首页 > 文献资料
-
长距离小载体PCR检测多发性骨髓瘤 IgH基因转换区易位
免疫球蛋白重链基因(immunoglobulin heavy chin,IgH)相关的染色体易位是多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中常见的染色体异常,可能与发病有关,与疾病的预后也有一定关系.为了快速、简便检测IgH基因相关易位的发生并明确易位的伙伴染色体和克隆断裂点,根据易位的断裂点通常位于IgH基因转换区,参考国外专利和文献,建立了长距离小载体PCR方法.结果表明,用该方法检测骨髓瘤细胞株U266,得到3.5kb的PCR产物,两端序列分别与11q和IgH基因α1转换区同源.结论:长距离小载体PCR是一种有效的检测手段,应用该方法对中国人遗传背景的MM患者进行大样本检测,可以发现IgH基因相关易位的发生和分布,有助于解释该遗传背景下的特殊临床表现,阐明发病机制,寻找MM治疗的分子靶点以及对预后的评估.
-
急性髓性白血病免疫球蛋白重链基因和T细胞受体γ基因重排的检测意义
免疫球蛋白重链基因 (IgH) 和T细胞受体 (TCR) 基因重排常被认为是淋巴细胞的克隆标志.但是,近年来的研究表明,急性髓性白血病(AML)细胞亦可出现IgH和TCR基因重排.为此,我们采集51例AML患者骨髓,利用PCR方法检测IgH及TCRγ基因重排,并初步探讨其临床意义.
-
细胞遗传学和间期FISH在淋巴瘤诊断中的应用
目的 评估细胞遗传学和荧光原位杂交技术(FISH)对临床和(或)细针穿刺细胞学检查诊断为淋巴瘤或不能除外淋巴瘤病例的价值.方法 同时采用常规组织学、免疫组织化学、细胞遗传学检查和间期FISH技术方法,对223例直径≥1.5 cm淋巴结的手术活检标本进行系统性研究.FISH探针采用直接荧光标记的IGH LSI(R)双色分开探针.结果 2例患者的取材因坏死成分较多无法诊断.221例患者的病理诊断中,霍奇金淋巴瘤(HL)44例(19.9%),非霍奇金淋巴瘤(NHL)162例(73.3%),其他恶性病变4例(1.8%),良性病变11例(5.0%).间期FISH结果显示,HL的免疫球蛋白重链基因(IGH)异常的发生率为13.6%(6/44),NHL为51.2%(83/162),良性病变为0%(0/11),差异有统计学意义(P＜0.001).细胞遗传学和间期FISH联合检查时,HL和NHL的检出率分别提高到15.9%和77.8%,其中有3例为组织病理学和免疫组化检查不能定性者.结论 间期FISH是检测IGH基因异常的快速和敏感的手段.细胞遗传学和间期FISH检测是淋巴瘤诊断的重要辅助手段.
-
重症肌无力患者胸腺组织中SNX17 mRNA的表达
重症肌无力(myasthenia gravis,MG)的发病具有一定的遗传倾向性和易患性,与HLA表型、乙酰胆碱受体(AChR)α亚单位基因、免疫球蛋白重链基因和T细胞受体基因有关[1].
-
关键词：
-
14q32异常和多发性骨髓瘤
多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞的恶性肿瘤,其病因和发病机制尚未完全阐明.近几年,随着分子遗传学技术的进步,在MM中检测到了许多染色体和遗传学的异常,其中位于14q32上的免疫球蛋白重链基因(immnoglobulin heavy chaingene,IgH gene)易位被认为可能与MM的发生发展、临床表现、治疗以及预后等有密切关系.本文就MM中关于14q32异常的研究进展综述如下.
-
免疫球蛋白重链基因重排检测在原发性胃肠道B细胞非霍奇金淋巴瘤中的应用研究
目的：探讨多聚酶链反应（PCR）检测免疫球蛋白重链基因重排在原发性胃肠道淋巴组织增生性疾病中的良恶性鉴别中的应用价值。方法选取存档蜡块45例，采用HE常规染色及SP免疫组化方法进行组织学分类，运用PCR半巢式扩增免疫球蛋白重链基因重排，2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。结果IgH FR3A和IgH FR3A+FR2A在MALT淋巴瘤的阳性检测率分别为60.7%（17/28）和75.0%（21/28），在DLBCL中的阳性检测率分别为60.0%（9/15）和73.3%（11/15），在MCL中的阳性检测率分别为100.0%（1/1）和100.0%（1/1）。IgH FR3A在胃肠道淋巴瘤中的阳性检测率为60.0%。IgH FR3A联合IgH FR2Ad在胃肠道淋巴瘤中的阳性检出率为73.3%（33/45）。结论采用PCR方法检测免疫球蛋白重链基因重排能够作为淋巴瘤诊断的有效辅助手段，有助于对原发性胃肠道淋巴组织增生性疾病的良恶性做出正确的诊断。
-
急性B淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链基因克隆性重排的研究
目的:初步阐明急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)免疫球蛋白重链(IgH)基因克隆性重排的发生及其异质性.方法:通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光双脱氧核苷酸末端终止法以及生物信息学技术,对25例经细胞形态学、免疫表型和细胞遗传学确诊为B-ALL患者的IgH基因克隆性重排进行了测序研究.结果:25例患者中有24例(96%)IgH基因发生了克隆性重排,其中54.2%(13/24)为单克隆性重排,45.8%(11/24)为寡克隆性重排.根据同一个体不同寡克隆CDR3区的同源性,这些寡克隆可分为不相关(54.5%)、部分相关(27.3%)和完全相关(18.2%).结论:25例B-ALL患者的IgH基因中96%发生克隆性重排,其中54.2%为单克隆性重排,45.8%为寡克隆性重排,个体的寡克隆之间54.5%存在异质性.
关键词： 急性B淋巴细胞白血病 免疫球蛋白重链基因 克隆性重排 -
荧光定量PCR分析弥漫大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链基因重排表达
背景与目的:大多数B细胞淋巴瘤患者综合治疗后可以达到完全缓解,但是一半以上的患者终究要复发.复发来源于体内残留的耐药淋巴瘤细胞,即微小残留病变.但临床上发现IgH基因重排阳性患者并非都出现复发或远处浸润.因此,推测阳性患者是否复发,可能与IgH基因重排的表达量有关.本研究探讨荧光染料标记的即时定量PCR方法检测弥漫大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链基因(IgH)重排的可行性及临床意义.方法:44例DLBCL患者的57份新鲜骨髓标本用于检测IgH基因重排, Namalwa细胞系作阳性对照,U-937细胞系作阴性对照.β-actin 作内参照,SYBR Green荧光染料标记的实时荧光定量PCR方法分别检测IgH基因重排CDR III.结果:分析融解曲线可以确定IgH基因重排产物的特异性.荧光定量PCR检测IgH基因重排的阳性率63.2%.IgH/β-actin阳性表达量在0.01～4131.69,中位数0.42.Ⅰ/Ⅱ期患者IgH基因重排表达量中位数为0,Ⅲ、Ⅳ期患者IgH基因重排表达量中位数为0.35,经统计学检验,两组患者之间差异有显著性(P＝0.018).LDH值高于正常组,IgH基因重排表达量为0.39,LDH值低于正常组,IgH基因重排表达量为0.01,经非参数检验,两组患者之间差异有显著性(P＝0.046).结论:荧光染料标记的定量PCR方法可用于弥漫大B细胞淋巴瘤的骨髓微小残留病变的检测.检测骨髓IgH基因重排,可以协助分期.
-
BCL-2基因研究进展
B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)基因于1984年由Tsujimoto首先发现.1988年试验报告Bcl-2基因可使细胞存活时间延长.1990年进一步确证Bcl-2基因具有抗细胞凋亡的功能后,Bcl-2基因作为重要的凋亡抑制基因,在多种肿瘤中得到研究.近年来的研究表明,Bcl-2基因的异常表达,与肺癌的发生、发展及预后密切相关.1 Bcl-2基因的分子生物学1.1 Bcl-2基因家族已发现的Bcl-2基因家族成员包括:抑制细胞凋亡的Bcl-2、Bcl-X2、BHRF1和Ced9,促进细胞凋亡的Bax、Bcl-Xs、Bad和Bak,以及参与细胞存活的Mcl-1、Al和LMW5HL等.人的Bcl-2基因是从大多数滤泡型非霍奇金B细胞淋巴瘤中,首先在第14和18号染色体易位断裂点t(14,18)(q31～q21)分离获得的.正常Bcl-2基因位于18q21.3染色体上,约含230kb,该基因有3个外显子和2个启动子,在外显子2和3之间,有一个大约225kb的内含子.在B细胞滤泡型淋巴瘤中,Bcl-2基因常易位至14q32染色体,正常与易位的基因均表达分子质量为26kD的蛋白,含有229个氨基酸.染色体易位使14号染色体上的免疫球蛋白重链基因与位于3′端的Bcl-2基因并列形成头尾结构,这一异常融合基因导致Bcl-2蛋白的过度表达,它编码26kD的蛋白定位于线粒体膜、核膜和内质网,能在各种不同的正常组织和细胞(如T细胞、B细胞和造血细胞)的激活过程中表达.Bcl-2基因及其表达蛋白可抑制多种组织细胞的凋亡,并延长细胞寿命,所以称其为凋亡抑制基因.1993年,Boise等发现了另一类与Bcl-2有44%同源并参与调节细胞死亡的蛋白质Bcl-X.Bcl-X分两种,即Bcl-Xl和Bcl-Xs.研究证实,Bcl-Xl蛋白可抑制细胞凋亡,其功能与Bcl-2蛋白相似而作用强度较弱.Bcl-Xs的作用则与Bcl-2、Bcl-Xl相反,即通过抑制后两者的作用而促进细胞的程序性死亡.近年来认为,Bcl-Xs可能是作为Bcl-2的结构抑制子,通过对其下游的细胞凋亡调节因子作用而抑制Bcl-2基因的功能.Oltvai等于1993年用免疫共沉淀法测到Bax蛋白,与Bcl-2有21%的同源性.研究发现,Bax蛋白有对抗Bcl-2蛋白抑制细胞凋亡的作用.Bcl-2/Bax两蛋白之间的比例,是决定对细胞凋亡抑制作用强弱的关键因素,Bcl-2＞Bax,细胞趋于存活;Ba＞Bcl-2,细胞趋于凋亡.因此Bax被认为是极重要的促细胞凋亡基因之一.Bak是新近发现的基因,对Bcl-2有抑制作用,类似Bax/Bcl-Xs.Bak蛋白对Bcl-2的抑制作用,可能是通过其它蛋白质信号传递途径中介.在酵母细胞中,Bak蛋白与Bcl-Xl或E1B19K蛋白形成异源二聚体.大量实验证明,这种异源二聚体的形成可能具有细胞特异性.由于Bak可与E1B19K蛋白相互作用,而后者参与核骨架中核纤层作用,Bak可能通过E1B19K蛋白或其他蛋白与核物质作用调控细胞死亡.由于Bcl-Xl的分布不如Bak广泛,推测在细胞中可能存在与Bak相互作用的Bcl-2家族新成员.
-
二代测序技术监测急性淋巴白血病的克隆演变
目的 采用二代测序技术监测复发儿童B细胞急性淋巴白血病(B cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)的克隆演变.方法 20例B-ALL患儿的初诊和复发骨髓标本,分别提取全基因组DNA,通过多重PCR方法扩增免疫球蛋白重链基因(immunoglobulin heavy chain,IGH)互补决定区3(complementarity determining region 3,CDR3)序列并进行二代测序检测.结果 20例B-ALL患儿初诊骨髓标本IGH CDR3测序结果显示,17例有CDR3特异性序列,其中9例有1种CDR3特异性序列,7例有2种CDR3特异性序列,1例有3种CDR3特异性序列;复发骨髓标本IGH CDR3测序结果显示,16例有CDR3特异性序列,其中9例有1种CDR3特异性序列,7例有2种CDR3特异性序列;对初诊和复发标本CDR3序列进行比对分析,发现4例患儿出现克隆演变.结论 采用二代测序技术可监测儿童B-ALL复发过程中的克隆演变.
-
淋巴细胞恶性增殖病基因重排及其意义
目的:对淋巴细胞恶性增殖病进行研究.方法:应用多聚酶链反应-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)和银染色法,对307例淋巴细胞恶性增殖病进行了免疫球蛋白重链基因(IGH),T细胞受体r链基因(TCRr)的克隆性重排进行检测.结果:IGH 160例(52.1%),TCRr 58例(188%),双阳性22例(7.1%),阴性67例(21.8%).非霍奇金淋巴瘤(NHL)与NHL白血病的基因重排分布相似;霍奇金淋巴瘤(HD)明显较低;急性淋巴细胞性白血病(ALL)及多发性骨髓瘤(MM)进展期基因重排高达95%,90%;缓解期60%,45%;慢性淋巴细胞性白血病(CLL)重排率低;急性粒细胞性白血病(AML)及慢性粒细胞性白血病(CML)为对照,它们也有少量淋巴细胞基因重排.病理学型别以不能分型者,原发灶以鼻及咽淋巴环者之TCRr重排明显增高,且与恶性程度呈正相关.并可以此重排来检测微小病灶(MRD)之存在.结论:可用此指导化疗.
-
多发性骨髓瘤发病的分子生物学机制
多发性骨髓瘤(MM)是浆细胞恶性肿瘤,其瘤细胞是终末分化的B淋巴细胞.近,在MM中发现大量的染色体异常,明显的是13q缺失和免疫球蛋白重链基因易位.易位的伙伴染色体常是癌基因,易位后激活癌基因.另外,抑癌基因如N-ras失活在MM发生、发展中也起重要作用.本文就此讨论MM中常见的几种染色体异常.
-
多发性骨髓瘤免疫球蛋白重链基因易位研究
多发性骨髓瘤(MM)是以产生单克隆免疫球蛋白为特征的恶性浆细胞增殖性疾病,其发生的分子机制目前尚不清楚.近,国外学者发现,大多数的骨髓瘤细胞中有免疫球蛋白重链基因(IgH)的易位.通过IgH易位,原癌基因部分或全部拼接到IgH位点上而表达失控,终促使肿瘤的发生.与IgH交互易位的伙伴染色体并不固定,易位所累及的基因近半数已被克隆,还有更多的基因及其功能有待阐明.本文将MM IgH易位及相关的分子遗传学作简要综述.
-
儿童急性淋巴细胞性白血病IgH基因和TCR基因重排的研究
采用PCR或巢式PCR方法对71例未治疗的急性淋巴细胞性白血症(ALL)患儿骨髓样本的免疫球蛋白重链基因(IgH)和T细胞受体基因(TCR)进行了克隆性重排检测,结果显示在52例B系ALL及19例T系ALL中分别存在82.7%(43例)和15.8%(3例)的IgH CDRⅢ区域重排,而TCRV δ 2D δ 3基因重排见于32.7%的B系ALL(17例)和63.2%的T系ALL(12例),二种基因重排在儿童ALL的覆盖面达到88.7%(63例),此结果提示IgH CDRⅢ和TCRV δ 2D δ 3基因可作为监测儿童ALL的标志基因;采用相同方法对完全缓解期患儿的δ7份脑脊液标本进行了检测,结果显示9例存在IgH CDRⅢ基因重排,4例存在TCRV δ 2D δ 3基因重排(与骨髓标本重排类型一致),提示采用PCR技术对ALL患儿CSF标本进行IgH和V δ 2D δ 3基因重排的检测对早期诊断中枢神经系统白血病(CNSL)具有较大价值;采用有限稀释法对完全缓解期的儿童ALL病例骨髓样本进行上述二种基因重排的定量分析,结果提示对儿童ALL进行微小残留病(MRD)的持续追踪监测可指导化疗方法的选择、观察治疗效果并预测预后.
关键词： 急性淋巴细胞性白血病 免疫球蛋白重链基因 T细胞受体基因
