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人细胞色素P450 2D6 4个单核苷酸突变株活性及其与药物相互作用的体外研究
目的 探讨单核苷酸替换对人细胞色素P450 CYP2D6酶活性及其与药物相互作用的影响.方法 体外构建CYP 2D6野生株(WT)和G169R、P34S、E410K、V7M等4个单核苷酸突变株的表达载体并在酿酒酵母中诱导表达,裂解并提取各酶的蛋白微粒体,用蛋白质印迹法验证其表达,再分别测定各酶代谢底物丁夫洛尔和3-[2-(N,N二乙基-N-甲铵)乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素(AMMC)的米氏常数(Km)和大酶促反应速度(Vmax). 以AMMC为底物对CYP 2D6 WT和V7M、G169R进行高通量药物抑制实验,所选药物包括已知的2D6抑制剂(奎尼丁、舍曲林)、底物(氯丙嗪、氟西汀、阿米替林)和既非抑制剂又非底物的化合物(酮康唑、曲格列酮),求得不同药物对不同酶的半数抑制浓度(IC50).结果 蛋白质印迹法检测显示各酶均表达良好.CYP2D6WT代谢丁呋洛尔和AMMC的Km值分别为19.22、2.06 μmol-L-1,Vmax值分别为154.53、21.60 pmol·min-1·mg-1,Vmax/Km值分别为8.04、11.49山.min-1·mg-1.与CYP2D6WT比较,V7M代谢2种底物的Vmax值均要高得多(P<0.05),G169R和E410K均稍低,而P34S都要低很多(P<0.05);各突变株的Km值也发生了或多或少的改变.药物对CYP2D6 WT和V7M和G169R的抑制程度排序均为奎尼丁>氯丙嗪>氟西汀>阿米替林>舍曲林>酮康唑/曲格列酮;药物对V7M和G169R的IC50值与CYP2D6 WT的IC50值比值,奎尼丁分别为0.88和0.80,氯丙嗪0.54和0.80, 氟西汀0.65和1.02,阿米替林0.85和0.71,舍曲林0.43和0.74.结论 CYP2D6部分单核苷酸突变株的酶动力学特征与野生株有明显差异,单核苷酸替换可导致酶对药物抑制的敏感性发生变化.
关键词： 细胞色素P450 CYP2D6 多态性 单核苷酸 突变 半数抑制浓度 -
重组CYP2D26主要B细胞表位在Ⅱ型自身免疫性肝炎小鼠模型构建中的效应研究
目的 研究在大肠杆菌中以重组病毒样颗粒形式表达的人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白 CYP2D6主要抗原表位aa262-270免疫小鼠后对构建小鼠自身免疫性肝炎模型的效应.方法 设计人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白主要抗原表位aa262-270 (WDPAQPPRD)的下负链寡核苷酸片段,经退火后插入表达乙肝核心蛋白 HBcAg的质粒pNP中(pNP质粒由pThioHisA质粒插入HBcAg基因片段构建而成).构建成质粒pNP-AIH2;转染大肠杆菌DH5α感受态细胞；以IPTG诱导重组蛋白表达,经硫酸铵沉淀、洗涤,密度梯度离心纯化和脱盐后,肌肉注射免疫小鼠3次,以ELISA和western blot检测免疫后小鼠特异性抗体的产生和水平,通过转氨酶检测和肝脏石蜡切片HE染色观察炎症反应.结果 SDS-PAGE结果显示重组菌诱导表达的目的蛋白分子量为19kD,与预期相符;电镜证实其以可溶性的病毒样颗粒形式存在;ELISA显示,免疫小鼠血.清与包被的肝脏匀浆蛋白特异反应,检测到持续存在的特异抗体,滴度至少为1∶2000; western blot检测表明,抗血清在分子量约为55 kD的地方产生了一个特异的条带,与小鼠CYP2D6蛋白大小一致.与正常对照相比,实验组小鼠转氨酶水平未明显升高,肝切片HE染色没有观测到明显的病理特征.结论 携带人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白 CYP2D26主要表位的病毒样颗粒免疫小鼠后,可刺激产生较强的特异抗体水平,但在观测时间内,未见诱导小鼠产生明显的肝脏炎症反应.
关键词： 肝炎 自身免疫性 表位 B淋巴细胞 细胞色素P450 CYP2D6 -
CYP2D6*10基因多态性与服用他莫昔芬乳腺癌患者预后的相关性
目的 探讨CYP2D6 * 10基因多态性与服用他莫昔芬(TAM)乳腺癌患者预后的相关性.方法 收集四川省肿瘤医院2008年1月至2010年10月期间200例服用TAM的乳腺癌患者的口腔黏膜,采用实时RT-PCR法检测CYP2D6 * 10基因多态性,并分为CYP2D6突变组(CYP2D6 * 10/ * 10)和CYP2D6正常组(CYP2D6 wt/ * 10和CYP2D6 wt/wt).采用卡方检验及秩和检验分析CYP2D6 * 10基因多态性与临床病理特征的关系,采用Cox比例风险回归模型分析其与预后的关系.结果 在200例乳腺癌中,CYP2D6 * 10/ * 10纯合子94例(47%),CYP2D6 wt/wt野生型48例(24%),CYP2D6 wt/ * 10杂合型58例(29%).CYP2D6 * 10基因多态性与患者的组织学分级、TNM分期、HER-2表达、肿瘤类型无关(Z=-0.444,P=0.674;Z=-0.716,P=0.500;χ2=0.066,P=0.797;χ2=0.694,P=0.405).Log-rank检验分析显示CYP2D6 * 10突变组患者平均无瘤生存时间明显短于CYP2D6 * 10正常组患者(47.2个月比51.2个月,χ2=5.554,P=0.018).Cox比例风险回归模型显示,CYP2D6 * 10基因型与患者无瘤生存时间明显相关(HR=2.755,95%CI:1.230～6.173,P=0.014).结论 CYP2D6 * 10/ * 10基因型乳腺癌患者服用他莫昔芬预后较差.
关键词： 乳腺肿瘤 他莫昔芬 细胞色素P450 CYP2D6 预后 -
CYP2D6基因多态性与利培酮治疗精神分裂症疗效的关联研究
目的 探讨CYP2D6基因多态性与利培酮治疗精神分裂症临床疗效间的关系.方法 114例汉族精神分裂症患者(患者组)经单一利培酮治疗12周,应用PANSS、个人与社会表现量表(Personal and Social Performance Scale,PSP)、瑞文标准推理测验、韦氏智能测验数字识记法、数字划消测验分别对患者组进行基线和12周时的测评,同时收集汉族健康对照者178名(对照组);采用TaqMan等位基因分型方法对2组CYP2D6基因的5个多态性位点(rs1065852、rs1135840、rs 16947、rs1080985、rs5030655)进行基因分型,并对不同多态性位点间患者基线时及治疗12周前后量表得分差值进行比较分析.SHEsis在线软件检测Hardy-Weinberg平衡、成对多态位点连锁不平衡、基因型和等位基因频率分析、单倍型分析比较.结果 rs5030655位点为纯合子,非多态性位点.患者组与对照组在4个多态性位点的基因型分布和等位基因频率差异均无统计学意义(x2=0.439～2.327,均P＞0.05).rs16947和rs1080985存在较强的连锁不平衡(r2=0.655).rs16947/rs1065852/rs1080985组成的单倍型AGG在患者组(14.26)中的比例明显大于对照组(7.07),差异有统计学意义(x2=8.008,P=0.004).治疗前,rs1135840基因型CC患者的瑞文标准推理测验得分较基因型CG、GG患者得分少(F=3.205,P＜0.05),经多重检验后差异仍有统计学意义(P=0.038).治疗后,rs 1135840基因型CC、CG患者的瑞文标准智力测验得分差值均大于基因型GG患者(F=3.590,P=0.031),经多重检验后差异仍有统计学意义(P=0.036、0.038);基因型CC和基因型CG患者的得分差之间差异无统计学意义.治疗后,rs 16947基因型AA患者较基因型GG、AG患者的数字划消测验2得分差值小(F=3.249,P=0.043),经多重检验后差异仍有统计学意义(P=0.022、0.042),基因型GG和AG患者的得分差值差异无统计学意义.结论 CYP2D6基因多态性与精神分裂症的易感性无关,rs1 135840可能与精神分裂症患者智力损害及治疗后的改善情况相关,rs 16947可能与精神分裂症患者治疗后注意力的改善情况相关.
关键词： 精神分裂症 细胞色素P450 CYP2D6 治疗结果 利培酮 -
细胞色素P450的工具药选择及种属差异的研究进展
药物对代谢酶的影响以及代谢产生的药物相互作用与药物安全性密切相关.细胞色素P450( CYP)是参与内、外源性化合物Ⅰ相代谢反应的重要超家族酶系.特异性探针、诱导剂、抑制剂以及实验动物模型广泛应用于CYP介导的代谢途径以及药物相互作用研究.已知CYP底物存在明显重叠性,且表达调控机制种属差异显著,故研究中选择适当的实验动物以及特异性的探针、诱导剂和抑制剂,成为影响数据外推的关键问题.本文简要综述了CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP3A4/5的常用体内外探针、诱导剂、抑制剂以及动物种属表达调控的差异.
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乳腺癌患者CYP2D6基因多态性对他莫昔芬疗效影响的系统评价
目的 系统评价CYP2D6基因多态性对他莫昔芬(Tam)参与治疗乳腺癌患者的无病生存期(DFS)和总生存期(OS)的影响,评价其作为Tam疗效预测指标及指导个体化用药的可行性.方法 计算机检索Cochrane Library、PubMed、Embase、中国知网、中国生物医学文献数据库、维普全文数据库、万方等数据库,并手工检索相关文献,查找关于CYP2D6基因型及Tam治疗乳腺癌患者以DFS、OS为结局指标的文献.检索时间为1995年1月至2016年10月.采用RevMan5.3软件进行Meta分析.结果 共纳入文献26篇,其中22篇为英文文献,4篇为中文文献,共包含12602例患者.Meta分析结果显示,与未携带CYP2D6突变基因患者相比,携带CYP2D6突变基因的患者具有更短的DFS [HR = 1.44,95％ CI(1.18 ～ 1.76),P = 0.0003]和OS [HR = 1.20,95％CI(1.07 ～ 1. 35),P = 0.002].结论 乳腺癌患者经Tam治疗后,携带CYP2D6突变基因患者比未携带CYP2D6突变基因的患者具有更短的DFS和OS,可在临床使用Tam治疗前测定CYP2D6基因多态性,促进个体化给药.
关键词： 他莫昔芬 细胞色素P450 CYP2D6 Meta分析 基因多态性 -
以右美沙芬为探针测定大鼠肝微粒体中CYP2D6酶活性及动力学分析
目的 建立大鼠肝微粒体中细胞色素P450 (CYP) 2D6酶活性的检测方法,以右美沙芬为探针底物进行体外酶动力学分析,为相关药物代谢研究提供参考依据.方法 采用高效液相色谱-荧光检测(HPLC-FLD)方法提高检测灵敏度.通过优化大鼠肝微粒体孵育体系的反应条件,建立稳定的动力学评价方法.以Graphpad prism 5.01软件绘制米曼动力学曲线并计算Vmax与Km值.结果 右美沙芬与其代谢产物右啡烷分离良好且无其他内源性物质干扰.右啡烷检测限为5 nmol·L-1 (S/N＞3),定量下限为0.015 μmol·L-1,线性范围为0.015 ～ 7.5 μmol·L-1.测定方法重现性好且稳定.经优化条件后测定,不同浓度的右美沙芬在0.2 mg· mL-1蛋白浓度下,孵育10 min,测得动力学参数V一为(1.075±0.060) nmol·min-1·mg-1 pro,Km为(7.470±0.983) μmol·L-1.结论 高效液相色谱结合荧光检测法可以有效提高灵敏度,此大鼠微粒体孵育体系的建立可应用于体外CYP2D6酶活性的测定及酶动力学研究.
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CYP2D6基因多态性对帕罗西汀在中国健康人药动学影响
目的 研究中国健康人CYP2D6基因多态性对帕罗西汀药动学的影响.方法 使用PCR-RFLP方法将23位志愿者分为3组:CYP2D6*1/*1组(n=5),CYP2D6* 1/* 10组(n=7),CY P2D6*10/*10组(n=11).给予帕罗西汀20 mg单剂量口服,收集给药后96 h内的一系列血样,用LC-MS/MS法测定帕罗西汀的血药浓度并做药动学分析.结果 与CYP2D6*1/*1组药动学参数相比,CYP2D6*1/*10组tmax、t1/2和CYP2D6* 10/* 10组tmax无显著差异(P＞0.05)；CYP2D6*1/*10、CY P2D6*1 0/*10组的ρmax、AUC0-96h、AUC0-x、CL (F)、Vd和CYP2D6*10/*10组t1/2均有显著差异(P＜0.05或P＜0.01).结论 CY P2D6*1D等位基因突变能引起代谢表型的改变,影响帕罗西汀在健康人的体内代谢.
关键词： 细胞色素P450 CYP2D6 帕罗西汀 药动学 多态性 限制性片段长度 -
细胞色素P450 2D6*10基因多态性对剖腹术后曲马多自控静脉镇痛的影响
目的 评价细胞色素P450 2D6* 10(CYP2D6* 10)基因多态性对剖腹术后曲马多自控静脉镇痛的影响.方法 择期剖腹术患者100例,ASA Ⅰ或Ⅱ级,经肘正中静脉采血2 ml,采用PCR方法进行细胞色素P450 CYP2D6* 10基因分型,分为野生型纯合子组(w/w组,n=28),杂合子组(m/w组,n=24)和突变型纯合子组(m/m组,n=42).手术结束前30 min,静脉注射曲马多100 mg、格拉司琼1 mg.清醒后VAS≤4分开始PCA,若VAS＞4分追加曲马多50 mg,30 min后VAS≤4分,继续单纯行PCA,若VAS＞4分则静脉注射芬太尼50 μg,至VAS≤4分继续单纯行PCA,曲马多PCA背景输注速率12 mg/h,PCA剂量15 mg,锁定时间15 min,记录术后2、4、24、48和72 h曲马多累积用量及PCA次数,并行VAS评分.结果 术后3 dw/w组、m/w组和m/m组曲马多用量分别为(130±26) mg,(147±44) mg,(157±34) mg,三组差异无统计学意义.与m/m组比较,术后2hw/w组、m/w组患者VAS评分明显降低(P＜0.05).术后4hw/w组、m/w组患者自控次数明显减少(P＜0.05).结论 CPY2D6* 10基因多态性是影响剖腹术后曲马多自控静脉镇痛遗传因素之一.
关键词： 细胞色素P450 CYP2D6 基因多态性 曲马多 -
原发性高血压患者CYP2D6*10不同基因型的心率震荡及美托洛尔的干预作用
目的:观察美托洛尔对CYP2D6* 10不同基因型原发性高血压患者心率震荡的影响,及原发性高血压患者CYP2D6* 10不同基因型对美托洛尔代谢的影响.方法:比较入选患者美托洛尔干预前后心率震荡值,又根据患者基因型被分为C/C组(39例,野生型),T/C组(30例,突变型杂合子)和T/T组(21例,突变型纯合子),并对美托洛尔干预后各组心率震荡值及美托洛尔血药浓度进行对比.结果:(1)与美托洛尔用药前比较,用药后患者震荡初始[TO,(-0.0742±1.46)％比(-0.864±1.62)％]显著降低,震荡斜率[TS,(3.49±3.02) ms/RR比(4.75±3.31) ms/RR]显著升高(P＜0.05～＜0.01)；与T/C组比较,C/C组,T/T组的TO值降低,TS值升高得更显著(P＜0.05); (2) T/T组美托洛尔血药浓度明显高于C/C组和T/C组[(87.6±21.4) ng/ml比(25.6±13.3) ng/ml比(19.2±11.4) ng/ml,P＜0.01].结论:(1)美托洛尔对原发性高血压患者心率震荡有改善作用；(2) CYP2D6*10突变纯合子型的美托洛尔血药浓度高,突变纯合子患者心率震荡改善情况明显.
关键词： 细胞色素P450 CYP2D6 高血压 美托洛尔 -
中国人肝微粒体中细胞色素P450酶含量和活性的个体间差异
比较不同中国人肝微粒体中几种重要细胞色素P450(CYP)的酶含量和活性。方法：运用West-ern斑点分析和光密度扫描，对17个汉族、17个壮族和8个苗族受试者肝微粒体中的细胞色素P4501A2(CYP1A2)、2C9及3A4进行定量；非那西丁、甲磺丁脲、异喹胍和奥美拉唑分别用于体外测量CYPIA2、2C9、2D6及3A4的活性。结果：CYP1A2、2C9及3A4的含量和活性具有很大的个体间变异，另外CYP2D6的活性在各样本间也有很大差异；CYP3A4(32％)是中国人肝微粒体中含量丰富的CYP，CYP2C9(19％)和CYP1A2(16％)的含量也很可观；除了CYP1A2的含量和活性具有一定的种族和性别差异外，未发现其它CYP具有种族和性别差异；CYP1A2、2C9和3A4的酶蛋白含量分别和它们的活性具有很好的相关性。结论：我们的结果为在中国人中进行药物代谢研究提供了非常有价值的信息。
