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杆树突状细胞的分离培养
树突状细胞(DC)是一类专职性抗原呈递细胞,不仅启动免疫反应和诱导免疫耐受,还在调节免疫反应与免疫耐受的平衡中起决定性作用.肝脏因其固有的移植耐受性而在免疫耐受研究中深受关注,肝移植物容易存活,伴有肝移植的其他器官(如心脏、肾脏等)移植存活时间也较其单独移植明显延长.近有人提出,在肝移植耐受中DC可能起关键作用,但因其难于分离培养,国外仅美国Pit tshburgh大学在做相关研究,国内尚未见报道.材料与方法:1.肝非实质细胞的分离:取6~8w小鼠,麻醉后无菌开腹,门静脉插管,用前灌液(PBS+肝素500μ/10 0ml)灌流2~3min,改用注射器缓慢推注2ml Ⅳ胶原酶(GIBCOL公司,0 .05%);取材后剪碎,15ml Ⅳ胶原酶液(0.05%)体外消化30min.尼龙网过滤,PBS液清洗(400g×5min离心)两次,稀释成4~5ml细胞悬液. 下铺细胞分离液Percoll(Pharmacia公司)制成的不连续密度梯度液,5 00g×30min离心后,细胞分三层,先吸弃上层细胞碎片,再吸取两液体界面的肝非实质细胞,避免吸到底层的血细胞,RPMI 1640液(GIBCOL公司)清洗两次,400g×5min离心,即可得肝非实质细胞.2.肝树突状细胞(HDC)的培养:将肝非实质细胞用含灭活的10%胎牛血清(GIBCOL公司)的RPMI 1640完全培养液调整细胞浓度为2.5×106/ml,接种于24孔培养板,每孔1ml,加G M-CSF(GIBCOL公司)10ng/ml.培养第三天轻轻吸去未贴壁细胞,换液 .后隔天半量换液,培养第7~8d可收取HDC.结果与讨论每只小鼠可得肝非实质细胞约1.0~1.5×107个,细胞大小不一,类型较多.培养24~48hr后,有大量细胞贴壁生长,少量HDC前体细胞半贴壁状散在分布,经筛选、扩增,第4d时HDC数量增多,出现6~8个细胞组成的小集落.第7~8d,HD C数量增多,此阶段细胞有一明显的增殖高峰,有大量半贴壁半悬浮的集落,集落表面的细胞有小的突起.第7~8d,每只小鼠HDC得率约为2~3×106个.因HDC难于分离培养,使HDC的研究受到限制.我实验室在查阅文献的基础上,经过摸索,终于能在普通实验条件下分离培养HDC,为进一步进行HDC相关研究提供技术基础 .
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自然杀伤性T细胞与移植
自然杀伤性T细胞(NKT细胞)是一种免疫调节细胞,同时表达T细胞及部分NK细胞标志.NKT细胞可在α-GalCer刺激下体外大量扩增,呈TH0样细胞因子分泌,激活后可以产生IL-4、IFN-γ等细胞因子,并具有细胞毒性作用.NKT细胞在诱导移植耐受、调节移植物抗宿主病及移植物抗肿瘤效应等方面具有一定作用,应用前景广泛.
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免疫球蛋白样转录物3,4与移植耐受的关系
免疫球蛋白样转录物3和4是表达于单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞表面的一种抑制性受体,在耐受性树突状细胞及抑制性T细胞级联的形成中起着非常重要的作用.研究它们的功能将有助于了解免疫耐受及移植耐受的机制,并寻找一条新的减轻移植排斥反应的途径.
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混合嵌合体诱导移植耐受的研究进展
为了降低器官移植受体长期的发病率和死亡率,取得移植耐受是终目标.在不同的动物模型中,通过诱导混合嵌合体可取得长期稳定的供体特异性耐受.本文主要综述近几年在啮齿动物中开展的较缓和的预处理方案的进展,以及和把这些方案扩展到大动物时所取得混合嵌合体和持久耐受的进展.另外,对通过混合嵌合体诱导异种耐受的进展也将论述.
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调节性T细胞的研究进展
调节性 T 细胞具有免疫低反应性和免疫调节功能两大特征。它们在自身免疫性疾病的治疗、肿瘤的治疗以及移植耐受的诱导等方面具有广泛的应用价值。本文对调节性T 细胞的产生、类型以及在自身免疫性疾病,移植免疫耐受和肿瘤免疫方面的研究进行综述。
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人CTLA4Ig腺病毒载体的构建及其生物学功能研究
目的: 通过同源重组构建CTLA4Ig腺病毒载体, 研究其生物学活性, 并用于基因治疗诱导心脏移植耐受.方法: 通过基因重组技术, 将CTLA4Ig基因克隆至腺病毒穿梭质粒pCA13中. 然后将该质粒与腺病毒辅助质粒同源重组, 经过293细胞包装, 构建CTLA4Ig腺病毒载体.用RT-PCR、SDS-PAGE及Western blot等技术, 检测包装的病毒感染293细胞后CTLA4Ig蛋白的表达及分泌, 通过体外实验, 观察病毒感染的293细胞上清对混合淋巴细胞反应( MLR)的抑制作用.通过大鼠体内实验, 检测用CTLA4Ig腺病毒载体基因治疗后, CTLA4Ig在体内的表达.结果: CTLA4Ig腺病毒载体构建成功.体外实验证实, CTLA4Ig腺病毒感染的293细胞上清液, 能够抑制异基因脾细胞的单向MLR.体内实验表明, 经过静脉途径给予受体大鼠CTLA4Ig腺病毒载体, 能够诱导移植耐受, 延长心脏移植物的存活.结论: 构建的CTLA4Ig腺病毒载体, 体外感染293细胞能够分泌CTLA4Ig蛋白.该蛋白可抑制T细胞的活化, CTLA4Ig腺病毒载体可用于体内基因治疗诱导移植耐受.
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B细胞激活因子与移植免疫关系研究进展
目前临床移植中,免疫抑制治疗有效的防止了T细胞介导的急性排斥反应。供者特异性抗体(DSA)的出现和慢性排斥反应是实现移植耐受的主要障碍,而B细胞在其中所起的作用越来越受到人们的重视[1]。而B细胞激活因子(BAFF B cel-activating factor belonging to the TNF family)是肿瘤坏死因子超家族成员,能促进B细胞增生、分化和产生免疫球蛋白,在体液免疫中起重要作用[2]。BAFF与移植后体液性排斥反应密切相关,本文就BAFF在移植免疫中的作用作如下综述。
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树突状细胞与移植免疫耐受的研究
目前认为,诱导对供者特异性免疫耐受,控制器官移植后的排斥反应,是终克服异体(种)排斥的有效途径[1].起源于骨髓造血干细胞的树突状细胞(dendritic cell, DC)是激活特异性免疫反应的专职抗原递呈细胞(antigen-presenting cell, APC),数量甚少,但分布广泛、迁徙力强,加之树突状所赋予的巨大表面积,有利于接触并递呈抗原,是能力强的APC,同时由于其在移植排斥与移植耐受平衡中的双向调节作用,在移植免疫研究中备受瞩目[2,3].
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混合性嵌合体作为移植耐受诱导物进行临床复合组织移植的潜在可能性
混合性造血嵌合体作为移植耐受诱导物的研究已开展了40余年,在啮齿类及灵长类模型上均存在几种不同的实验设计.混合性嵌合体诱导的耐受性的许多特征,包括其可信度及强度,均使之成为临床器官移植的极具吸引力的选择.而造血细胞巨大的诱导耐受能力在临床病例中已得到证实,临床上接受骨髓移植的病人接受同一捐献者的肾脏移植后,在未经任何免疫抑制治疗情况下即表现出对捐献者的肾脏及皮肤移植物的永久耐受.
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移植物抗宿主病预防性治疗研究进展
移植物抗宿主病(GVHD)是异基因造血干细胞移植后长期存在的严重问题,产生GVHD的免疫应答是涉及供者T细胞和自然杀伤细胞(NK)与受者特异细胞相互作用的一个复杂过程,是由细胞因子和淋巴细胞--靶细胞相互作用共同介导的,并可导致多脏器损伤.通过单克隆抗体、基因治疗、细胞治疗、疫苗等生物学方法可选择性去除引起GVHD的细胞或诱导建立同种异体特异性移植耐受,有效提高移植后生存率,改善生存质量,成为造血干细胞移植研究的活跃领域.
关键词: 移植物抗宿主病 移植耐受 异基因造血干细胞移植