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26280例结直肠癌患者MLH1和PMS2基因表达情况及临床病理特征的多中心回顾性研究
目的 研究MLH1和PMS2蛋白表达情况与临床病理特征.方法 本研究纳入2010年1月至2018年12月包括中国医学科学院肿瘤医院在内7家医院的结直肠癌数据平台的患者205071人次,其中26280例免疫组化信息和病例信息满足研究标准.分析MLH1和PMS2基因蛋白表达情况与患者发病年龄、性别、肿瘤大小、病理分期等因素的关系.结果 MLH1缺失率4％,PMS2缺失率3.25％.两种蛋白表达缺失的患者男女比例差异存在统计学意义(均P<0.05),其发病年龄均小于正常表达组患者(均P<0.0001).其第二原发癌的发病率也高于正常表达组(均P<0.0001).MLH1和PMS2蛋白表达缺失的患者肿瘤大径大于正常表达组(均P<0.0001),清扫淋巴结总数目也高于正常表达组(均P<0.0001).此外,与正常组相比,MLH1表达缺失组呈现明显家族聚集倾向(P=0.001).而在部位上,肿瘤部位发生在右半结肠的患者数据显示,MLH1和PMS2蛋白缺失的发生率高于蛋白表达正常组.肿瘤分期方面,MLH1和PMS2蛋白的T分期在表达缺失组与正常组差异具有统计学意义(均P<0.0001),M分期中,PMS2蛋白缺失患者的远处转移率低于正常组患者(P=0.0008).结论 MLH1与PMS2表达缺失的患者发病年龄更早,肿瘤体积大,右半结肠比例相对较高,第二原发癌的发生率更高,伴有更高的淋巴结清扫数目,且与病理分期存在密切关联.
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BRAF基因突变对结肠癌伴随胃癌发生的影响
目的 研究BRAF基因突变与结肠癌伴随胃癌,以及PRDX1和PRDX6基因表达量的关联,分析PRDX1和PRDX6基因在结肠癌伴随其它原发癌症中的作用.方法 收集47例患有结肠癌与伴随胃癌病人的样本,通过PNAClampTM突变检测试剂盒检测样本中BRAF和MLH1基因的突变情况,利用卡方检验比较突变与相关特征的关系.通过qPCR和蛋白质印迹检测BRAF突变样本中的PRDX1和PRDX6的表达量变化.通过人类HCT-116结肠癌细胞中转入带有BRAF突变的质粒,研究细胞系水平BRAF突变对PRDX 1和PRDX6表达量的影响.结果 BRAF的突变在不同年龄、癌症位置、多发癌时间间距、癌症数量或者家庭癌症史之间差异无显著性(P＞0.05);而MLH1的突变在不同多发癌时间间距、癌症数量和家庭癌症史之间,差异有显著性(P＜0.05).PRDX1和PRDX6表达水平与BRAF突变程度及不同结肠癌伴随的原发癌数量之间差异有显著性(P＜0.05),PRDX1和PRDX6基因可能是BRAF突变抑制的目标.结论 结肠癌伴随胃癌的多种原发性癌症中BRAF突变率比较低.使用BRAF突变作为鉴定标记,仍需要其他基因如MLH1基因突变情况的辅助.BRAF突变可以抑制PRDX1和PRDX6基因的表达,而且PRDX1和PRDX6基因的表达量与结肠癌伴随的原发癌的数量有关.
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MLH1 R217C/BRAF V600E突变型家族性甲状腺乳头状癌永生化细胞系的建立及鉴定
目的：建立家族性甲状腺乳头状癌（FPTC）永生化细胞系，为研究家族性非髓样甲状腺癌（FNMTC）提供新的途径。方法选取FPTC患者的肿瘤标本，采用消化法分离原代细胞。使用改良的DMEM/F12培养基，添加促甲状腺激素（TSH）、三碘甲状腺原氨酸（T3）、表皮细胞生长因子（EGF）及氢化可的松等进行培养。在原代细胞早期分2种方式导入外源基因SV40T/TERT用于诱导永生化。利用RT-PCR检测甲状腺过氧化物酶（TPO）、甲状腺球蛋白（TG）、促甲状腺激素受体（TSHR）、钠/碘共同转运体（NIS）等基因的表达，同时利用免疫荧光技术检测TPO及磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）蛋白的表达。提取该患者外周血DNA，进行突变基因的检测。提取细胞基因组PCR扩增后测序，进行突变基因的检测。结果分离的FPTC原代细胞呈梭形或不规则多角形贴壁生长；细胞生长6个月，转染SV40T组（标记为FPTC-S）传代至p26，FPTC细胞传代至p23，转染SV40T+hTERT组（标记为FPTC-ST）传代至p19，细胞增殖能力较好；FPTC-S与FPTC-ST细胞均能够在基因水平稳定表达TPO、TG与TSHR；患者外周血中存在MLH1 R217C胚系突变；原代细胞存在BRAF V600E突变；原代细胞及永生化的细胞系中均存在MLH1 R217基因突变。结论本研究初步建立了FPTC永生化细胞系，且该细胞系中存在MLH1 R217C及BRAF V600E突变，该细胞系将为研究以上突变及其相互作用关系提供研究模型。
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错配修复基因 MLH1激活 p53和线粒体凋亡通路参与雌激素诱导的结肠癌细胞凋亡
背景：临床和流行病学研究显示雌激素替代治疗可降低绝经后妇女的结直肠癌发生风险。前期研究发现雌激素能上调结肠癌细胞的错配修复（MMR）基因 MLH1表达，在 MLH1基因缺失的结肠癌细胞中再表达 MLH1能明显增强雌激素诱导的细胞凋亡。目的：探讨 MLH1参与雌激素诱导结肠癌细胞凋亡所涉及的信号通路以及 p53及其相关基因在此凋亡通路中的作用。方法：以含人野生型 MLH1（hMLH1）全长 cDNA 的质粒转染 MLH1基因缺失的人结肠癌细胞株 HCT116。以转染空质粒的 HCT116细胞作为对照，在有或无雌激素作用的条件下，采用电泳法检测凋亡 DNA Ladder，蛋白质印迹法检测 p53等凋亡相关蛋白表达。结果：转染 hMLH1后，10-8 mol/L 雌二醇（E2）能明显诱导 HCT116细胞凋亡。转染 hMLH1并经 E2处理的 HCT116细胞（D 组）与经 E2处理但未转染 hMLH1的HCT116细胞（B 组）相比，其 caspase-3、caspase-9、p53、Bax、胞质细胞色素 C 蛋白表达均显著增强，D 组上述蛋白表达亦均高于转染 hMLH1但未经 E2处理的 HCT116细胞（C 组）。结论：MMR 基因 MLH1主要通过激活 p53和线粒体凋亡通路参与雌激素诱导的人结肠癌细胞株 HCT116凋亡。
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CDH1和MLH1蛋白在甲状腺癌中的表达及临床意义
背景与目的:上皮型钙黏着蛋白1(cadherin 1,CDH1)和Mut L同源基因1(mut L homolog 1,MLH1)在不同肿瘤的发生、发展中起一定作用.本文旨在探讨CDH1和MLH1在甲状腺癌组织中的表达及临床意义.方法:用免疫组织化学SP法检测甲状腺癌(65例)、甲状腺腺瘤(24例)、桥本甲状腺炎(15例)、结节性甲状腺肿(7例)和癌旁正常组织(12例)中CDH1蛋白的表达,以及甲状腺癌(56例)、甲状腺腺瘤(17例)、桥本氏甲状腺炎(13例)、结节性甲状腺肿(8例)和癌旁正常组织(12例)中MLH1蛋白的表达,结合临床病理因素进行分析.结果:CDH1蛋白在癌旁正常组织(83.33%)、结节性甲状腺肿(100%)、桥本甲状腺炎(93.33%)、甲状腺腺瘤(79.17%)及甲状腺癌(47.69%)中表达水平基本呈降低趋势.MLH1蛋白在癌旁正常组织(83.33%)、结节性甲状腺肿(75%)、桥本氏甲状腺炎(76.92%)、甲状腺腺瘤(52.94%)及甲状腺癌(42.86%)中的表达水平呈降低趋势.CDH1和MLH1蛋白表达水平在甲状腺病变中表达差异均有统计学意义(P<0.05).随着甲状腺病变恶性程度升高呈降低趋势,同时CDH1蛋白表达水平降低与PTC和FTC的临床分期、淋巴结转移密切相关.在甲状腺癌中,CDH1和MLH1蛋白表达水平呈正相关(P<0.05).结论:CDH1、MLH1蛋白低表达可能与甲状腺癌发生、转移有关;在甲状腺癌中,CDH1与MLH1蛋白表达之间有一定的相关性.
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MLH1/MSH2在散发性结直肠癌中的表达及其与预后的关系
目的:探讨Ⅱ～Ⅲ期散发性结直肠腺癌组织中错配修复基因MLH1 (MutL homolog1)和MSH2 (MutS homolog 2)的表达及其临床意义.方法:收集2014年1月--2016年4月在南京市中医院就诊的490例Ⅱ～Ⅲ期散发性结直肠癌根治术后患者的组织标本及随访资料.应用免疫组织化学法检测结直肠癌组织中MLH1和MSH2的表达,分析MLH1和MSH2表达与结直肠癌患者临床特征及预后的关系.结果:结直肠癌组织中MLH1/MSH2表达缺失率为20.41％ (100/490). MLH1/MSH2表达缺失与肿瘤分化程度、肿瘤部位、有无黏液和淋巴结转移数有关(P值均＜0.05), MLH1/MSH2缺失多见于低分化癌、右半结肠、伴有黏液和1～3个淋巴结转移的患者.MLH1/MSH2表达缺失患者的中位无病生存期(disease-free survival,DFS)长于MLH1/MSH2表达正常的患者(33.9个月 vs 30.4个月,P＜ 0.001).肿瘤位于右半结肠、低分化癌、 TNMⅢ期、淋巴结转移数≥4个、有黏液、切缘阳性和MLH1/MSH2表达正常的患者预后较差(P值均＜0.05).肿瘤分化程度、肿瘤部位、有无黏液、切缘是否阴性及MLH1/MSH2表达是Ⅱ～Ⅲ期散发性结直肠癌患者术后预后的独立影响因素(P值均＜0.05).结论:Ⅱ～Ⅲ期散发性结直肠癌组织中存在MLH1/MSH2表达缺失,并且是结直肠癌患者预后的独立影响因素.
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食管鳞癌MLH1基因杂合性丢失分析
目的hMLH1是位于3p23-21.3上的一个DNA错配修复基因,有研究认为MLH1的缺失较为多见,本研究旨在了解食管鳞癌中MLH1基因杂合性丢失情况.方法用微卫星分析法检测食管鳞癌中MLH1基因丢失情况.结果66.7%的受检食管鳞癌在MLH1基因内STS标志D3S1611位点表现为杂合性丢失.结论食管鳞癌中MLH1存在较高的等位基因丢失,MLH1可能是食管鳞癌基因改变的靶点.
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MLH1基因415位点G→C基因突变与胃癌发生的关系
目的:探讨MLH1基因415位点G→C基因多态性与胃癌发生的关系.方法:采用PCR-限制性长度片段多态性分析法检测2006年1月至2008年12月61例胃癌患者和49名正常人群外周血MLH1415位点基因突变情况.结果:散发胃癌患者MLH1基因415位点C/C基因型频率明显高于正常人群,P＜0.05.结论:MLH1基因415位点G→C突变是我国散发胃癌的遗传易感因素.
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单链构象多态性分析和变性高效液相色谱分析技术检测hMLH1和hMSH2基因突变的比较
目的 比较单链构象多态性分析(SSCP)和变性高效液相色谱分析技术(DHPLC)应用于遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)分子遗传学诊断的灵敏性和特异性.方法 应用PCR-SSCP和DHPLC方法分析经测序验证有序列变异的7个家系的所有成员的相应PCR扩增产物.分别计算SSCP和DHPLC的灵敏度和特异度.结果 应用SSCP对hMLH1和hMSH2进行基因突变筛查的敏感性和特异性分别为51.6%和66.6%:而应用DHPLC进行基因突变筛查的敏感性和特异性则分别为100%和93.3%:两种方法进行基因突变筛查的结果差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DHPLC进行基因突变筛查的敏感性和特异性均高于SSCP,是理想的分子遗传学检测方法.
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胚系表观突变与人类肿瘤
表观突变是指表观遗传调控出现错误,导致正常情况下表达的基因沉默或者正常情况下沉默的基因转录表达.表观突变通常被认为是局部体细胞事件,一般只存在于病变组织.但是,近几年关于遗传性非息肉性结直肠癌的研究发现.在部分患者中,所有检测的正常组织均存在MLH1单等位基因启动子区域CpG岛甲基化,并证实这种异常甲基化是肿瘤形成的病因.随后,关于其他抑癌基因MSH2与BRCA1等的胚系异常甲基化也陆续有报道.这提示,表观突变也可以起源于胚系(生殖细胞形成期或胚胎发育早期),从而造成全身细胞广泛的基因转录沉默.这种胚系表观突变类似于经典的基因胚系序列突变,可能成为人类疾病发生的病因.本文着重对近年来抑癌基因胚系表观突变研究进展作一综述.探讨胚系表观突变可能的产生机制和代间遗传的可能性,并展望其给人类疾病病因研究所带来的深远影响.
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错配修复蛋白表达异常在低龄子宫内膜癌中的意义
目的 探讨MLH1和MSH2蛋白在低龄子宫内膜癌中的表达缺失情况,为HNPCC家系的筛选提供线索.方法 应用免疫组化方法检测65例年龄≤50岁子宫内膜癌患者中MLH1和MSH2蛋白的表达.结果 MLH1蛋白表达异常的为19例,占29.2%;MSH2蛋白表达异常的为2例,占6.2%;MLH1和MSH2蛋白二者表达均异常为3例;MMR蛋白表达缺失的总检出率为30.8%(20/65).结论 MMR蛋白在低龄子宫内膜癌中表达缺失率较高,以MLH1表达异常为主.免疫组化检测MMR基因的表达也可能成为筛选HNPCC家系的一种简单、重要的分子生物学方法.因此把低龄子宫内膜癌作为癌家族成员纳入HNPCC初筛范围,是很有价值的.
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非小细胞肺癌中MGMT基因表达和MLH1基因异常甲基化与临床特征的相关性研究
目的:研究非小细胞肺癌中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因表达、MutL同源物1(MLH1)基因异常甲基化与患者临床特征的关系.方法:取43例非小细胞肺癌组织及癌旁组织各平均分为2份,其中一份采取荧光定量PCR检测MGMT基因在肺癌组织及癌旁组织中的表达,另一份进行特异性甲基化PCR检测非小细胞肺癌组织及癌旁组织的MLH1基因启动子甲基化状态.结果:MGMT基因在非小细胞肺癌组织中表达明显低于癌旁组织(P＜0.05),肿瘤组织中MLH1异常甲基化高于癌旁组织(P＜0.05).MGMT基因的表达与性别、年龄、病理类型以及临床分期有关,MLH1基因的异常甲基化与性别及临床分期有关(P＜0.05).MGMT基因表达与MLH1基因异常甲基化呈负相关关系(r=-0.429,P＜0.05).结论:MGMT基因表达和MLH1基因异常甲基化均是肺癌发生、进展及预后的重要标志;在非小细胞肺癌中,MGMT基因及MLH1基因的异常甲基化之间存在一定的关系.
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DNA错配修复基因甲基化在H446细胞获得性耐药中的作用
目的 探讨DNA错配修复基因MLH1(human MutL homolog1)、MSH2(human MutS homolog 2)甲基化在人小细胞肺癌H446细胞获得性耐药中的作用.方法 RT-PCR及Western blot法检测H446细胞及其多药耐药细胞H446/DDP中MLH1、MSH2基因的mRNA表达和蛋白表达,甲基化特异性PCR(MSP)法检测MLH1、MSH2基因启动子CpG岛甲基化状态.结果 H446/DDP细胞中MLH1、MSH2基因的mRNA及蛋白水平均较H446细胞显著降低(P＜0.01),且其启动子甲基化程度明显增强.结论 DNA错配修复基因MLH1、MSH2启动子甲基化诱导其表达下调可能是人小细胞肺癌获得性耐药的重要机制之一.
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TRIM29、SKP2、MLH1在早期胃癌及癌前病变表达意义的临床研究
目的 探讨胃镜活检标本中早期胃癌与高级别上皮内瘤变及胃炎TRIM29、SKP2、MLH1抗体表达的差异性,寻找早期胃癌与高级别上皮内瘤变的诊断鉴别方法.方法 使用免疫组织化学方法对46例胃炎标本、44例低级别上皮内瘤变组和42例高级别上皮内瘤变胃镜活检标本进行染色观察,采用统计学分析,比较其表达的差异性.结果 40例胃炎组中TRIM29无表达,SKP2弱表达,MLH1有3例表达.44例低级别上皮内瘤变组中MLH1全部表达,TRIM29有18例表达,SKP2全部表达.42例早期高级别上皮内瘤变中TRIM29全部表达,SKP2有28例表达,MLH1全部表达.三种抗体在3组间的表达比较差异有统计学意义,且表达程度与胃癌恶性进程有明显相关性.结论 TRIM29、SKP2、MLHI三种抗体可以作为胃镜活检标本中胃炎与上皮内瘤变及早期胃癌诊断的可靠标记物.
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前列腺癌错配修复基因蛋白MLH1缺失的研究
目的 探讨错配修复基因(MMR)蛋白MLH1在前列腺癌细胞株及前列腺癌标本的表达及其意义。方法 利用Western印迹法检测了前列腺癌细胞株中错配修复基因蛋白的丢失情况；用免疫组织化学法检测前列腺癌标本中错配修复蛋白的表达。结果在所研究的8个前列腺癌细胞株中均发现有错配修复基因的缺失；前列腺癌标本中也存在错配修复蛋白MLH1表达的减多或消失。结论 前列腺癌中存在错配修复基因的缺失，错配修复基因的缺失直接参与了前列腺癌的发生与发展。
关键词： 错配修复基因(MMR) MLH1 遗传学 前列腺癌 -
Ki67和MLH1在结肠癌及结肠炎中的表达及相关性探讨
目的:分析结肠炎组织、异型增生组织、癌组织中Ki67和MLH1的表达情况,探讨其与结肠组织癌变的关系及作为早期癌变检测标志的可能性.方法:应用免疫组化法对78例结肠炎组织、72例结肠炎异型增生组织及91例结肠癌组织中Ki67和MLH1的表达进行检测.结果:在结肠炎组织、异型增生组织及结肠癌组织中Ki67表达阳性率呈递增趋势,MLH1呈递增趋势;结果显示Ki67和MLH1表达阳性率在结肠粘膜炎症、异型增生及癌变这一过程中存在显著差异(P<0.O5).Ki67的表达与结肠癌淋巴结转移、分化程度无关(P>0.05),与Dukes分级有关(P<0.O5).MLH1表达与结肠癌的Dukes分级、分化程度、淋巴结转移无关(P>0.05),Ki67和MLH1的表达在结肠癌组织中呈正相关(P>0.05).结论:Ki67和MLH1在结肠病变过程中的表达异常与结肠的癌变过程有关,两者有可能成为结肠组织早期癌变的分子标记物.
