态.结果 H446/DDP细胞中MLH1、MSH2基因的mRNA及蛋白水平均较H446细胞显著降低(P＜0.01),且其启动子甲基化程度明显增强.结论 DNA错配修复基因MLH1、MSH2启动子甲基化诱导其表达下调可能是人小细胞肺癌获得性耐药的重要机制之一.
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乳腺癌组织中错配修复基因MSH2和细胞周期蛋白D1表达的相关性及其意义
目的 探讨乳腺浸润性导管癌中错配修复基因MSH2蛋白的表达与细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达的关系及意义.方法 制作组织芯片用免疫组织化学方法检测67例乳腺浸润性导管癌标本中MSH2和CyclinD1蛋白的表达.结果 67例乳腺浸润性导管癌组织中,MSH2蛋白的阳性表达率为53.7％ (36/67),CyclinD1蛋白的阳性表达率为47.8％(32/67).MSH2和CyclinD1蛋白表达均与淋巴结转移状态相关(P＜0.05).MSH2和CyclinD1表达呈负相关(r=-0.251,P=0.040).结论 CyclinD1可能通过下调MSH2蛋白水平,影响DNA错配修复系统而促进乳腺癌的发生和发展.
