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腐胺促进人骨髓间充质干细胞成骨分化
目的:探索腐胺对人骨髓间充质干细胞(MSC)增殖分化的影响,以期建立一种新的MSC成骨分化诱导体系.方法:采集3份健康人骨髓MSC,应用MTT实验检测腐胺对细胞增殖的影响.实验分为:①腐胺组(100μmol/L腐胺),②阳性对照组(加入以地塞米松、抗坏酸磷酸盐和p-磷酸甘油组成的标准诱导体系),③阴性对照组(未加腐胺体系),MSC培养1周后应用PCR法检测细胞Runx-2表达水平,2周后进行碱性磷酸酶原位组织化学染色,并将部分细胞裂解后测定细胞碱性磷酸酶活性及蛋白质浓度.此外,以标准成脂分化诱导体系为阳性对照,MSC培养体系中加入腐胺,培养2周后油红O染色,观察腐胺诱导MSC成脂细胞分化作用.结果:在一定范围内腐胺促进人骨髓MSC增殖,且效应呈浓度依赖性.腐胺(100 μmol/L)培养MSC 1周后,细胞Runx-2表达水平显著增加;2周后,组织化学染色显示,细胞呈现明显的碱性磷酸酶活性,单位细胞蛋白质浓度内酶活性显著高于阴性对照组(0.87±0.012 vs 0.52±0.010) (P ＜0.01),也明显高于阳性对照组(0.83±0.029) (P =0.02).在该浓度下,油红O染色显示腐胺组MSC未发生脂肪细胞分化.结论:腐胺可促进MSC增殖并促使其向成骨细胞分化,可作为MSC体外成骨细胞分化新诱导成分之一.
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不同浓度腐胺对人肝细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨不同浓度腐胺对体外培养人正常肝细胞增殖、凋亡的影响.方法 将体外培养的人正常肝细胞株LO2分为腐胺组与对照组,不同浓度腐胺组以含腐胺浓度分别为0.25、0.50、1.00、10.00、20.00、40.00、80.00、160.00、320.00、640.00 μg/mL完全培养基培养细胞,对照组以不添加腐胺完全培养基培养细胞.对照组与不同浓度腐胺组处理的LO2细胞培养12h后,再以四唑化合物电子耦联显色法(MTS)、流式细胞技术(FCM)分别测定细胞的增殖活性(用吸光度值表示)与凋亡率,并对两组数据进行相关性分析.结果 MTS结果显示,0.25、0.50、1.00、10.00、20.00 μg/mL浓度腐胺组LO2细胞吸光度值均较对照组(0.474±0.022)升高,差异有统计学意义(P＜0.05),并且1.00 μg/mL浓度时达到峰值(0.834±0.012);80.00 μg/mL及以上浓度腐胺组LO2细胞吸光度值较对照组降低,差异有统计学意义(P均＜0.01);40.00 μg/mL腐胺组LO2细胞吸光度值(0.477±0.009)与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).流式细胞技术结果显示,0.25、0.50、1.00、10.00、20.00 μg/mL浓度腐胺组LO2细胞凋亡率均较对照组(15.23 ±1.82)％降低,差异有统计学意义(P＜0.05),并且1.00 μg/mL腐胺组细胞凋亡率达到低值(2.30±1.00)％;80.00μg/mL及以上浓度腐胺组LO2细胞凋亡率较对照组升高,差异有统计学意义(P均＜0.01);40.00μg/mL腐胺组LO2细胞凋亡率(16.10±1.45)％与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).相关性分析结果显示,各组浓度腐胺处理LO2细胞其细胞增殖与凋亡率呈负线性相关关系(r=-0.989,P=0.000).结论 低浓度(0.25～20.00 μg/mL)腐胺对人正常肝LO2细胞增殖有促进作用,而较高浓度(80.00 μg/mL及以上)的腐胺则出现明显的诱导凋亡作用,低浓度腐胺促进细胞增殖可能是通过抑制细胞凋亡而实现.
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充分认识创面对机体的危害性
本文结合笔者前期研究工作及临床经验,着重介绍创面导致机体出现局部乃至全身性的损害,临床上表现为机体体内物质丢失、外部细菌毒素聚集入侵、组织坏死物毒性、可能的间变与癌变、疼痛及其它心理性影响等的危害.建议重视创面的积极处理、尽早消灭创面,从而减少机体体液、营养的丢失,控制创面的感染,减少局部细菌毒素、组织毒素的产生,避免毒素的进一步吸收入血所造成机体的局部、全身性的损害.
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腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA对肺癌A-549细胞抑制作用的实验研究
鸟氨酸脱羧酶(ODC)是多胺生物合成途径中的关键酶和限速酶.许多肿瘤促进剂、诱导剂在诱发组织癌变的过程中,伴有ODC活性的异常升高,在一些癌基因转化的细胞系及几乎所有的动物肿瘤中,也有ODC基因表达的异常[1].ODC作为多胺生物合成途径中的第一个限速酶,也是活性低的酶,可催化L-鸟氨酸生成腐胺.有报道,ODC的含量在许多肿瘤中增高,并与肿瘤的复发有一定的关系[2].
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胍丁胺代谢产物腐胺对吗啡镇痛、耐受和依赖的影响
目的 观察腐胺对吗啡镇痛、耐受及依赖的影响,探讨腐胺治疗阿片耐受性和依赖性的潜力.方法 小鼠醋酸扭体模型和55℃热板法测痛阈;吗啡恒定剂量给药制备耐受模型,55℃热板法测痛阈;吗啡递增剂量给药制备依赖模型,纳洛酮催促观察戒断症状,以胍丁胺(40 mg·kg-1,ig)为阳性对照药,腐胺灌胃给药剂量分别为10,20,40,80 mg·kg-1.结果 在小鼠醋酸扭体模型中腐胺具有镇痛作用;而在小鼠55℃热板实验中,腐胺本身无镇痛作用,能较弱地增强吗啡镇痛;腐胺能够减弱吗啡耐受的形成,对已形成的吗啡耐受也有治疗作用;腐胺能够减弱吗啡躯体依赖的形成和表达.结论 腐胺和胍丁胺具有相似的生物学活性,具有治疗阿片耐受和依赖的潜力.
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多胺生物合成抑制与肿瘤恶性表型逆转
多胺是一类生理性脂肪族有机胺,包括腐胺、精脒及精胺,是细胞增殖与分化平衡的重要调节因子.已有资料表明细胞癌变、肿瘤浸润、转移与多胺生物合成的增强有关.为了研究多胺在维持肿瘤细胞恶性表型的作用,探索抑制多胺生物合成作为肿瘤治疗靶标的可能性,本项目对抑制多胺生物合成逆转肿瘤恶性表型的作用进行了全面系统的研究,其研究结果包括以下五方面:
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不同来源及品种水蛭、地龙中腐胺的含量测定及统计学分析
目的:建立不同品种及商品地水蛭、地龙中腐胺的含量测定方法,为水蛭、地龙的质量评价提供科学的依据.方法:采用反相高效液相色谱法,Diamonsil C18(200 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(58∶ 42)为流动相,流速为1.0 mL·min-1,检测波长230 nm,柱温为室温,以腐胺为特征变量,采用SPSS19.0统计软件进行方差分析和聚类分析.结果:不同品种、规格的地龙、水蛭商品药材中腐胺成分含量不同,沪地龙和广地龙腐胺含量平均值分别为0.0406 mg· g-1、0.0161 mg·g1,有显著性差异(★P＜0.05),蚂蟥含量平均值为0.1008 mg·g-1,水蛭的含量平均值0.0681 mg·g-1,无显著差异;聚类分析结果显示广地龙百分百聚为一类,水蛭和蚂蟥有交叉聚类现象.结论:高效液相色谱法测定地龙、水蛭中腐胺的含量,方法简便,结果准确,结合方差分析和聚类分析,为地龙、水蛭的质量评价和资源利用提供理论基础.
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多胺浓度对pGEM体外转录影响的研究
目的:研究3种多胺在体外转录中对RNA合成的调节,对3种多胺影响转录的能力进行比较.方法:用Run-off体外转录法,以EcoRI 酶切pGEM质粒线性DNA为模板,由T7RNA聚合酶催化反应.结果:3种多胺对转录的影响,在低浓度时随着多胺浓度的升高促进作用增强.在高浓度时随着3种多胺浓度增加,促进作用逐渐减弱.结论:多胺影响体外转录中RNA的合成,存在促进其合成的适浓度.3种多胺对转录的促进作用各不相同,其促进转录的能力大小依次为精胺,精脒,腐胺.
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无血清培养基的优化对rhEPO-Fc融合蛋白体外活性的影响
目的：研究基础培养基I/F/D中添加不同浓度的培养基组分对rhEPO-Fc融合蛋白体外活性的影响。方法：通过单因素实验结合Box-Behnken效应面法，筛选适合rhEPO-Fc表达的较优培养基组分。结果：在基础培养基中添加1% F68、10%维生素、7.7 g/L腐胺、10.1 g/L乙醇胺和5.38 g/L胰岛素时，rhEPO-Fc融合蛋白的体外活性可达10268 IU/ml，比初始的基础培养基I/F/D提高了108.4%。结论：优化后的培养基能提高rhEPO-Fc融合蛋白体外活性，降低生产成本，可为后期的中试生产提供重要参考。
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柱前衍生化高效液相色谱法测定人唾液中腐胺和精胺的含量
目的 建立柱前衍生化高效液相色谱法同时测定人唾液中腐胺和精胺含量的方法. 方法 唾液经纯化、丹酰氯衍生化后用苯提取,以Hypersil BDS CN为正相色谱柱,丙酮-氯仿(2:98)为流动相,流速1 mL/min进行测定,检测波长为425 nm. 结果 腐胺和精胺均在50～1 000 nmol/mL范围内线性关系良好,r分别为0.999 1和0.999 2,此法回收率分别为94.65%和90.48%,RSD分别为1.6%和2.1%. 结论 此法灵敏、稳定,重现性好,可检测人唾液中多胺含量.
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癫痫患儿多胺水平的变化及其意义
目的:探讨癫痫患儿的血、尿多胺水平变化及其意义.方法:用高效液相色谱分析法,测定32例癫痫患儿在癫痫发作后48小时内的空腹血腐胺(PUT)、精脒(SPD)、精胺(SPM)和晨尿PUT、SPD、SPM浓度,并选择20例正常儿童作为对照.结果:癫痫患儿血、尿PUT、SPD、SPM平均浓度高于正常儿童(P＜0.05).但部分性发作与全身性发作、原发性癫痫与继发性癫痫患儿之间,血、尿多胺浓度的升高无统计学意义(P>0.05).结论:癫痫患儿体内多胺代谢紊乱.
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反相液相色谱法测定毛竹不同组织中的腐胺
目的 通过对毛竹中腐胺年动态变化的研究,为毛竹抗旱研究提供参考.方法 反相液相色谱法测定毛竹不同组织中的腐胺.结果 毛竹组织中腐胺含量呈现多样的变化,总的来说各组织中腐胺含量为竹叶＞竹枝＞竹鞭,大小年毛竹多胺的变化呈现出不同的趋势,小年毛竹竹叶7月时含量较高,为11.39μg/g,随着时间推移腐胺的含量逐渐下降,进入春笋大年后腐胺含量增加;而小年竹枝中7月腐胺含量较低,为4.99 μg/g,进入出笋大年后也呈现增加的趋势;竹鞭的腐胺含量7月小,为2.50 μg/g,次年4月出现大幅下降,含量仅为1.09 μg/g.结论 探索多胺对竹子笋芽分化的影响具有一定意义,多胺能够提高竹子的抗旱性,而且竹子能吸收外源多胺.将多胺作为生长调节物质研究竹子抗旱机理也是未来研究的方向.
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高效液相色谱法测定肝组织鸟氨酸脱羧酶活性
目的建立肝组织鸟氨酸脱羧酶(ODC)活性的高效液相色谱测定方法.方法高效液相色谱法测定30 min内ODC催化产生的腐胺.结果腐胺在1.074～68.746 μmol·1,-1时线性关系良好.低检测量为0.04 nmol,测定结果的重现性好,变异系数为6.84%.部分肝切除后6 h,余留肝组织ODC活性明显高于正常对照组(P＜0.01).结论建立了可靠的、灵敏度较高的ODC测定方法.
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肝癌患者尿多胺SPE-HPLC检测的临床应用价值
多胺(polymaines, PAs)为低分子直链非蛋白性含氮化合物,主要有腐胺(putrescine, Pu)、精脒(spermidine, Sd)和精胺(spermine, Sm).PAs源于L-鸟氨酸和L-蛋氨酸,与细胞生长、分化与增殖有密切关系,在生物大分子合成中起重要作用.
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不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响
目的：探讨不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblasts，HSF）增殖、迁移、凋亡的影响。方法将体外HSF分为腐胺组和对照组，以含腐胺浓度分别为0.5、1、5、10、50、100、500、1000μg/ml完全培养基培养细胞设为腐胺组，不添加腐胺设为对照组。经对照组及不同浓度腐胺组处理的HSF培养24 h后，再以四唑化合物电子耦联显色法（MTS法）测定细胞增殖能力（用吸光度值表示），Transwell迁移实验测定细胞的迁移能力，流式细胞技术（Flow Cytometry, FCM）Annexin V/PI标记法测定细胞凋亡率。结果（1）细胞增殖能力（MTS）测定结果显示，0.5、1、5、10μg/ml腐胺组HSF的吸光度值较对照组升高（P<0.01），并且1μg/ml时达峰值（0.754±0.024）；500、1000μg/ml腐胺组HSF吸光度值较对照组降低（P<0.01）；50、100μg/ml腐胺组HSF的吸光度值与对照组无明显差异（P>0.05）；（2）Transwell迁移实验结果显示，1μg/ml腐胺组穿过微孔膜的细胞数目较对照组显著增加（P<0.01），且达到峰值309±21；50μg/ml及以上浓度腐胺组HSF穿过微孔膜的数目较对照组减少（P<0.05）；0.5、5、10μg/ml腐胺组HSF穿过微孔膜的细胞数目与对照组比较无明显差异（P>0.05）；（3）流式细胞凋亡结果显示，0.5、1、5、10μg/ml腐胺组HSF凋亡率较对照组显著降低（P<0.05），而且在1μg/ml时细胞凋亡率达低值（11.10±0.79）%；100μg/ml及以上浓度腐胺组细胞凋亡率较对照组显著升高（P<0.01），而且随着浓度增加凋亡率逐渐升高；50μg/ml腐胺组与对照组比较细胞凋亡率无明显差异（P>0.05）。结论微量腐胺可维持细胞正常的迁移能力，显著提高HSF的细胞增殖能力，而较高浓度的腐胺能显著抑制HSF迁移与增殖，并诱导细胞发生凋亡，提示不同浓度的腐胺会对创面愈合起到完全不同的作用。
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外源性腐胺对正常大鼠肾功能和细胞凋亡的影响
目的 探讨一定浓度的外源性腐胺对肾功能及对细胞凋亡的影响.方法 采用健康SD大鼠90只,完全随机分为正常对照组(N组)共10只,外源性腐胺注射组(P组)80只,其中P组设P1组和P2组两个腐胺剂量亚组,每亚组各40只.N组和P1、P2组分别于腹腔内一次性注射生理盐水和50、25 μg·g-1两种腐胺剂量稀释液各2 ml,注射后24、48、72、96 h四个时相点各组活杀10只,心脏采血测定血清中Cr、BUN的含量,摘取肾器官制作组织切片HE染色后光镜下观察组织形态学改变,TUNEL法检测肾细胞凋亡,对比分析这两组的异同.结果 (1)P组大鼠各亚组光镜下见肾组织少部分有轻度的水肿,无明显的细胞坏死；(2)P1和P2两亚组的Cr、BUN含量与N组比较存在差异,呈不同程度升高(F=15.135-58.644,P＜0.01;F=5.71-29.28,P＜0.01);两亚组组内不同时相点Cr、BUN含量也分别存在差异并出现不同程度升高(F=18.59-18.93,P＜0.01;F=3.19-5.84,P＜0.05).(3)P1和P2亚组肾组织中凋亡细胞逐渐增多,分别在96 h和48 h时相点达到峰值.与N组比较,P1组96 h肾细胞凋亡率[(24.78±2.19)％ vs(4.47±0 33)％,P＜0.01],P2组48h肾细胞凋亡率[(26.27±2.13)％ vs (4.47±0.33)％,P＜0.01].结论 一定浓度的外源性腐胺能导致肾功能不同程度的损害,可诱导肾细胞异常凋亡；细胞凋亡程度和肾功能损害可能与血中腐胺浓度存在关联.
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外源性腐胺对大鼠精神状态的影响
目的 探讨不同浓度的外源性腐胺对大鼠精神状态的影响.方法 选取清洁级健康SD大鼠80只,根据外源性腐胺不同注射剂量,随机分为两组:高浓度组(P.组,n =40; 50μg/g)和低浓度组(P2组,n=40;25μg/g),每组分别行外源性腐胺腹腔注射,两种剂量的腐胺分别混合生理盐水稀释液共2ml行大鼠腹腔内注射1次.连续观察并记录注射后大鼠的精神状态改变,包括大鼠活动度、精神状况、进食情况等.结果 实验大鼠在腹腔注射后大部分出现了精神状态改变.P1组中SD大鼠在腹腔注射腐胺后呈精神抑制改变,活动转差,嗜睡,无进食水,约30分钟后情况逐渐好转,变活跃直至正常；而P2组SD大鼠则呈兴奋型改变,相互对嘴撕咬、狂躁奔跑,频繁进食水,约30分钟后逐渐平静并恢复如常.P1组和P2组比较,精神状态改变存在差异(x2=69.408,P＜0.01).结论 不同浓度的外源性腐胺能诱导大鼠出现精神状态改变,低剂量外源性腐胺能刺激大鼠产生兴奋作用,高剂量外源性腐胺则对大鼠精神状态影响表现为先抑制后兴奋作用.
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腐胺对小鼠成纤维细胞中Atp8a1基因表达的影响
目的:研究腐胺对小鼠成纤维细胞中Atp8a1基因表达的影响,初步探讨其作用机制.方法:用基因芯片和Real-time PCR检测正常小鼠和Azin1(Antizyme inhibitor1)基因敲除小鼠肝脏组织中Atp8a1基因的在mRNA水平上的表达;构建Atp8a1基因启动子的虫荧光素酶报告质粒pGL3-Atp8a1-P;将重组质粒转染NTH3T3成纤维细胞中,分别在含有4 μg/ml腐胺和不含腐胺的条件下,用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶活性.结果:在含有腐胺的培养条件下,转染Atp8a1基因启动子虫荧光素酶报告质粒的细胞虫荧光素酶的活性明显改变.结论:腐胺能够抑制Atp8a1基因启动子活性而降低其在NIH3T3成纤维细胞中的表达.
关键词： 腐胺 Atp8a1 启动子 基因表达 Azin1 基因敲除小鼠 -
多胺代谢与抗肿瘤治疗新靶点研究进展
多胺(Polyamines,PA)是一类广泛分布于组织细胞内的天然脂肪族多价正离子胺类物质,包括腐胺(Putrescine,Pu),精脒(Spermidine,Sd)及精胺(Spermine,Sm).研究发现,肿瘤的快速生长有赖于细胞内多胺含量的大幅增长,多胺代谢异常亦可引起细胞的恶性转化[1].因此,能影响细胞内多胺水平的代谢途径已成为当今抗肿瘤研究的新靶点[2].现就这一领域的研究进展加以综述.
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不同浓度腐胺对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响
目的 探讨不同浓度腐胺对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移、凋亡的影响.方法 常规培养HUVEC,取第3～5代细胞进行以下实验.(1)按随机数字表法(分组方法下同)将细胞分为500、1 000、5 000 μg/mL腐胺组,每组3孔,分别以含相应浓度腐胺的完全培养液培养24 h后,采用倒置光学显微镜观察细胞形态.(2)将细胞分为0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、500.0、1 000.0 μg/mL腐胺组及对照组,每组4孔.各腐胺组细胞采用含相应浓度腐胺的完全培养液、对照组采用不含腐胺的完全培养液培养24 h后,采用比色法测定细胞增殖活性,结果以吸光度值表示.(3)同实验(2)将细胞分组(每组1孔)及培养后,Transwell迁移实验测定细胞迁移能力.(4)同实验(2)将细胞分组(每组1瓶)及培养后,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率.对数据进行单因素方差分析、Kruskal-Wallis检验、Dunnett检验.结果 (1)培养24 h后,500 μg/mL腐胺组细胞贴壁良好,形态无明显改变;1 000μg/mL腐胺组细胞贴壁减少,细胞变小、变圆;5 000 μg/mL腐胺组细胞未贴壁、呈碎片状.(2)0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、500.0、1 000.0 μg/mL腐胺组及对照组细胞增殖活性分别为0.588±0.055、0.857±0.031、0.707±0.031、0.662±0.023、0.450±0.019、0.415±0.014、0.359±0.020、0.204±0.030、0.447±0.021,组间总体比较差异明显(x 2=6.86,P=0.009).0.5、1.0、5.0、10.0 μg/mL腐胺组细胞增殖活性较对照组升高(P＜0.05或P＜0.01),500.0、1 000.0.μg/mL腐胺组细胞增殖活性较对照组降低(P值均小于0.01),50.0、100.0 μg/mL腐胺组细胞增殖活性与对照组相近(P值均大于0.05).(3)各腐胺组及对照组迁移细胞数组间总体比较差异明显(F=138.662,P＜0.001).1.0、5.0、10.0μg/mL腐胺组迁移细胞数多于对照组(P值均小于0.01),500.0、1 000.0 μg/mL腐胺组迁移细胞数少于对照组(P值均小于0.01),0.5、50.0、100.0μg/mL腐胺组迁移细胞数与对照组相近(P值均大于0.05).(4)各腐胺组及对照组细胞凋亡率组间总体比较差异明显(x2 =3.971,P=0.046).0.5、1.0、5.0、10.0 μg/mL腐胺组细胞凋亡率较对照组降低(P值均小于0.05),500.0、1 000.0μg/mL腐胺组细胞凋亡率较对照组升高(P值均小于0.01),50.0、100.0 μg/mL腐胺组细胞凋亡率与对照组相近(P值均大于0.05).结论 低微浓度的腐胺能显著促进HUVEC增殖与迁移;而较高浓度的腐胺能显著抑制HUVEC增殖与迁移,并促进细胞凋亡.
