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应用转基因小鼠研究心力衰竭的肾上腺素能机制
目前已有20多种与交感神经肾上腺素能信息系统有关的小鼠品系问世(表1)[1~17],这些品系已形成系统,为心力衰竭(heart failure,HF)的研究提供了有力的工具.多数小鼠品系采用a-肌凝蛋白重链(a-myosin heavy chain, a-MHC)的启动基因来实现转入基因在心脏中的超表达,从而提高肾上腺素能信息系统中某种成分的含量.其他小鼠品系包括非特异性基因删除(disruption)和心脏特异性表达某种抑制肽.目前应用这一类小鼠品系的研究已经积累了大量的信息,许多发现已使我们对HF中肾上腺素能机制有了全新的认识.现阶段采用的研究手段主要有三种:(1)探索小鼠品系的心脏表现型;(2)品系间杂交(crossbreed)来实现基因互补(genetic complementation) ;(3)在小鼠品系上复制实验性 HF.
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原位杂交技术的应用及操作体会
原位杂交技术的原理是依据核酸碱基互补配对原则,利用标记的特定序列探针与待测样本中的原位检测目的基因互补核酸序列杂交,经信号放大显色后镜下观察结果.该方法具有2 个特点:①基因水平的检测,即直接检测DNA 或RNA ;②可以明确定位,在保存组织结构同时揭示组织细胞的异质性,细胞基因表达的异质性和细胞器中的区别定位[1].现根据我科目前开展的DNA 原位杂交人乳头状病毒(HPV)的检测,在日常操作中的方法及体会介绍如下.
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胶原性关节炎大鼠滑膜基因表达谱研究
cDNA微阵列(又称基因芯片)技术是一种基因表达水平检测的高通量技术,根据遗传学中心法则,利用基因互补配对原理,在同一载体上同时进行多基因检测,能同时准确而且快速地获得成千上万个基因在mRNA水平的表达信息.类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎为主的自身免疫性疾病,致残率极高.滑膜类肿瘤样病变、软骨基质损害是其病理特点,认为是一种多因素参与,多基因改变协同作用的结果.为了获取更多基因表达信息,本研究采用含588个cDNA克隆的大鼠基因表达谱微阵列检测胶原性关节炎大鼠滑膜基因谱表达,并与正常大鼠进行比较.获取差异表达基因,为探讨类风湿关节炎病理机制提供线索.
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肝癌基因治疗策略研究进展
自60年代末提出基因治疗概念以来,其初设想主要包括修复突变或缺失的基因以及导入治疗基因,随着近十年来对癌基因认识的深入及转基因技术的日趋完善,肝癌的基因治疗策略也得以不断丰富和发展,如自杀基因及反义技术的运用等。现就这一领域的国内外研究进展作一综述。 一、 反义疗法 肝癌的发生、发展过程中可以检测到许多癌基因及生长因子基因产物的大量表达,运用反义技术可以抑制这些产物的过度表达,从而抑制肿瘤的生长。目前肝癌基因治疗中采用的反义技术主要是反义寡核苷酸技术和核酶技术。 反义寡核苷酸技术是采用与某一些癌基因或生长因子基因互补的RNA或DNA,将其导入肝癌细胞后,可与靶基因的mRNA或其前体hn mRNA互补结合,影响mRNA的成熟及翻译,达到抑制靶基因表达的作用。Huang等[1]用可表达c-ets-2、c-myc、及N-ras基因反义RNA的重组逆转录病毒导入人肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选,转基因肝癌细胞70%生长停滞于G0/G1期,在软琼脂上集落形成能力以及在裸鼠体内的致瘤能力均明显受到抑制;近来分别有学者将胰岛素样生长因子Ⅰ、Ⅱ(IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ)反义基因导入肝癌细胞系后,也均检测到肿瘤细胞的生长及致瘤能力下降,并表明这可能是由于IGF表达受抑引起肝癌细胞凋亡的缘故[2,3]。