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ERK1/2信号通路在二氮嗪后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用
目的 评价细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路在二氮嗪后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠60只,体重240 ～ 260 g,3月龄,采用随机数字表法,将其分为5组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、溶媒组(V组)、二氮嗪后处理组(D组)和ERK1/2信号通路抑制剂U0126组(U组).采用阻断左冠状动脉前降支30 min,再灌注120m in的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型.V组和D组分别于再灌注即刻经股静脉注射0.4％二甲基亚砜1ml和二氮嗪7 mg/kg,U组于再灌注前10 min经股静脉注射U0126 500μg/kg,其余处理同D组.于再灌注120 min时,取心肌组织检测心肌梗死体积,采用TUNEL法计算细胞凋亡指数,RT-PCR法检测心肌组织ERK1/2 mRNA的表达水平;Western blot法检测心肌组织总ERK1/2(t-ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达水平.结果 与S组比较,其余各组心肌梗死体积和细胞凋亡指数升高,I/R组、V组和U组心肌组织ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2蛋白表达下调(P＜0.05),D组心肌组织ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);与I/R组比较,D组心肌梗死体积和细胞凋亡指数降低,心肌组织ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2蛋白表达上调(P＜0.05),V组、U组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与D组比较,U组心肌梗死体积和细胞凋亡指数升高,心肌组织ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2蛋白表达下调(P＜ 0.05). 5组间心肌组织t-ERK1/2蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 二氮嗪后处理可能通过激活ERK1/2信号通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.
关键词： 细胞外信号调节MAP激酶类 二氮嗪 缺血后处理 心肌再灌注损伤 -
M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用:与MAPK信号通路的关系
目的 评价M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用及其与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的关系.方法 将人肺微血管内皮细胞以1×105个/ml的密度接种于6孔板(2 ml/孔)或培养瓶(4 ml/瓶)中,采用随机数字表法分为6组(n=5):空白对照组(C组)、M3受体shRNA转染组(shRNA组)、脂多糖组(LPS组)、盐酸戊乙奎醚+脂多糖组(P+LPS组)、脂多糖+M3受体shRNA转染组(LPS+shRNA组)和盐酸戊乙奎醚+脂多糖+M3受体shRNA转染组(P+LPS+shRNA组).shRNA组、LPS+shRNA组和P+LPS+shRNA组以含2.5 nmol/L M3受体shR-NA的质粒转染细胞.LPS组和LPS+shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1h;P+LPS组和P+LPS+shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为2μg/ml的盐酸戊乙奎醚,孵育1h后加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS再孵育1h.采用Transwell法测定肺微血管内皮细胞通透性,采用Western blot法测定磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK 1/2)的表达水平,采用免疫荧光染色法测定热休克蛋白27 (HSP27)的表达水平,采用实时定量PCR法测定M3受体mRNA的表达.结果 与C组比较,shRNA组M3受体mRNA表达下调,LPS组细胞通透性增高,p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27、和M3受体mRNA表达上调(P＜0.05);与LPS组比较,P+LPS组、LPS+shRNA组和P+LPS+shRNA组细胞通透性降低,p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M3受体mRNA表达下调(P＜0.05);与LPS+shRNA组比较,P+LPS+shRNA组细胞通透性降低,p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M3受体mRNA表达下调(P＜0.05).结论 盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高的机制与其下调M3受体表达后抑制MAPK信号通路激活有关.
关键词： 受体 毒蕈碱M3 胆碱能药 内皮细胞 毛细血管 肺 内毒素血症 p38丝裂原活化蛋白激酶类 细胞外信号调节MAP激酶类 -
乌司他丁预先给药对大鼠呼吸机相关性肺损伤时p-ERK表达的影响
目的 评价乌司他丁预先给药对大鼠呼吸机相关性肺损伤时磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)表达的影响.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠45只,体重200 ～ 250 g.采用随机数字表法分为3组(n=15):对照组(C组)、呼吸机相关性肺损伤组(VILI组)和乌司他丁预先给药组(UP组).UP组于机械通气前10 min颈内静脉注射乌司他丁200 000 U/kg;C组和VILI组于机械通气前10 min颈内静脉注射等容量生理盐水.3组大鼠进行双肺机械通气,采用容量控制通气模式.VILI组和UP组机械通气参数:潮气量40 ml/kg,吸呼比1∶1,通气频率40次/min,吸入氧浓度50％.于机械通气4h时麻醉后处死大鼠取肺,称湿重、干重,计算肺湿重/干重(W/D)比值、肺水含量(TLW),光镜下观察肺组织病理学结果,测定肺泡损伤率(IAR),电镜下观察肺组织超微结构,分别采用TUNEL法检测肺组织细胞凋亡指数(AI).采用RT-PCR法和Western blot法检测肺组织ERKmRNA和p-ERK的表达水平.采用Western blot法检测肺组织Bcl-2和Bax的表达水平.结果 与C组比较,VILI组肺W/D比值、TLW、IAR和AI升高,肺组织p-ERK、Bcl-2和Bax表达上调(P＜0.01);与VILI组比较,UP组肺W/D比值、TLW、IAR和AI降低,肺组织Bax表达下调,p-ERK及Bcl-2表达上调(P＜0.01).UP组肺组织病理学损伤较VILI组明显减轻.结论 乌司他丁预先给药减轻大鼠呼吸机相关性肺损伤的机制与激活ERK信号通路,抑制细胞凋亡有关.
关键词： 胰蛋白酶抑制剂 肺炎 呼吸机相关性 细胞外信号调节MAP激酶类 细胞凋亡 -
右美托咪定预防大鼠创伤后应激障碍的效果及其对海马ERK活性及ARC表达的影响
目的 评价右美托咪定预防大鼠创伤后应激障碍(PTSD)的效果及其对海马细胞外信号调节激酶(ERK)活性及活动调节骨架蛋白(ARC)表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠68只,体重250～280 g,采用随机数字表法,将大鼠分为4组(n=17)∶生理盐水组(NS组)、右美托咪定0.3 μg/kg组(D1组)、右美托咪定3.0μg/kg组(D2组)和右美托咪定9.0μg/kg组(D3组).于PTSD模型制备前30 min,NS组腹腔注射生理盐水2 ml,D1组、D2组和D3组分别腹腔注射右美托咪定0.3、3.0和9.0μg/kg.采用应激增强恐惧学习法制备PTSD模型.于模型制备第1天A室电击处理后15 min时采用Western blot法检测海马ERK、磷酸化ERK(p-ERK)的表达水平；第1天A室电击处理后30 min时采用Western blot法检测海马ARC的表达水平.结果 与模型制备第2天比较,3组大鼠模型制备第3天木僵率升高(P＜0.05)；与NS组比较,D2组和D3组模型制备第3天木僵率均下降,海马p-ERK和ARC表达降低(P＜0.05),D1组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05)；D2组和D3组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).4组大鼠海马ERK表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右美托咪定对大鼠PTSD有一定预防作用,且与剂量有关,该作用机制与抑制海马ERK活性,下调ARC表达有关.
关键词： 右美托咪啶 应激障碍 创伤后 细胞外信号调节MAP激酶类 细胞支架蛋白质类 -
ERK在脑缺血再灌注大鼠海马细胞凋亡中的作用
目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)在脑缺血再灌注大鼠海马细胞凋亡中的作用.方法 健康雄性SD大鼠90只,体重280～320 g,随机分为3组(n=30):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(IR组)和ERK磷酸化特异性抑制剂PD98059组(PD组).采用4血管法建立大鼠脑缺血再灌注模型,于再灌注后2、6、12、24、48、72 h时,各取5只大鼠,断头取脑,光镜下观察海马CA1区和CA3区病理学结果 ,计算细胞凋亡指数(AI),采用免疫组化法检测磷酸化ERK(p-ERK)和磷酸化Bad(p-Bad)的表达.结果 与S组比较,IR组和PD组再灌注期间CAI区和CA3区AI升高,再灌注2、6、12 h时CA1区p-ERK表达降低,再灌注后CA1区和CA3区p-Bad表达降低(P＜0.05);与IR组比较,PD组再灌注后CA1医和CA3区AI升高,再灌注2、6、12、24 h时CA3区p-ERK表达降低,再灌注2、6 h时CA1区p-Bad表达降低,再灌注2、6、12h时CA3区p-Bad表达降低(P＜0.05).结论 脑缺血再灌注可降低ERK活性,导致Bad蛋白去磷酸化,从而诱发大鼠海马细胞凋亡.
关键词： 细胞外信号调节MAP激酶类 细胞凋亡 再灌注损伤 -
阿片受体、PI3K/Akt和ERK信号通路在瑞芬太尼预处理减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用
目的 评价阿片受体、磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)和细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在瑞芬太尼预处理(RPC)减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠,处死后取心室肌组织,原代培养心肌细胞,调整细胞浓度为2×104个/ml后接种于24孔细胞培养板(500 μl/孔)中,采用随机数字表法,将其中108个培养孔分为12组(n=9):正常对照组(C组)；H/R损伤组(H/R组)采用缺氧90 min/复氧120 min的方法制备心肌细胞H/R损伤模型；缺氧预处理组(HPC组)在H/R前,培养孔经缺氧10 min/复氧30 min；瑞芬太尼预处理组(RPC组)在H/R前,以终浓度1μmol/L瑞芬太尼孵育心肌细胞10 min,再常规培养30 min;δ受体拮抗剂纳曲吲哚+ RPC组(NTD+ RPC组)、κ受体拮抗剂nor-binahorphimine(nor-BNI)+ RPC组(BNI+RPC组)、PI3K/Akt信号通路阻断剂渥曼青霉素+RPC组(W+ RPC组)、ERK信号通路阻断剂PD98059+ RPC组(PD+ RPC组)在RPC前10 min分别维持培养孔终浓度5μmol/L纳曲吲哚和nor-BNI、0.1μmol/L渥曼青霉素和30 μmol/L PD98059,然后与瑞芬太尼共孵育10 min,再常规培养30 min,随后行H/R；试剂对照组分别为NTD组、BNI组、W组和PD组.于复氧结束时,测定心肌细胞活力、细胞凋亡率和培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果 与C组比较,H/R组心肌细胞活力降低,细胞凋亡率和培养液LDH活性升高(P＜0.05)；与H/R组比较,HPC组、RPC组和BNI+ RPC组心肌细胞活力升高,细胞凋亡率和培养液LDH活性降低(P＜0.05),NTD+ RPC组、W+ RPC组、PD+ RPC组、NTD组、BNI组、W组和PD组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与RPC组比较,NTD+ RPC组、BNI+ RPC组、W+ RPC组和PD+ RPC组心肌细胞活力降低,细胞凋亡率和培养液LDH活性升高(P＜0.05).结论 瑞芬太尼预处理可能通过激活δ受体,进而激活PI3K/Akt和ERK信号通路,从而减轻大鼠心肌细胞H/R损伤.
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ERK1/2信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用
目的 评价细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用.方法 选取符合标准的大鼠海马脑片,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=10):缺氧无糖组(OGD组)海马脑片进行15 min缺氧无糖处理,即将灌流液改为经95％N2-5％ CO2混合气体饱和的无糖人工脑脊液(aCSF);4％七氟醚后处理组(Sevo组)缺氧无糖处理后用4％七氟醚平衡后的aCSF灌流30 min；ERK1/2特异性抑制剂PD98059组(PD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50 μmol/L)的aCSF灌流10 min；二甲基亚砜组(DMSO组)缺氧无糖处理后用含1 mol/L DMSO的aCSF灌流10 min；4％七氟醚后处理+PD98059组(SPD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50μmol/L)并通人4％七氟醚的aCSF灌流30 min,处理完成 后各组均再用正常aCSF灌流1h.采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CAI区的顺向群峰电位(OPS)；采用TTC染色-定量比色法评价海马脑片损伤程度.结果 与OGD组比较,Sevo组OPS恢复程度和恢复率升高,海马脑片损伤程度降低(P＜ 0.01),其余3组各指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与Sevo组比较,PD组、DMSO组和SPD组OPS恢复程度和恢复率降低,海马脑片损伤程度升高(P＜0.01).结论 ERK1/2信号转导通路参与了七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的过程.
关键词： 细胞外信号调节MAP激酶类 麻醉药 吸入 海马 缺氧 -
吗啡预处理对慢性心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤及心肌磷酸化细胞外信号调节激酶1/2表达的影响
目的 探讨吗啡预处理对慢性心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤及心肌磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠48只,体重220～250 g,采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=8):正常对照组(C组)、假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)和吗啡低、中、高剂量预处理组(MP1-3组).C组尾静脉注射生理盐水5 ml/kg,其余各组给予阿霉素2.0 mg/kg,每周1次,共6次,建立慢性心力衰竭模型.于末次给药后14 d,采用彩色超声仪测量左心室舒张末期内径(LVEDD)和左心室收缩末期内径(LVESD),计算左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS),并取颈动脉血样,测定血浆脑利钠肽(BNP)浓度.于末次给药后16 d,采用阻断冠状动脉左前降支30 min,再灌注120 min制备心肌缺血再灌注模型.S组仅穿线不结扎；MP1 -3组分别静脉输注吗啡0.015、0.030、0.050 mg/kg,输注5min,停止5min,重复3次,I/R组给予等容量生理盐水.除C组外,其余各组于再灌注120 min时处死大鼠,取心脏,测定缺血危险区(AAR)和梗死区(IS)的体积,计算IS/AAR比值,并采用Western blot法检测心肌p-ERK1/2表达.结果 与C组比较,其余各组LVESD升高,LVEF和LVFS降低,血浆BNP浓度升高(P＜0.01)；S组未检测到心肌梗死；与S组比较,I/R组和MP1组心肌p-ERK1/2表达下调(P＜0.05),MP2组及MP3组差异无统计学意义(P＞0.05)；与I/R组比较,MP2组和MP3组IS体积和IS/AAR比值降低,心肌p-ERK1/2表达上调(P＜0.05),MP1组差异无统计学意义(P＞0.05)；MP1组～MP3组IS体积和IS/AAR比值逐渐降低,心肌p-ERK1/2表达逐渐上调(P＜0.05).结论 吗啡预处理可减轻慢性心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤,且呈剂量依赖性,其机制与上调心肌p-ERK1/2表达有关.
关键词： 吗啡 缺血预处理 心肌再灌注损伤 心力衰竭 细胞外信号调节MAP激酶类 -
ERK与氯胺酮诱导大鼠海马神经元凋亡的关系
目的 评价细胞外信号调节激酶(ERK)与氯胺酮诱导大鼠海马神经元凋亡的关系.方法 原代培养孕18 d SD大鼠胎鼠海马神经元5d,按5×105/ml的细胞密度接种于6孔(2 ml/孔)及96孔(100 μl/孔)培养板,采用随机数字表法,将其分为4组(n=18):对照组(C组)不做任何处理；ERK激动剂[碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)]组(F组)加入50 ng/ml FGF-2;氯胺酮组(K组)加入100μmol/L氯胺酮；FGF-2+氯胺酮组(FK组)加入50 ng/ml FGF-2,20 min后加入100 μmol/L氯胺酮.于处理后10 min,采用Western blot法测定海马神经元ERK磷酸化水平；于处理后24 h采用Hoechst33342/PI染色法检测凋亡神经元,MTF法检测神经元存活率.结果 与C组比较,K组和FK组海马神经元ERK磷酸化水平和神经元存活率降低,神经元凋亡率升高(P＜0.05),F组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与K组比较,FK组海马神经元ERK磷酸化水平和神经元存活率升高,神经元凋亡率降低(P＜0.05).结论 氯胺酮可能通过抑制神经元ERK活性而导致大鼠海马神经元凋亡.
关键词： 细胞外信号调节MAP激酶类 氯胺酮 海马 神经元 细胞凋亡 -
SIRT1-ERK1∕2通路与竹节参皂苷减轻异氟醚致胎鼠海马神经元毒性的关系:离体实验
目的 采用离体实验评价沉默信息调节因子1(SIRT1)-细胞外信号调节激酶1∕2(ERK1∕2)通路与竹节参皂苷减轻异氟醚致胎鼠海马神经元毒性的关系.方法 孕16～18 d大鼠,剖腹取出胎鼠,取海马神经元,原代培养7 d,采用随机数字表法分为3组(n=6):对照组(Con组)、异氟醚组(Iso组)和竹节参皂苷+异氟醚组(ChIV+Iso组).Con组常规培养6 h;Iso组将培养基放入充有1.8％异氟醚的培养箱中孵育6 h;ChIV+Iso组培养基中加入竹节参皂苷25μg∕ml孵育6 h,然后将其放入充有1.8％异氟醚的培养箱中孵育6 h.收集神经元培养液上清,测定LDH释放量,采用CCK-8法测定神经元活力,采用Western blot法测定神经元SIRT1、ERK1∕2和磷酸化ERK1∕2(p-ERK1∕2)的表达水平.结果 与Con组比较,Iso组神经元活力降低,LDH释放量升高,SIRT1和p-ERK1∕2的表达下调(P<0.05);与Iso组比较,ChIV+Iso组神经元活力升高,LDH释放量降低,SIRT1和p-ERK1∕2的表达上调(P<0.05).结论 竹节参皂苷减轻异氟醚致胎鼠海马神经元毒性的机制可能与激活SIRT1-ERK1∕2通路有关.
关键词： 异氟醚 抗衰老酶 细胞外信号调节MAP激酶类 药物毒性 神经元 -
异氟醚麻醉对新生大鼠海马BDNF和磷酸化ERK表达的影响
目的 探讨异氟醚麻醉对新生大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达的影响.方法 出生7d的SD大鼠48只,体重12～17 g,雌雄不拘,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=24):对照组(C组)和异氟醚麻醉组(1组).Ⅰ组吸入2.5％异氟醚3 min,然后吸入1.5％异氟醚4h；C组吸入空气4h.麻醉结束即刻每组取4只大鼠,抽取动脉血样,行血气分析,并检测血糖浓度.分别于麻醉结束即刻和麻醉结束后6、24和48 h(T-4)时各处死大鼠5只,取海马组织,采用Western blot法检测钾离子-氯离子联合转运体2(KCC2)、钠离子-钾离子-氯离子联合转运体1( NKCC1)、BDNF和p-ERK的表达,计算NKCCI/KCC2比值.结果 麻醉结束即刻两组大鼠均未发生酸碱失衡、低氧和低血糖等.与C组比较,Ⅰ组T3和T4时海马KCC2表达下调,NKCC1/KCC2比值升高,T1和T2时海马BDNF和p-ERK的表达下调(P＜0.05),各时点海马NKCC1表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异氟醚麻醉通过下调BDNF和p-ERK的表达,导致新生大鼠海马神经元发育延迟.
关键词： 异氟醚 脑源性神经营养因子 细胞外信号调节MAP激酶类 海马 -
电针对大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞外信号调节激酶1/2活性的影响
目的 探讨电针对大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)活性的影响.方法 取鞘内置管成功的雄性SD大鼠25只,采用随机数字表法,将其分为5组(n=5):生理盐水组(NS组)鞘内注射生理盐水10μl；吗啡组(M组)鞘内注射吗啡10 μg；错义寡核苷酸组(MO组)鞘内注射吗啡10μg+ ERK1/2错义寡核苷酸10μg;反义寡核苷酸组(AO组)鞘内注射吗啡10 μg+ERK1/2反义寡核苷酸10 μg；电针组(EA组)鞘内注射吗啡10 μg,同时每日首次给药后电针大鼠阳陵泉和足三里(频率2 Hz,波宽1 ms,电流强度3 mA,刺激时间30 min).各组注射药物容量均为10μl,2次/d,连续7d.于鞘内给药前、鞘内给药2、4、6d和鞘内给药结束后1 d(T0-4)测定机械痛阈.于T4时机械痛阈测定结束后,取脊髓背角组织,采用Western blot法测定大鼠ERK1/2和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达.结果 M组、MO组和AO组和EA组发生了吗啡耐受,EA组吗啡耐受程度轻.与NS组比较,M组和MO组p-ERK1/2表达上调,AO组总ERK1/2表达下调(P＜0.05),EA组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与M组和MO组比较,AO组p-ERK1/2和总ERK1/2表达下调,EA组p-ERK1/2表达下调(P＜0.05)；与AO组比较,EA组p-ERK1/2和总ERK1/2表达上调(P＜0.05).结论 电针可抑制慢性吗啡给药所导致的脊髓背角ERK1/2活性升高,从而缓解吗啡耐受的形成.
关键词： 细胞外信号调节MAP激酶类 电针 药物耐受性 吗啡 -
脊髓NO信号通路和ERK信号通路在吗啡依赖大鼠戒断反应中的作用
目的 评价脊髓NO信号通路和细胞外调节激酶(ERK)信号通路在吗啡依赖大鼠戒断反应中的作用.方法 鞘内置管成功的健康雄性SD大鼠90只,体重200～ 250 g,采用随机数字表法,将其随机分为9组(n＝10):正常对照组(C组)、吗啡依赖组(MD组)、吗啡戒断组(MW组)、L-N-硝基精氨酸甲酯组(L-NAME组)、7-硝基吲唑组(7-Ni组)、氨基胍组(AG组)、U0126组、克列莫佛组(cremophor组)和二甲基亚砜组(DMSO组).MD组、MW组、L-NAME组、7-Ni组、AG组、U0126组、cremophor组和DMSO组皮下注射吗啡10 mg/kg,2次/d,隔天每次增加10 mg/kg,至第6天末次注射50 mg/kg,建立吗啡依赖模型.末次注射吗啡后4h时,MW组、L-NAME组、7-Ni组、AG组、U0126组、cremophor组和DMSO组腹腔注射纳洛酮4 mg/kg激发吗啡戒断反应.给予纳洛酮前30 min时,L-NAME组、7-Ni组、AG组、U0126组、cremophor组和DMSO组分别鞘内注射L-N-硝基精氨酸甲酯400μg(溶于10μl生理盐水中)、7-硝基吲唑400 μg(溶于10μl克列莫佛中)、氨基胍400μg(溶于10 μl生理盐水中)、U0126 150μg(溶于10μl二甲基亚砜中)、克列莫佛10 μl和二甲基亚砜10 μl.注射纳洛酮后1h内观察大鼠戒断反应和痛觉异常反应,并进行评分,然后处死大鼠,取脊髓组织,分别采用免疫组化法和Western blot 法测定脊髓背角诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、神经型一氧化氮合酶(nNOS)和磷酸化ERK(p-ERK)的表达.结果 与MD组比较,MW组、L-NAME组、7-Ni组、AG组、U0126组、DMSO组和crmophor组戒断反应评分和促诱发痛评分升高(P<0.05)；与MW组比较,L-NAME组、7-Ni组、AG组和U0126组戒断反应评分和促诱发痛评分降低(P<0.05),DMSO组和cremophor组差异无统计学意义(P＞0.05)；与C组和MD组比较,MW组脊髓背角nNOS和iNOS表达上调(P<0.05)；与MW组比较,U0126组脊髓背角nNOS和iNOS表达下调(P<0.05).与C组比较,MD组和MW组脊髓背角p-ERK表达上调(P＜0.05)；与MW组比较,L-NAME组、7-Ni组和AG组脊髓背角p-ERK表达下调(P<0.05).结论 脊髓NO信号通路和ERK信号通路的相互调节作用参与了吗啡依赖大鼠的戒断反应.
关键词： 一氧化氮 细胞外信号调节MAP激酶类 脊髓 吗啡依赖 物质戒断综合征 -
脊髓细胞外信号蛋白调节激酶5在吗啡依赖大鼠戒断反应中的作用
目的 探讨脊髓细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK5)在吗啡依赖大鼠戒断反应中的作用.方法 取鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠96只,体重200 ～ 250 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=24):对照组(A组)、戒断组(B组)、二甲基亚砜组(C组)、ERK5抑制剂BIX02188组(D组).B组、C组和D组皮下注射吗啡,首日10 mg/kg,第2～5天每日增加10 mg/kg,第6天注射50 mg/kg,建立大鼠吗啡依赖模型,A组给予等容量生理盐水,不制备吗啡依赖模型.B组末次注射吗啡后4h腹腔注射纳洛酮4 mg/kg,建立吗啡戒断模型.D组腹腔注射纳洛酮前1h鞘内注射ERK5抑制剂BIX0218810出,C组鞘内注射等容量溶媒1％二甲基亚砜.腹腔注射纳洛酮后1h内进行戒断反应评分和戒断所致的痛觉过敏评分.痛觉过敏评分测定完毕后,处死大鼠,取脊髓组织,测定ERK5和磷酸化ERK5(p-ERK5)的表达水平.结果 与A组比较,B组、C组和D组戒断反应评分和痛觉过敏评分升高,脊髓p-ERK5表达上调(P＜0.05);与B组比较,D组戒断反应评分和痛觉过敏评分降低,脊髓p-ERK5表达下调(P＜0.05),C组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓ERK5参与了吗啡依赖大鼠的戒断反应.
关键词： 细胞外信号调节MAP激酶类 吗啡依赖 物质戒断综合征 脊髓 -
脊髓神经元ERK5/CREB信号通路在吗啡依赖大鼠戒断反应中的作用
目的 评价脊髓神经元细胞外信号调节蛋白激酶5/cAMP反应元件结合蛋白(ERK5/CREB)信号通路在吗啡依赖大鼠戒断反应中的作用.方法 取鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠96只,体重200～ 250 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=24):正常对照组(A组)、吗啡戒断组(B组)、二甲基亚砜+吗啡戒断组(C组)和ERK5抑制剂BIX02188+吗啡戒断组(D组).B组、C组和D组皮下注射吗啡,第1天剂量10 mg/kg,第2～5天剂量每天增加10 mg/kg,第6天剂量50 mg/kg,建立大鼠吗啡依赖模型,A组给予等容量生理盐水.B组和D组于末次注射吗啡后4h腹腔注射纳洛酮4mg/kg,建立吗啡戒断模型,D组给予纳洛酮前1h鞘内注射BIX02188 10 μg,C组给予等容量二甲基亚砜.给予纳洛酮后1h内进行戒断反应评分和戒断反应诱发痛觉过敏评分.处死大鼠,取L4.5节段脊髓组织,测定CREB和磷酸化CREB(p-CREB)的表达水平.结果 与A组比较,B组、C组和D组戒断反应评分和痛觉过敏评分升高,脊髓p-CREB表达上调(P＜0.05);与B组比较,D组戒断反应评分和痛觉过敏评分降低,脊髓p-CREB表达下调(P＜0.05),C组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓神经元ERK5/CREB信号通路参与了吗啡依赖大鼠戒断反应.
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胫骨癌痛大鼠脊髓细胞外信号调节激酶5活性的变化
目的 评价胫骨癌痛大鼠脊髓细胞外信号调节激酶5(ERK5)活性的变化.方法 雌性未交配SD大鼠108只,体重160～ 180 9,采用随机数字表法,将其分为3组(n=36):对照组(C组)、假手术组(S组)和胫骨癌痛组(BCP组).BCP组胫骨骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞混悬液制备大鼠胫骨癌痛模型；S组胫骨骨髓腔内注射等容量生理盐水；C组不作任何处理.于接种前1d、接种后3、5、7、14和21 d时,测定机械痛阈.C组和S组于接种后21 d痛阈测定结束后随机处死6只大鼠,BCP组分别于接种后3、5、7、14和21 d痛阈测定结束后随机处死6只大鼠,取脊髓组织,采用Westernblot法测定脊髓背角磷酸化ERK5(p-ERK5)、ERK5和Fos蛋白的表达.结果 C组和S组各时点机械痛阈、脊髓背角p-ERK5、ERK5和Fos蛋白的表达差异无统计学意义(P＞0.05).与C组和S组比较,BCP组接种后7-21 d时机械痛阈下降,接种后5-21 d时脊髓p-ERK5和Fos蛋白表达上调(P＜0.05),ERK5表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 大鼠胫骨骨髓腔内注射肿瘤细胞可能通过增强脊髓ERK5活性,导致其下游Fos蛋白的释放,从而诱发骨癌痛.
关键词： 骨肿瘤 疼痛 细胞外信号调节MAP激酶类 脊髓 -
ERK-CREB信号通路在糖皮质激素受体介导大鼠慢性吗啡耐受中的作用
目的 评价细胞外信号调节激酶-cAMP反应元件结合蛋白(ERK- CREB)信号通路在糖皮质激素受体介导大鼠慢性吗啡耐受中的作用.方法 健康雄性SD大鼠,体重280～320 g,月龄2月,经枕骨大孔行鞘内置管.取36只鞘内置管成功的大鼠,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=6):对照组(C组)、慢性吗啡耐受组(M组)、吗啡+地塞米松组(MD组)、吗啡+RU38486组(MR组)、地塞米松组(D组)和RU38486组(R组).分别鞘内注射生理盐水10 μl、吗啡10腭、吗啡10 μg+地塞米松4 μg、吗啡10 μg+ RU38486 2 μg、地塞米松4.μg、RU38486 2 μg,2次、d,连续6d.于给药前1d测定热甩尾潜伏期(TFL)基础值,随后于给药1、3、5d首次给药后30 min及后1次给药后1 d(T1～4)测定TFL,计算大镇痛效应百分比(MPE).后1次测定TEL后取脊髓,采用免疫荧光染色法测定脊髓背角磷酸化ERK(pERK)和磷酸化CREB(pCREB)的表达.结果 与T1时比较,M组和MD组T3.4时MPE降低(P＜0.05).与C组比较,M组MPE升高,脊髓背角pERK和pCREB的表达上调(P＜0.05或0.01),R组和D组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).与M组比较,MR组MPE升高,脊髓背角pERK和pCREB表达上调,MD组脊髓背角pERK和pCREB表达下调,MPE降低(P＜0.05或0.01).结论 糖皮质激素受体介导大鼠慢性吗啡耐受的机制可能与抑制ERK-CREB信号通路有关.
关键词： 细胞外信号调节MAP激酶类 cAMP反应元件结合蛋白质 受体 糖皮质激素 药物耐受性 吗啡 -
急性内脏痛大鼠脊髓背角神经元ERK1/ERK2磷酸化水平的变化
目的 探讨脊髓背角神经元细胞外信号调节激酶(ERK)是否参与急性内脏痛的形成.方法 第一部分成年雌性SD大鼠30只,随机分为5组(n=6),假手术组(S组)不行宫颈扩张,UCD25组、UCD50组、UCD75组和UCD100组分别采用25、50、75、100 g的强度进行宫颈扩张10 s,10 min后处死大鼠,采用免疫组化方法测定颈段(C5～8)、胸段(T5～8)、胸腰段(T12～L2)及腰骶段(L6～S1)脊髓背角神经元磷酸化ERK1/ERK2(p-ERK1/ERK2)表达水平.第二部分成年雌性SD大鼠20只,宫颈扩张(强度为75 g)10 s,于宫颈扩张后10、30、60及120 min时分别处死5只大鼠,测定胸腰段(T12～L2)p-ERK1/ERK2表达水平.结果 与S组比较,其它各组胸腰段p-ERK1/ERK2表达上调,其中UCD75组和UCD100组明显(P<0.05),其他脊髓段p-ERK1/ERK2表达差异无统计学意义(P>0.05).宫颈扩张后60 min时胸腰段p-ERK1/ERK2表达达高峰(P<0.05).结论 胸腰段脊髓背角神经元ERK参与了宫颈扩张诱发大鼠急性内脏痛的形成.
关键词： 细胞外信号调节MAP激酶类 脊髓 疼痛 -
姜黄素对2型糖尿病神经病理性痛大鼠脊髓背角及背根神经节p-ERK和p-CREB表达的影响
目的 评价姜黄素对2型糖尿病神经病理性痛大鼠脊髓背角及背根神经节磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)表达的影响.方法 高脂高糖喂养雄性SD大鼠8周诱导胰岛素抵抗,以35 mg/kg链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射,3d后血糖≥16.7 mmol/L大鼠为2型糖尿病大鼠.注射STZ后14d机械缩足阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)低于基础值80％的大鼠为2型糖尿病神经病理性痛大鼠,采用随机数字表法,将其分为3组(n=27):2型糖尿病神经病理性痛组(DNP组)、姜黄素组(Cur组)和溶剂对照组(SC组).Cur组和SC组于注射STZ后14 d腹腔注射姜黄素和玉米油100 mg/kg(25 mg/ml),1次/d,连续14 d,DNP组不做任何处理.另取27只正常大鼠为对照组(C组),给予普通饲料喂养.给予姜黄素后第3、7和14天(T13)时测定MWT和TWL后各组随机取9只大鼠处死,取L4-6脊髓背角和背根神经节,采用Westem blot法检测p-ERK和p-CREB的表达.结果 与C组比较,DNP组和SC组T13时MWT降低,TWL缩短,脊髓背角和背根神经节p-ERK、p-CREB表达上调,Cur组T1时MWT降低,TWL缩短,脊髓背角和背根神经节p-ERK、p-CREB表达上调(P＜0.05)；与DNP组比较,Cur组T23时MWT升高,TWL延长,脊髓背角和背根神经节p-ERK、p-CREB表达下调(P＜0.05).DNP组与SC组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 姜黄素可通过抑制脊髓背角和背根神经节p-ERK、p-CREB表达上调减轻大鼠2型糖尿病神经病理性痛.
关键词： 姜黄素 糖尿病 2型 神经痛 脊髓 神经节 脊 细胞外信号调节MAP激酶类 cAMP反应元件结合蛋白质 -
脊髓背角ERK激活在大鼠神经病理性疼痛中的作用
目的 探讨脊髓背角细胞外信号调节激酶(ERK)的激活在大鼠神经病理性疼痛诱发和维持中的作用.方法 雄性SD大鼠,体重200～300 g.本研究分多剂量给药和单剂量给药两部分,均进行行为学实验和脊髓背角磷酸化ERK(p-ERK)表达检测.实验一 48只鞘内置管大鼠随机分6组(n=8):假手术+生理盐水(NS)组(S组)、慢性压迫性损伤(CCI)+NS组(C组)、CCI+5%二甲亚砜(DMSO)组(D组)、CCI+错义寡核苷酸10 μg组(M组)、CCI+U0126 5 μg组(U组)、CCI+反义寡核苷酸组10 μg组(A组).鞘内给药后记录大鼠机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).实验二 48只鞘内置管大鼠随机分3组(n=16),自CCI术前1 d至术后3 d分别注射NS(G1组)、U0126 5 μg(G2组)或ERK反义寡核苷酸10 μg(G3组),假手术大鼠4只为阴性对照组,检测脊髓p-ERK的表达.实验三 CCI术后5 d大鼠40只随机分5组(n=8):CCI+5%DMSO组(D'组)、CCI+U0126 O.2 μg组(U0.2组)、CCI+U0126 O.5 μg组(U0.5组)、CCI+U0126 1 μg组(U1组)、CCI+U0126 5 μg组(U5组),假手术大鼠8只注射5%DMSO(S组)为阴性对照组,记录MWT和TWL;实验四另选CCI术后5 d大鼠20只为实验组,鞘内注射U0126 5 μg,假手术5 d大鼠(阴性对照组)与CCI术后5 d大鼠(阳性对照组)各4只,鞘内注射5%DMSO 0.5 h后取材,检测脊髓p-ERK的表达.结果 实验一与C组比较,U组与A组MWT和TWL升高,作用持续至术后13 d;实验二与G1组比较,G2组与G3组术后3、5 d胞浆p-ERK2表达以及术后3、5、10 d胞核p-ERK1与p-ERK2表达降低;实验三与D'组比较,U0.5组给药后MWT和TWL升高,其作用分别持续至鞘内给药后6 h和2 h;与U0.2组比较,MWT:U0.5组鞘内给药后0.5、2、6 h、U1组给药后O.5、2、6、12 h、U5组鞘内给药后0.5、2、6、12、24 h升高,TWL:U1组鞘内给药后12 h、U5组鞘内给药后0.5、6、12、24 h升高;与U0.5组比较,U5组MWT鞘内给药后0.5、12、24 h和TWL鞘内给药后0.5、12 h升高;实验四与阴性对照组比较,实验组鞘内注射U0126 5 μg后O.5 h胞浆与胞核p-ERK1和p-ERK2表达下降,与实验组O.5 h比较,实验组胞浆p-ERK1于6、12、24 h升高,胞核p-ERK1于2、6、12、24 h升高,胞浆与胞核p-ERK2于6、12、24 h均升高(P＜0.05).结论 脊髓背角ERK激活参与了大鼠神经病理性疼痛的诱发和维持过程.
关键词： 神经痛 细胞外信号调节MAP激酶类 注射 脊髓
