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布地奈德降低哮喘小鼠肺中去整合素-金属蛋白酶33表达
去整合素-金属蛋白酶33(a disintegrin and metalloproteinase,ADAM33)与哮喘气道的损伤修复有着密切的关系.布地奈德(budesonide,BUD)是临床治疗哮喘应用较广泛的糖皮质激素,其能否通过干预ADAM33的表达来干预哮喘气道重塑,目前相关的报道较少.本研究观察BUD干预对慢性哮喘小鼠模型中肺组织ADAM33表达水平的影响,探讨其对小鼠哮喘气道重塑的干预作用.
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丝裂原激活蛋白激酶p38在支气管哮喘小鼠模型肺组织中的表达
支气管哮喘(简称哮喘)是气道的慢性炎症性疾病.Th2细胞因子是气道炎症细胞特别是嗜酸粒细胞浸润、气道高反应性及哮喘慢性炎症发生、发展的基础.丝裂原激活蛋白激酶p38(p38 MAPK)作为细胞间信号传导的重要成分,参与了许多病理生理过程,可能在哮喘和自身免疫反应中起作用.但目前的研究尚不能确定p38 MAPK与Th2细胞因子在哮喘发病中的作用.我们通过建立哮喘动物模型,观察p38 MAPK表达与哮喘气道炎症、Th2细胞因子之间的关系,探讨其在哮喘发生发展中的作用.
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过氧化物酶体增殖物活化受体γ在支气管哮喘小鼠血管重塑中的作用
越来越多的研究结果表明,血管重塑在支气管哮喘(简称哮喘)的进展中发挥重要作用[1,2].过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPAR-γ)在多种组织中发挥着炎症调控和抗重塑的作用.我们通过哮喘小鼠模型观察哮喘气道血管重塑表现及其与PPAR-γ的关系.
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支气管哮喘小鼠模型应用评价
支气管哮喘(简称哮喘)是由嗜酸粒细胞(EOS)、肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎性细胞参与的气道慢性炎症性疾病,并伴有气道高反应性(AHR)、可逆性气流受限及黏液高分泌,晚期还可出现气道重塑.哮喘发病机制复杂,鉴于人体试验的局限性,目前对哮喘病因、发病机制及治疗等方面的研究很大程度上需要通过动物模型来进行.曾用于制作哮喘模型的动物很多,包括:猫、马、狗、猴、兔、羊、豚鼠、大鼠、小鼠等,其在反映人类哮喘方面各有优点及相应的局限性.其中小鼠模型是近年来采用多的哮喘动物模型.
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白细胞介素-13可溶性受体对支气管哮喘小鼠嗜酸粒细胞凋亡的影响
支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞包括气道炎症细胞、结构细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病[1].嗜酸粒细胞( Eos)是哮喘气道炎症的关键效应细胞.哮喘气道Eos凋亡不足或延迟是气道Eos大量浸润的成因之一.阻断IL-13信号通路可明显改善气道炎症,减轻气道高反应性(AHR).本研究中应用重组IL-13可溶性受体α2(sIL-13Rα2)治疗哮喘小鼠模型,观察BALF中Eos凋亡率及嗜酸粒细胞趋化因子(Eotaxin)表达的影响,探索sIL-13 Rα2对哮喘的治疗作用及相关机制.
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射干麻黄汤对急性哮喘小鼠模型IL-17A及IL-17F表达的影响
目的:探讨射干麻黄汤对急性哮喘小鼠模型肺组织及血清中IL-17A及IL-17F表达的影响,以近一步阐明其治疗哮喘的作用机制.方法:选取60只SD小鼠随机分为6组,分别为空白对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、地塞米松对照组(F组)、射干麻黄汤高、中、低浓度组(C、D、E组).显微镜镜下观察经HE染色的肺组织的病理性改变,哮喘小鼠血清检测IL-17A及IL-17F水平,肺组织中IL-17A mRNA及IL-17F mRNA的水平采用逆转录-聚合酶链反应法检测.结果: 小鼠肺组织中B组IL-17A mRNA及IL-17F mRNA的表达量均明显高于A组(P<0.01).与B组比较, C、D、E组BALF中IL-17A mRNA及IL-17F mRNA水平降低(P<0.05),且C组IL-17A mRNA及IL-17F mRNA表达量下降为明显.C组与F组IL-17A mRNA及IL-17F mRNA表达量相接近.小鼠血清中IL-17A及IL-17F水平变化与小鼠肺组织IL-17A mRNA及IL-17F mRNA水平变化趋势基本相同.结论:射干麻黄汤可能是通过降低IL-17A及IL-17F细胞因子的分泌,来起到治疗哮喘的目的.
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血红素加氧酶-1介导Tr1细胞在哮喘动物模型中的免疫调节作用
目的 探讨血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)介导1型T调节细胞(type 1 T regulatory cells,Tr1)在哮喘动物模型中的免疫调节作用.方法 用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏、激发C5786小鼠建立哮喘模型,并在致敏、激发阶段分别经血红素(hemin)和锡-原卟啉(Sn-protoporphyrin,SnPP)干预.肺泡灌洗液细胞计数和肺脏病理组织学检测评价哮喘动物模型;real-time PCR和Western blot方法分别测定脾脏细胞内HO-1、IL-10mRNA表达和HO-1蛋白量;ELISA方法测定动物血清OVA-特异性IgE(OVA-sIgE)和IL-10水平;流式细胞计数测定脾脏细胞中CD4+CD25+IL-10+Treg、CD4+IL-10R+IFN-γR+Tr1的比例.结果 哮喘小鼠模型经hemin干预后,Tr1数量增加,脾脏细胞内HO-1和IL-10 mRNA表达上调,HO-1蛋白水平明显增加,血清IL-10水平增高,哮喘气道炎症减轻.结论 在哮喘动物模型中HO-1可能通过诱导Tr1细胞,增加IL-10的分泌,抑制哮喘气道炎症.
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不同剂量致敏原对小鼠哮喘模型气道反应性的影响
目的:探讨不同剂量致敏原鸡卵蛋白(OVA)制备哮喘模型时对哮喘小鼠气道反应性的影响.方法:将30只BALB/c小鼠随机分为哮喘组和正常对照组(C组),哮喘组又分为小剂量OVA致敏组(A组)和大剂量OVA致敏组(B组),每组各10只.A、B组在开始和第14天时给予含OVA的致敏液200 μl(A组含10 μg OVA,B组含2 mg OVA,两者含同样的氢氧化铝及生理盐水),21 d开始雾化吸入OVA,连续雾化6 d,操作时观察小鼠活动及呼吸情况;各组分别于末次雾化激发24 h后测定小鼠的无创肺功能中的增强呼气间歇(Penh)值以评价气道反应性;对支气管肺泡灌洗液(BALF)行细胞总数、嗜酸粒细胞计数;取肺组织作HE染色病理切片;ELISA方法测外周血、BALF上清液中的IgE、IFN-γ含量.结果:哮喘B组在第二次致敏后可见喘息、呼吸困难、口唇和尾巴黏膜发紫表现,并在雾化时出现扭体、燥动、呼吸加快等症状.哮喘A、B组的Penh值明显高于C组(P<0.01);从乙酰甲胆碱(Mch)6.25 mg*ml-1开始时哮喘B组的Penh值明显高于哮喘A组(P<0.01).哮喘A组的BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞数(2.41±0.90,0.93±0.18)较正常对照组明显增高(0.65±0.34,0.30±0.16,均P<0.05);哮喘B组中BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞数(4.89±3.49,1.74±0.76)较正常对照组增高(均P<0.05);哮喘B组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞数与哮喘A组比较差异无统计学意义.哮喘A、B组的支气管、血管周围,肺间质及肺泡腔内可见嗜酸粒细胞、淋巴细胞浸润,气道上皮损伤,结构紊乱,气道内杯状细胞肥大增生,气道内分泌大量黏液并有黏液栓形成;正常对照组肺组织气道结构清晰,气道纤毛上皮排列整齐,无明显的炎症改变.哮喘A、B组中外周血和BALF的IgE含量均较正常组的增多(P<0.01);哮喘B组中外周血及BALF的IgE含量(37.47±6.18,26.10±7.18)较哮喘A组(26.09±3.76,12.47±3.02,均P<0.01)明显增多.哮喘A、B组中外周血和BALF中的IFN-γ含量均较正常组减少(P<0.01);哮喘B组中外周血及BALF的IFN-γ含量(35.29±10.92,37.44±21.01)与哮喘A组比较差异无统计学意义(32.22±10.04,36.89±22.00,均P>0.05).结论:哮喘小鼠组模型制备成功.在观察气道高反应方面,较高剂量OVA致敏哮喘模型较低剂量OVA致敏的气道高反应性更敏感.
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益气护卫汤对哮喘小鼠T淋巴细胞亚群和sIL-2R的影响
目的观察益气护卫汤对哮喘小鼠外周血T淋巴细胞亚群和血清sIL-2R水平的影响.方法通过腹腔注射及吸入雾化卵蛋白,制作哮喘小鼠模型,分为四组:哮喘模型组、益气护卫汤组、地塞米松组和正常对照组,采用流式细胞仪分析外周血T淋巴细胞亚群比例及ELISA法检测血清sIL-2R.结果哮喘模型组CD3细胞、CD4细胞、cD8细胞、CD4/CD8、sIL-2R水平均较正常对照组升高(P＜0.05).与哮喘模型组比较:益气护卫汤组、地塞米松组CD4细胞、sIL-2R水平降低(P＜0.05);益气护卫汤组CD4/CD8比例下降(P＜0.05),并与正常对照组比较无显著性差异(P＞0.05).结论益气护卫汤能调节T淋巴细胞亚群比例平衡,并能有效抑制T细胞活化.
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穿心莲内酯磺化物及布地奈德对支气管哮喘小鼠白细胞介素-17、白细胞介素-23表达的影响
目的 观察穿心莲内酯磺化物及布地奈德(BUD)对支气管哮喘小鼠嗜酸性粒细胞(EOS)、中性粒细胞、IL-17、IL-23表达的影响.方法 BALB/c小鼠32只,随机分为哮喘组、穿心莲内酯磺化物组、BUD组、对照组,每组8只.注射和雾化吸入卵清蛋白(OVA)复制哮喘动物模型,以穿心莲内酯磺化物、BUD进行干预,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数、中性粒细胞和EOS数,ELISA检测BALF及外周血中IL-17、IL-23的表达,实时荧光定量PCR法检测肺组织中IL-17 mRNA和IL-23 mRNA的表达.结果 穿心莲内酯磺化物组、BUD组的BALF中白细胞总数分别为(111.98±3.28)×107/L和(64.16±36.75)×107/L,EOS计数分别为(131.29 ±4.89)×107/L及(82.40±11.48)×107/L,均较哮喘组[白细胞总数(208.78±18.52)×107/L及EOS计数(106.80±13.90)×107/L]明显降低(P均＜0.05).穿心莲内酯磺化物组与BUD组比较,BALF及外周血的IL-17蛋白水平差异无统计学意义(P＞0.05).BUD组BALF中IL-23蛋白[89.92(113.87～ 67.79) ng/L]水平较哮喘组[93.30 (173.39～42.95) ng/L]显著下降(P＜0.05).穿心莲内酯磺化物组、BUD组IL-23 mRNA表达分别较哮喘组明显受抑制(P＜0.05),但IL-17mRNA表达在干预组和哮喘组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 穿心莲内酯磺化物及BUD均能抑制哮喘小鼠BALF中白细胞总数及EOS计数和肺组织IL-23 mRNA表达,但对中性粒细胞数和IL-17基因表达的抑制作用不明显.
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黑斑蛤蚧对过敏性哮喘模型小鼠治疗的药效评价
目的 探讨黑斑蛤蚧对过敏性哮喘的治疗作用.方法 以卵清蛋白致敏方法建立BALB/c小鼠过敏性哮喘模型,给予黑斑蛤蚧粉干预治疗.观察肺组织病理变化;检测肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞占白细胞总数的百分比,以及IgE水平,评价黑斑蛤蚧的药效.结果 肺组织炎症改变不明显;嗜酸性粒细胞占白细胞总数百分比以及IgE水平显著低于实验对照(P＜0.05).结论 黑斑蛤蚧对哮喘具有较好的治疗作用.
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重组白细胞介素12对小鼠哮喘气道炎症及NO、IgE水平的影响
目的 探讨重组小鼠白细胞介素12(rmIL-12)腹腔注射对哮喘小鼠气道炎症的抑制作用及对血浆NO、IgE水平的影响.方法 25只C57BL/6小鼠随机分为对照组、哮喘组和rmIL-12治疗组,后两组又各自分为末次激发后2d和8d两个亚组(每个亚组5只).以卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作哮喘模型.治疗组在每次激发前30 min腹腔注射0.1mL含rmIL-12 0.14μg的PBS溶液.收集各组小鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF)血浆,ELISA法检测血浆中NO和IgE水平,BALF沉淀行细胞总数和嗜酸性粒细胞(EOS)分类计数.HE染色观察肺组织病理变化.结果 ①哮喘组小鼠HE染色可见明显的嗜酸性粒细胞浸润,治疗2d和8d组的病理改变较哮喘组明显好转,与对照组无明显区别.②哮喘组小鼠的细胞总数、EOS百分比、NO和IgE水平较对照组均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗2d亚组与相同时间段的哮喘组相比,细胞总数、EOS百分比、NO和IgE水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗8d亚组与哮喘组相比,NO和IgE差异有统计学意义(P＜0.05).③NO与IgE存在密切相关(r=0.839,P ＜0.01).结论 rmIL-12能够明显抑制哮喘小鼠的肺部炎症,同时降低NO和IgE的表达.
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支气管哮喘小鼠外周血CD8+CD28-T细胞群和CD8+CD56+T细胞群作用机制研究
目的 研究哮喘小鼠外周血CD8+CD28-tT细胞与CD8+CD56+T细胞间的关系及两种细胞群在哮喘中的作用.方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组和哮喘组,每组各15只.测定小鼠的气道反应性,对支气管肺泡灌洗液行细胞学分类,观察肺组织的病理变化,流式检测小鼠外周血CD8+CD28-T细胞及CD8+CD56++T细胞的比例,分析哮喘中两种细胞之间的相关性.结果 成功建立小鼠哮喘模型.①哮喘组小鼠BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞(％)较对照组明显增高；②哮喘组小鼠外周血CD8+C28-T细胞及CD8+CD56+T细胞比例均较对照组升高；③CD8+CD28-T细胞与CD8+CD56+T细胞数量上呈正相关(r=0.737,P=0.002).结论 哮喘时外周血CD8+CD56+细胞和CD8+CD28-细胞数目异常,两种细胞正相关,可能在哮喘发病中起重要作用.
