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ARMS法检测EGFR基因突变的常见问题及解决对策
近年来分子靶向治疗在非小细胞肺癌中备受关注,其中EGFR基因状态是决定是否用EGFR-TKI治疗的先决条件.目前常用于EGFR检测的方法是ARMS法,该方法灵敏度高、时间短、操作简单,易于在临床样品中检测开展.但由于标本因素的影响、样本DNA抽提、假阳性、假阴性、加样误差及气溶胶污染等可能造成结果的不稳定.本文就针对ARMS法检测基因突变过程中易出现的常见问题进行分析与讨论.旨在与病理技术人员一起学习交流,以提高检测结果的可靠性,为临床医师提供可靠的治疗依据.
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即时定量PCR法和等位基因特异性寡核苷酸PCR法检测肺腺癌EGFR基因第21号外显子L858R突变的对比性研究
自从Lynch等[1]和Paez等[2]发现肺癌细胞中上皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶编码区基因突变以来,研究证明具有EGFR基因第19号外显子(de1746-A750)缺失突变或第21号外显子L858R错义突变的肺癌患者使用酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼进行分子靶向治疗的有效率高达80%以上,而对于缺乏EGFR突变的患者采用上述治疗则基本无效[3].
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肺癌组织EGFR MRP基因mRNA表达相关性及临床意义
目的:研究肺癌组织表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)基因mRNA、多药耐药性相关蛋白基因-MRP基因(Multi-drug resistance associated protein gene,MRP gene)mRNA表达相关性及对肺癌患者预后的影响.方法:原位分子杂交技术检测52例肺癌根治术后石蜡组织标本中癌细胞EGFR基因mRNA与MRP基因mRNA表达,并回顾性随访.结果:52例肺癌组织标本均有不同程度EGFR、MRP基因mRNA表达,其表达水平有密切相关性并与患者术后生存期、化疗疗效相关,与临床病理诸要素无明显相关.结论:EGFR基因与MRP基因密切相关并影响肺癌患者预后.
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EML4-ALK融合基因与EGFR基因突变在肺腺癌发生感染患者中的表达研究
目的 探讨EML4-ALK融合基因与EGFR基因突变在肺腺癌发生感染患者中的表达,为指导临床治疗提供依据.方法 选取医院2012年1月-2014年12月50例肺腺癌发生感染患者作为研究对象,采取ARMS法测定组织中EGFR基因突变,FISH法测定组织中EML4-ALK融合基因状况,并分析其与临床特征关系.结果 50例肺腺癌发生感染患者病灶组织中4例EML4-ALK融合基因表达阳性,阳性率为8.0％,32例EGFR基因突变,突变率为64.0％;女性、年龄＜60岁、吸烟指数＜400支/年的肺腺癌发生感染患者病灶组织中EGFR基因突变率较高(P＜0.05);EGFR基因突变与肺腺癌发生感染患者的临床分期和分化程度以及淋巴转移无相关性,差异无统计学意义;EML4-ALK融合基因表达与EGFR基因突变在肺腺癌发生感染患者中呈现负相关性,差异有统计学意义(r=-0.517,P＜0.05).结论 肺腺癌发生感染患者中EML4-ALK融合基因呈现低表达,而EGFR基因突变呈现高表达,且两者在临床中呈现负相关性,对肺腺癌发生感染的临床治疗具有一定的指导意义.
关键词： 肺腺癌 感染 EML4-ALK融合基因 EGFR基因 表达 -
结直肠癌合并血吸虫病患者肿瘤相关基因突变研究
目的 目前血吸虫病与结直肠癌的关系一直存在争议.本研究拟探讨合并血吸虫病的结直肠癌患者肿瘤相关基因突变的表达及意义.方法 选取岳阳市第一人民医院2012-12-01-2014-10-01病理存档标本,其中合并血吸虫感染的结直肠癌患者26例,未合并血吸虫感染的结直肠癌患者42例.使用life-PGM平台对商品化的Oncomine组合基因(22个热点基因)进行靶向二代测序.结果 26例合并血吸虫的结直肠癌共有79个突变位点,42例单纯结直肠癌有96个突变位点.其中多数为体细胞单核苷酸变异(single nucleotide variants,SNVs)(168/175,96％).单核苷酸变异比例在合并血吸虫结直肠癌组和单纯结直肠癌组之间,差异无统计学意义,P>0.05.26例合并血吸虫结直肠癌组中,25例检出基因突变,突变基因个数1～7个(平均3.03个);42例单纯结直肠癌组中,38例检出基因突变,突变基因个数1～6个(平均2.28个).合并血吸虫结直肠癌的突变频率96.2％(25/26),与单纯性结直肠癌的突变频率90.5％(28/42)比较,差异无统计学意义,P=0.475.常见的为TP53基因突变,两组的突变频率分别为65.38％(17/26)和57.14％(24/42).结论 合并血吸虫病的结直肠癌患者与未合并血吸虫病的结直肠癌患者肿瘤相关基因突变无明显差异,因此血吸虫病与结直肠癌之间的关系还需进一步探讨.
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EGFR基因CA-SSR多态与晚期非小细胞肺癌吉非替尼临床疗效的关系
目的 研究EGFR基因第1内含子区CA-SSR多态性与晚期非小细胞肺癌患者吉非替尼临床疗效的相关性.方法 对80例接受过吉非替尼治疗的晚期非小细胞肺癌患者进行了分析.采用PCR扩增和直接序列测定的方法确定这80例肺癌患者外周血DNA样本中CA-SSR多态的基因型,统计学分析CA-SSR多态性与患者临床疗效的相关性.结果 80例患者中共检测到11种不同CA-SSR等位基因型,包含的cA重复序列数为10-24.携带短CA重复序列的患者(至少一条等位基因CA重复数≤16)吉非替尼治疗后的临床获益率为88.0%,而在长CA重复序列的患者(两条等位基因CA重复数均＞16)为50.9%,CA-SSR多态性与近期疗效具有显著的相关性(P=0.005),但两组患者的无进展生存和总生存差异均无显著性.结论 EGFR基因第1内含子区CA-SSR多态性可以应用于临床预测晚期非小细胞肺癌患者吉非替尼的近期疗效.
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EGFR及E-cadherin表达与食管癌转移的关系
目的探讨分析食管癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)的表达与上皮型钙黏附素(E-cadherin)的表达与食管癌转移的关系.方法采用免疫组织化学LSAB法对42例食管癌标本的EGFR和E-cadherin表达进行研究.结果EGFR在远处转移组和局部淋巴结转移组的表达率(分别为47.62%、56.52%)均高于相应对照组(27.08%、26.32%)(P＜0.05);在组织学分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级3组中的表达率分别为16.67%、42.86%、71.43%,3组间差异有显著性(P＜0.05).E-cadherin在远处转移组和局部淋巴结转移组的表达率(分别为33.33%、26.09%)均低于相应对照组(54.17%、57.89%)(P＜0.01,P＜0.05);在组织学分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级3组中表达率分别为71.43%、47.62%、14.29%,3组间差异有显著性(P＜0.05).结论EGFR及E-cadherin与食管癌的浸润和转移相关.
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胸膜活检与胸水活检EGFR基因检出率对比
目的 比较肺腺癌胸膜活检与胸水活检EGFR基因检出率.方法 选取河南省肿瘤医院2015年1月-2016年12月行软式胸腔镜检查并取胸膜活检的肺腺癌患者56例.2013年1月-2017年7月年送检胸水肺腺癌111例.进行EGFR基因检测,对比二者EGFR基因检测结果.结果 ①在检测EGFR基因是否突变时,胸膜活检突变率53.57％,胸水活检突变率56.75％,二者差别不大,无统计学意义(x2=0.153,P=0.743).②胸膜活检EGFR基因高丰度检出率为63.33％,胸水活检EGFR基因高丰度检出率35.48％.相对于胸水活检胸膜活检更容易检出EGFR基因高丰度突变,二者差异有统计学意义(x2=6.347,P=0.015).结论 在肺腺癌中对于EGFR基因是否突变,标本来自胸膜及胸水差别不大;但是胸膜中比胸水中更容易检出高丰度突变.
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Egfr基因启动子区的DNaseⅠ高敏感位点定位
目的 用一种新方法研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因启动子区脱氧核糖核酸酶Ⅰ高敏感位点(DNaseⅠhypersensitive site,DHS),找出确切DNaseⅠ酶切位点,进而预测可能与DHS相结合的转录因子,探索egfr基因表达调控机制.方法本研究以宫颈癌细胞系HeLa(EGFR+)、乳腺癌细胞系MDA-MB-231(EGFR+)和阴性对照白血病细胞系K562(EGFR-)为模型,在用浓度为5 kU/L、10 kU/L DNase Ⅰ消化细胞核中染色质后,采用连接介导PCR(ligation-mediated PCR,LM-PCR)的方法,检测出egfr基因启动子区DHS,并进行测序.通过对测序结果进行分析,确定egfr基因启动子区DHS的具体位置.用生物信息学方法对所得DHS进行分析,预测与之结合的转录因子. 结果对测序结果进行分析得到确切DNaseⅠ酶切位点.在egfr基因表达阳性的宫颈癌细胞系HeLa、乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,DHS位于转录起始点上游300 bp至500 bp的启动子区内;而在egfr基因表达阴性的白血病细胞系K562中未发现DHS.运用生物信息学方法,用转录元件搜索软件(transcription element search software,TESS)对DHS进行分析,找到16个可能与egfr基因启动子区DHS序列相结合的转录因子.结论在egfr基因表达阳性的细胞系中,egfr基因启动子区存在DHS,可能是转录因子的结合区.这些实验结果为研究egfr基因启动子区空间构象、预测转录因子结合位点提供了部分实验依据.
关键词： 连接介导PCR DNaseⅠ高敏感位点 EGFR基因 启动子 -
浅析 EGFR 基因第21号外显子突变的检测
目的：探讨 eGfr 基因第21号外显子突变的检测措施。方法通过实验室的化学检验，进行仔细观察和记录，做出系统性规律性的检验总结。结论 eGfr 基因突变检测可以从血清样本中检测 eGfr 基因突变，准确预测靶向药物治疗的有效性，使患者大限度的受益。
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靶向EGFR基因siRNA腺病毒载体构建及其对EL-4影响
目的 构建含EGFR基因siRNA腺病毒载体,并研究其对EL-4细胞株中EGFR基因表达的影响.方法 合成双链寡核苷酸并克隆入pShuttleH1载体,pShuttleH1-siEGFR线性化后电转化到含pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中获取重组质粒,脂质体转染293细胞获取重组腺病毒Ad-siEGFR;TClD50法测定病毒效价;利用得到的重组腺病毒感染鼠EL-4细胞株,采用Western-blot检测感染前后EGFR蛋白表达水平的变化,观察AdHl/siEGFR对EL-4细胞EGFR表达的影响.结果 成功构建EGFRsiRNA腺病毒载体,该载体可明显抑制EL-4细胞中EGFR蛋白的表达.结论 构建的AdHl/siEGFR腺病毒能有效抑制EGFR基因在EL-4细胞株中的表达,为胸腺瘤基因治疗提供了新的方法和材料.
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胃低分化腺癌患者中P53、KI-67、EGFR与HER-2的表达水平及其与预后的相关性#
目的：探究分析P53、KI-67、EGFR与HER-2在胃低分化腺癌患者血清中的表达水平及其预后的相关性。方法：采用免疫组化技术研究55例人正常胃黏膜组织以及60例胃低分化腺癌组织标本中Her-2，EGFR，Ki-67，P53蛋白的表达特点及其与淋巴结转移和预后的关系，并通过图像分析对免疫组化标记结果进行定量分析，从而探讨四者与胃低分化腺癌发生发展的关系。结果：胃低分化腺癌患者的过表达率分别为P53（41%）、KI-67（18.5%）、EGFR（17.9%）与HER-2（55.2%），胃低分化腺癌患者的性别、年龄、组织分级、肿瘤分型等临床病理因素与KI-67、EGFR与HER-2表达无关（P＜0.05），P53表达与胃低分化腺癌患者的组织学分级相关。胃低分化腺癌转移及淋巴结转移对患者的无病生存时间及总生存时间具有一定影响。结论：胃低分化腺癌患者血清P53、KI-67、EGFR及HER-2水平的检测在患者预后判断及评估中具有显著的指导价值，为临床上分子靶向治疗的研究提供了借鉴资料。
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PCR-SSCP检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的筛检试验评价
目的:评价PCR-SSCP筛检非小细胞肺癌(NSCLC)EGFR基因突变的临床应用潜力.方法:分别采用DNA测序法和PCR-SSCP分析对一定数量的NSCLC标本进行EGFR基因突变检测,以DNA测序结果为金标准,计算PCR-SSCP法的灵敏度、假阴性率、特异度、假阳性率、约登指数、粗符合率、预测值和似然比等指标;同时随机抽取20%的样本,重新进行PCR-SSCP分析,计算两次结果的Kappa指数值.结果:PCR-SSCP分析的灵敏度为97.2%,假阴性率为2.8%,特异度为94.3%,假阳性率为5.7%,约登指数为0.915,粗符合率为94.8%,阳性预测值为77.8%,阴性预测值为99.4%,阳性似然比为17.1,阴性似然比为0.5,前后两次PCR-SSCP分析的Kappa指数值为0.81(P<0.05).结论:PCR-SSCP检测NSCLC EGFR基因突变具有较高的真实性、可靠性和实用性.
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非小细胞肺癌患者EGFR基因突变与CT征象及临床特征的关系
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLCs)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与CT征像及临床特征的关系.方法 回顾性分析2014年9月—2016年7月我院收治的187例接受EGFR突变基因检测的NSCLCs中腺癌患者的临床资料,其中EGFR有效突变67例(有效突变组)、未有效突变120例(非有效突变组).2组患者临床资料肺部CT影像学资料完整,分别采用单因素和多因素Logistic回归分析NSCLCs患者发生EGFR的影响因素.结果 与非有效突变组比较,EGFR有效突变组中女性患病比例较高,吸烟指数较低,患者肺组织病灶CT表现为边缘较清晰,呈现分叶、毛刺,病灶多含有磨玻璃影(GGO)成分,伴有气道支气管征和胸膜凹陷征的表现,并易伴发癌性淋巴管炎和肺转移(均P<0.05).2组肺组织出现坏死、空洞、钙化、晕征和空泡征的比例差异无统计学意义(P>0.05).Logistic回归分析显示,女性、含有GGO成分、毛刺、有气道受累、癌性淋巴管炎是NSCLCs患者发生EGFR有效突变的危险因素.结论 EGFR有效突变好发于女性,其CT的可靠预测征象为含有GGO成分、毛刺、含气支气管征、癌性淋巴管炎.对临床中不易获取病理的危重患者,进行EGFR有效突变的CT影像学评估及预后预测具有一定指导意义.
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非小细胞肺癌 EGFR 基因突变的研究进展
近年来，随着大气质量的下降，肺癌的发病率与死亡率持续增高，成为世界各地越来越受关注的焦点。其中非小细胞肺癌（ non－small cell lung cancer， NSCLC）占占大多数，而因其无明显的早期症状，一旦临床中确诊时， NSCLC中大多数都已经是中晚期，从而错失手术治疗的佳时机。传统的治疗方法如放疗、化疗在中晚期NSCLC治疗中占据主要地位，虽能改善近期疗效，但远期生存率结果不尽如人意。随着对肺癌的治疗方法不断提高与发展，其中受到关注的是非小细胞肺癌表皮生长因子分子的靶向治疗，疗效为明显［1］。本文旨在介绍EGFR基因的基本结构及其表达意义、检测方法、转移灶中的突变状态、EGFR抑制剂及其在非小细胞肺癌治疗中的疗效及意义。
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EGFR基因在不同胃黏膜中表达的研究
目的:研究胃癌(gastric cancer,GC)及不同胃黏膜组织中表皮生长受体(EGFR)的表达规律及其与凋亡的关系,探讨胃癌形成过程中的可能机制,为临床应用以表皮生长受体靶点的胃癌防治措施提供理论依据.方法:采用免疫组织化学染色(SP法)检测不同胃黏膜组织中EGFR.30例浅表性胃炎(chronic superficial gastritis,CSG);31例萎缩性胃炎(chronic Atrophic gastritis,CAG),15例异型增生(Dysplasia,Dys),胃癌组织32例.结果:从CSG→CAG→Dys→GC过程中,EGFR表达均呈递增趋势.CSG灰度值(57.64±4.44)、CAG灰度值(55.05±6.97)、Dys灰度值(48.59±4.16);GC灰度值(32.25±4.13).EGFR表达在CsG、CAG、Dys、GC之间表达有统计学意义(P＜0.05).胃癌组织EGFR的表达与年龄、性别、肿瘤大小无关;在临床分期和组织分化程度方面EGFR阳性表达率明显不同,具有统计学意义(P＜0.05).结论:EGFR基因表达可作为在胃黏膜由浅表向萎缩、不典型增生和胃癌发展过程中的有用指标,且EGFR基因表达可判断胃癌的组织类型,分化程度.
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喉癌中EGFR基因扩增、表达及临床意义
目的 研究喉癌中表皮生长因子受体(EGFR)基因的扩增、表达,探讨其在喉癌发生、发展中的作用及临床意义.方法 采用差异PCR(differential PCR)方法检测40例喉鳞状细胞癌及配对癌旁正常组织中EGFR基因的扩增(即基因拷贝数增加);应用RT-PCR方法检EGFRmRNA水平;应用SPSSl3.0软件对数据进行统计学分析.结果 喉癌组织中有]3例(占32.5%)EGFR基因拷贝数增加,癌旁对照组中则未检测到(χ 2=15.537,P<0.005);喉癌组织中EGFR mRNA平均积分光密度为872.356±62.340,癌旁对照组为346.4254±57.380(t=5.959,P<0.001);喉癌组织分化程度越低,病理分期越晚,EGFR基因扩增和mRNA表达水平越高(P<0.05).结论 喉癌中EGFR基因在DNA水平上的扩增是EGFRmRNA过表达的原因之一,EGFR的扩增和过表达在喉癌的发生、进展中发挥一定作用.
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EGFR基因靶向治疗非小细胞肺癌的研究进展
非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)是现阶段临床发现的肺癌患者中发病率高的一种类型,治疗手段匮乏,效果不甚理想,目前临床中研究热点是EGFR基因在NSCLC靶向治疗中的作用.表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)是基于EGFR基因作用而开发出来,用于治疗EGFR基因突变阳性的NSCLC患者.本文综述了EGFR基因靶向治疗非小细胞肺癌的研究进展.
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RNAi沉默EGFR基因对卵巢癌放疗敏感性的影响
目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因对卵巢癌放疗敏感性的增强作用.方法 构建针对EGFR基因序列特异性短发夹状RNA(shRNA)表达载体,应用卵巢癌SKOV3细胞建立裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、单纯放疗组、基因放疗组,采用6 MV X线照射裸鼠瘤组织,监测瘤体积,测量瘤质量,取瘤组织行RT-PCR、Western印迹、免疫组化、电镜检测.结果 治疗后三组瘤体积差异均显著(均P＜0.01),单纯放疗组、基因放疗组的抑瘤率分别为28.1%、46.1%,基因放疗组EGFR基因的表达明显下调,透射电镜下瘤组织凋亡、坏死明显.结论 动物实验证实RNAi沉默EGFR基因明显提高卵巢癌的放疗敏感性.
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EGFR基因21外显子L858R突变肺腺癌患者化疗和靶向治疗疗效的对比研究
目的:研究化疗和靶向治疗对EGFR基因21外显子L858R突变肺腺癌患者的临床疗效和患者生存率的影响.方法:选择2012年1月～2016年1月在重庆市肿瘤医院治疗的95例EGFR基因21外显子L858R突变的肺腺癌患者,按患者治疗方式不同分为化疗组(n=54)和靶向组(n=41).化疗组患者采用一线化疗药物进行治疗,靶向组患者采用EGFR基因靶向制剂进行治疗.在完成一个周期治疗后,比较两组患者的近期疗效及治疗过程中不良反应的发生情况.对患者进行为期1年的随访,比较其生存情况.结果:(1)化疗组患者治疗后临床总有效率为92.59％(50/54),靶向组总有效率为73.17％(30/41),化疗组显著高于靶向治疗组(P=0.010).(2)化疗组不良反应发生率为25.93％(14/54),靶向治疗组则为19.51％(8/41),组间比较差异无统计学意义(P=0.463).(3)在随访过程中,化疗组患者有18例死亡,36例存活,患者生存率为例66.67％;靶向组患者有24例死亡,17例存活,患者生存率为41.46％,化疗组生存率显著高于靶向治疗组(P=0.014).结论:对于EGFR基因21外显子L858R突变肺腺癌患者而言,采用化疗治疗的疗效明显优于靶向治疗,且二者安全性相当,化疗治疗的患者预后较靶向治疗者更好.
