首页 > 文献资料
-
利多卡因对短暂脑缺血后海马区细胞Bcl-2和CPP32蛋白表达的影响
目的探讨短暂脑缺血后,利多卡因对海马CA1区细胞两种凋亡相关蛋白表达的影响.方法通过夹闭家兔双侧颈总动脉和椎动脉5min,建立全脑短暂缺血模型.24只家兔随机分三组.对照组(SH,n=6):进行手术操作,但不夹闭血管;缺血组(IS,n=9):夹闭动脉5min,夹闭前5min经耳缘静脉予注生理盐水1.5ml;利多卡因组(LI,n=9):夹闭动脉前5min经耳缘静脉予注2%利多卡因10mg/kg,余操作同缺血组.24h后断头取脑.利用蛋白免疫杂交法检测海马区细胞Bcl-2和CPP32蛋白表达.结果与对照组相比,Bcl-2蛋白表达IS组及LI组均明显增高(P＜0.05),LI组高于IS组(P＜0.05);三组之间CPP32表达无明显差异(P＞0.05).结论利多卡因可以促进缺血后海马区细胞Bcl-2蛋白的表达,进而抑制神经元细胞延迟性死亡.CPP32表达不受影响.
-
吗啡对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响
目的:缺血再灌注是肝脏手术和肝移植术中不可避免的病理过程,吗啡对于心肌缺血再灌注损伤以及对抗心肌细胞凋亡等方面已有了很大的研究进展.观察吗啡对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响,并分析其可能作用途径.方法:实验于2006-08/2007-03在辽宁医学院附属医院外科实验室完成,动物实验方法符合动物伦理学要求.①实验分组及方法:选用Wistar大鼠60只,按随机数字表法分成4组(n=15),正常对照组、假手术组、缺血再灌注组及缺血再灌注+吗啡干预组,缺血再灌注组建立大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型;缺血再灌注+吗啡组于缺血再灌注前给予0.3 mg/kg盐酸吗啡注射液腹腔内注射.②实验评估:于再灌注90 min后,各组大鼠经左心室取血,测定血浆中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性;取肝脏组织,应用流式细胞仪检测肝细胞凋亡率,应用免疫组化法检测半胱氨酸蛋白酶3的表达变化.结果:60只大鼠均进入结果分析.①血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性:缺血再灌注组显著高于正常对照组和假手术组(P＜0.01),吗啡+缺血再灌注组显著低于缺血再灌注组(P＜0.01).②肝细胞凋亡率:缺血再灌注组显著高于正常对照组和假手术组(P＜0.01),吗啡+缺血再灌注组显著低于缺血再灌注组(P＜0.01).③肝脏组织半胱氨酸蛋白酶3的表达:缺血再灌注组显著高于正常对照组和假手术组(P＜0.01),吗啡+缺血再灌注组显著低于缺血再灌注组(P＜0.01).结论:吗啡可抑制缺血再灌注损伤后肝细胞的凋亡,减轻肝脏的损伤,从而起到保护肝脏的作用.
-
A20基因在活性氧对内皮细胞损伤中的保护作用
目的:探讨外源性锌指蛋白A20对氧损伤诱导内皮细胞同型半胱氨酸蛋白酶Caspase 3表达和凋亡的影响.方法:DOTAP脂质体介导pcDNA 3.1 EHA20质粒转染人脐静脉内皮细胞,经G418筛选,免疫荧光检测A20基因的表达,Tunnel原位末端标记法、原位杂交检测转染前后过氧化氢诱导内皮细胞凋亡情况及Caspase3的表达情况.结果:A20基因在内皮细胞得到有效表达,正常对照组及转染A20基因组人内皮细胞凋亡为(4±1)%,过氧化氢作用后对照组与转染A20基因组凋亡分别为(21±2)%,(6±1)%,两者相差有显著性意义(P＜0.05).A20基因能显著抑制过氧化氧诱导的内皮细胞Caspase 3的表达.结论:A20基因在活性氧对内皮细胞损伤中具有保护作用,在缺血再灌注等相关疾病防治方面可能有一定作用.
-
缺氧复合烧伤后血清诱导心肌细胞凋亡变化中p38激酶的作用
目的:观察缺氧复合烧伤血清作用条件下心肌细胞的凋亡变化,探讨p38激酶、caspase-3在其中的作用.方法:采用乳鼠心肌细胞原代培养,检测缺氧复合烧伤血清作用后心肌细胞p38激酶的磷酸化程度,对比观察使用SB203580抑制p38激酶前后,心肌细胞caspase-3活性、酶前体蛋白表达及心肌细胞凋亡率变化.结果:缺氧复合烧伤血清使心肌细胞p38激酶迅速、持续活化,使用SB203580可降低心肌细胞caspase-3活性、稳定caspase-3酶前体和减少心肌细胞凋亡.结论:p38激酶途径参与缺氧复合烧伤血清诱导的心肌细胞凋亡过程,促进caspase-3活化是其介导凋亡的重要机制.
-
病理性瘢痕组织中肿瘤坏死因子受体1和半胱氨酸蛋白酶3对成纤维细胞凋亡的调控
目的:研究肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosisfactor receptor 1,TNFR1)和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)在病理性瘢痕组织细胞中的表达及其对成纤维细胞凋亡与增殖的影响,进一步探讨瘢痕形成机制.方法:对手术切除的增生性瘢痕,瘢痕疙瘩及正常皮肤各10例应用免疫组织化学方法进行检测,分析TNFR1和Caspase-3的表达及分布规律. 结果:TNFR1在正常皮肤、增生性瘢痕及瘢痕疙瘩中成纤维细胞的表达阳性率分别为(11.04±2.52)%,(3.27±1.30)%和(7.67±2.35)%,TNFR1在正常皮肤组中的阳性表达率明显高于增生性瘢痕组和瘢痕疙瘩组,而瘢痕疙瘩组阳性表达率又明显高于增生性瘢痕组,3组间阳性表达率相互比较差异均具有非常显著性意义(F=51.453,P＜0.01);Caspase-3在正常皮肤的阳性表达率为(14.84±2.41)%,明显高于增生性瘢痕组(5.05±1.47)%和瘢痕疙瘩组(2.95±1.25)%,3组间阳性表达率相互比较差异亦均具有非常显著性意义(F=161.694,P＜0.01).结论:在细胞凋亡通路中凋亡关键效应子Caspase-3的激活减少及TN-FR1介导的死亡受体凋亡通路受阻在病理性瘢痕的形成机制中发挥了一定的作用;同时,TNFR1又可能介导了核转录因子NF-κB的激活,促进成纤维细胞的增殖,表明TNFR1对成纤维细胞的增殖与凋亡具有双重的调节作用.
-
Caspase-3抑制剂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用
目的:观察Caspase-3特异性肽类抑制剂AC-DEVD-CHO(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-aldehyde)对新生鼠缺氧缺血脑损伤(hypoxia-ischemia braindamage,HIBD)的疗效.方法:建立HIBD模型后予新生鼠不同剂量AC-DEVD-CHO脑室注射,24 h后用四肽荧光底物法检测鼠脑Caspase-3活性,确定佳剂量.通过病理学、原位细胞凋亡检测等考察AC-DEVD-CHO对HIBD的疗效.结果:HIBD新生鼠患侧脑组织Caspase-3活性随注射AC-DEVD-CHO剂量增加而递减.至300-400ng时,差别已不明显.AC-DEVD-CHO 300 ng治疗组HIBD新生鼠脑皮质、海马神经细胞凋亡百分率(30.2±11.2)%较生理盐水组(44.6±12.4)%明显降低.结论:Caspase-3抑制剂对新生鼠HIBD具有脑保护作用.
-
FasL诱导caspase-3表达与肺癌细胞凋亡相关关系的研究
目的探讨FasL基因转染的肺腺癌细胞中caspase-3的表达,并观察其与肺腺癌细胞凋亡的关系.方法 RT-PCR、流式细胞术检测caspase-3在FasL基因转染的A-549肺腺癌细胞中的表达,流式细胞术、Western blot检测肺腺癌细胞凋亡以及caspase-3活性.结果 caspase-3在A-549母系细胞中低水平表达,转基因后的A-549/FasL细胞的caspase-3的表达和活性显著升高(P＜0.01).同时肺癌细胞凋亡率升高(44.08% vs 18.15%,P＜0.01),凋亡率与caspase-3的活性呈明显正相关关系(γ＝0.647,P＜0.01).结论 caspase-3在肺癌凋亡中起重要作用;FasL基因转染的肺腺癌细胞的凋亡与caspase-3的活性增加密切相关.
-
松果体摘除及褪黑激素对大鼠睾丸间质caspase-3和eNOS的影响
目的探讨松果体摘除对睾丸间质caspase-3和eNOS表达的影响.方法SD成年雄性大鼠45只分成5组:(1)正常对照组,(2)假手术组,(3)松果体摘除组(PX+NS),(4)松果体摘除加低剂量褪黑激素(PX+MT7.5 mg/kg),(5)松果体摘除加高剂量褪黑激素组(PX+MT 15 mg/kg).免疫组织化学SABC法检测caspase-3和eNOS在睾丸间质的免疫活性表达.结果与对照组和假手术组相比,PX+NS组的caspase-3和eNOS的免疫活性显著减少(P＜0.01);与PX+NS组相比,PX+MT 7.5 mg/kg组和PX+MT 15 mg/kg组caspase-3和eNOS的免疫活性显著增加(P＜0.01);PX+MT 15 mg/kg组与PX+MT 7.5 mg/kg组相比,caspase-3免疫活性无明显变化,eNOS免疫活性明显增加(P＜0.05).结论松果体摘除能抑制睾丸间质细胞凋亡,并可被外源性褪黑激素恢复,但与褪黑激素剂量高低无关;褪黑激素能促进睾丸间质eNOS活性表达,且增加MT剂量可进一步增加其活性.
-
内质网应激反应性凋亡途径研究进展
内质网应激(ERS)反应性凋亡途径是一种近提出的新的凋亡途径,不同于经典的凋亡途径:死亡受体途径(外源性途径)和线粒体途径(内源性途径).该途径作为一种新的凋亡途径,可为肿瘤凋亡诱导治疗和逆转肿瘤耐药提供新的方向.
-
Caspase抑制剂对小鼠心脏移植物细胞凋亡的影响
目的探讨Caspase抑制剂对同种异体心脏移植物细胞凋亡的影响.方法以BALB/c小鼠为供者,C57BL/6J小鼠为受者建立异位(颈部)心脏移植模型,治疗组受者术中、术后分别给Caspase抑制剂(Z-Asp-cmk) 0.25 mg,对照组受者相应时间给等量的溶媒.术后观察移植心脏的存活时间,术后5 d处死部分受者,切取移植心及受者自身心脏组织,检测心脏组织中Caspase酶的活性及心肌细胞凋亡情况.结果对照组移植心脏的中位存活时间为7 d,治疗组为13 d,二者比较,差异有高度显著性(P＜ 0.01);移植心脏组织的Caspase 3活性,对照组为(310±83)nmol AFC·min-1·mg-1,治疗组为(65±19)nmol AFC·min-1·mg-1,受者自身心脏为(47±11)nmol AFC·min-1·mg-1,治疗组与受者自身心脏比较,差异无显著性(P＞ 0.05),与对照组比较,差异有高度显著性(P＜ 0.01);治疗组与对照组心肌细胞的凋亡指数分别为 7.95± 1.71及 0.56± 0.20,二者比较,差异有显著性(P＜ 0.05).结论 Caspase抑制剂能够有效抑制小鼠心脏移植物的心肌细胞凋亡.
-
外源性FasL基因诱导Caspase-3的表达及胃癌细胞凋亡的研究
目的研究FasL基因转染胃癌细胞中Caspase-3的表达并观察其与胃癌细胞凋亡的关系.方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术和免疫组织化学检测Caspase-3在FasL基因转染的SGC-7901胃癌细胞中的表达,流式细胞术、原位末端标记(TUNEL)检测胃癌细胞凋亡.结果 Caspase-3在SGC-7901母系细胞中低水平表达,转移FasL基因后的SGC-7901/FasL细胞的Caspase-3的表达显著升高(P<0.01),同时胃癌细胞凋亡率升高(25.4% vs 7.2%,P<0.001),凋亡率与Caspase-3的表达呈明显正相关关系(r=0.647,P<0.01).结论 Caspase-3在胃癌发生中起重要作用;FasL基因转染的胃癌细胞的凋亡与其Caspase-3的表达增加有密切关系.
-
兔骨关节炎软骨细胞中caspase-3表达及其细胞凋亡的研究
[目的]观察兔骨关节炎软骨细胞中caspase-3的表达,探讨其与软骨细胞凋亡的关系.[方法]Hulth法建造兔右膝骨关节炎动物模型.造模4周后,解剖其双侧膝关节,取出关节软骨观察软骨退变情况,观测软骨细胞caspase-3的表达,检测软骨细胞凋亡.[结果]骨关节炎组软骨细胞caspase-3的表达以及软骨细胞凋亡率均高于对照组(P＜0.05).[结论]骨关节炎软骨细胞中caspase-3的高表达,与软骨细胞凋亡密切相关.
-
不同葡萄糖浓度对体外培养肝细胞内caspase-3表达的影响
[目的]探讨不同葡萄糖浓度下肝细胞的caspase-3表达及意义.[方法]将不同浓度的葡萄糖(5、15、25 mol/L)作用于正常成人肝细胞HL-7702 24 h和48 h后,采用流式细胞术检测肝细胞的凋亡情况,采用western blotting法检测肝细胞caspase-3及cleavage caspase-3的表达情况,采用Real-time PCR 检测Bax和Bcl-2蛋白的表达情况.[结果]肝细胞在葡萄糖处理后呈现剂量和时间依赖性的凋亡上调;肝细胞中caspase-3及cleavage caspase-3表达阳性指数也随着葡萄糖浓度和时间逐渐增加;Bax mRNA呈浓度和时间依赖性的增加,而Bcl-2 mRNA的表达水平呈葡萄糖浓度和时间依赖性的下降.[结论]高浓度葡萄糖可诱导干细胞出现凋亡,其作用机制可能通过下调Bcl-2/Bax比值以及caspase-3的剪切活化来实现.
-
TGF-β1、Caspase-3与脑损伤缺血再灌注的相互关系
脑缺血再灌注损伤既包括急性细胞坏死也包括DND的细胞凋亡.TGF-β1作为神经系统保护剂,caspase-3作为凋亡的关键酶,在脑缺血再灌注时表达均增加.在不同组织中TGF-β1与caspase-3 的关系不同,脑损伤时TGF-β1抑制caspase-3的活性,但是在脑缺血再灌注损伤过程中,TGF-β1与caspase-3表达的动态相关性与可能的相互作用机制仍无报道.
-
Survivin与Caspase-3的关系及其在泌尿系肿瘤中的表达
Suvivin与Caspase-3是与细胞凋亡密切相关的两个基因,二者对泌尿系恶性肿瘤的发生、诊断和预后等起着十分重要的作用,因此成为目前的研究热点.本文对二者的生物学特性、相互之间的关系以及在泌尿系肿瘤中的表达等研究现状作一综述.
-
Caspase-3在癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡中作用的研究
目的对癫痫模型海马神经细胞凋亡中caspase-3的作用机制进行实验研究. 方法以TUNEL法检测KA致痫大鼠海马神经细胞凋亡情况,以Western blot法检测其中eIF2α的表达变化.取模型鼠海马组织构建cDNA文库,构建caspase-3的酵母三杂交诱饵载体,进行筛库实验. 结果在癫痫发作后12 h TUNEL阳性神经元增加,72 h达高峰;发作后24 h出现eIF2α被caspase-3酶切的片段,逐渐增加至72 h.制作成功cDNA文库,构建了caspase-3的酵母三杂交诱饵载体,筛库获得caspase-3的新底物Miz1.结论在癫痫大鼠海马神经细胞凋亡中eIF2α被caspase-3酶切.酵母三杂交寻找caspase-3下游底物有可行性,从癫痫大鼠海马中获得caspase-3的底物Miz1.
关键词： 癫痫 凋亡 caspase类 Msx相互作用锌指蛋白 -
肝癌细胞对5-氮杂-2'-脱氧胞苷的敏感性与细胞总DNA甲基化水平无关
目的 比较不同肝癌细胞株对5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)的敏感性,探讨肝癌细胞对5-aza-dC的敏感性是否与细胞总DNA甲基化水平有关.方法 用不同剂量(0.5、5.0、10.0μmol/L)的5-aza-dC处理肝癌细胞株(HepG2、QGY7701和HepG2.2.15细胞)及正常肝细胞株L02,比较不同浓度处理前后的细胞增殖抑制率,比较10 μmol/L 5-aza-dC处理前后的Caspase-3活性及细胞DNA片段化水平(5-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入率),比较不同细胞总DNA甲基化水平.组间检测结果比较采用t检验.结果 5-aza-dC对HepG2、QGY7701、HepG2.2.15、L02细胞的半数抑制浓度分别为0.5、0.5、4.5、11.4μmol/L,与HepG2细胞和QGY7701细胞相比,HepG2.2.15绌胞和L02细胞对5-aza-dC不敏感.HepG2和QGY7701细胞中Caspase-3的活性升高较L02和HepG2.2.15细胞明显(P值均＜0.05),QGY7701细胞中5-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入率升高较L02细胞明显(P＜0.05).L02、HepG2、QGY7701和HepG 2.2.15细胞的DNA总甲基化水平分别为11.7%±0.9%、10.9%±1.3%、11.7%±1.7%和12.2%±1.0%,差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论 细胞对5-aza-dC的敏感性与细胞总DNA甲基化水平无关.
-
碱性成纤维细胞生长因子对可见光诱导的人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响
目的观察外源性碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对可见光诱导培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞凋亡的影响. 方法以(2 000±500) lx白色荧光灯照射培养的人RPE细胞,利用荧光素标记的连接素V/碘化丙锭(annexin V-fluorescein isothiocyanate/ propidium iodium,Annexin V-FITC/PI)双染色流式细胞测定、细胞免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptional polymerase chain reaction,RT-PCR)、酶联免疫测定等方法,检测加入不同浓度的bFGF后,培养的RPE细胞的凋亡及细胞内bFGF、成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,bcl-2)基因及半胱天冬酶-3(caspase-3)的变化. 结果 (1)分别加入外源性bFGF 10 、20 ng/ml时, RPE细胞凋亡比单纯光照组明显减少(P＜0.05);(2)加入bFGF 10 ng/ml组的bcl-2蛋白表达比单纯光照组明显增加(P＜0.01),而与无光照组之间差异无显著性意义(P＞0.05);(3)光照后bcl-2 mRNA表达比无光照组下降,但随着加入bFGF浓度的增高, bcl-2 mRNA表达又逐渐增加,当加入bFGF 20 ng/ml时,bcl-2 mRNA的表达与无光照组之间差异无显著性意义(P＞0.05);(4)无论是单纯光照组还是光照时加入各种浓度的bFGF组,其内源性bFGF及FGFR1的表达均较无光照组显著增加(P＜0.05),并呈bFGF浓度依赖性;(5)与单纯光照组比较,光照组加入外源性bFGF 10 ng/ml后,细胞内caspase-3活性明显降低(P＜0.05). 结论外源性bFGF可能通过RPE细胞内bFGF、FGFR1、 bcl-2的表达上调,caspase-3活性降低,而抑制可见光诱导的培养的人RPE细胞凋亡.
-
促红细胞生成素对脑创伤后细胞凋亡和Caspase-3活性的影响
目的 探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对大鼠创伤性脑损伤的治疗作用及对细胞凋亡和Caspase-3活性的影响之间的关系. 方法 制作SD大鼠自由落体脑挫裂伤模型,设立假手术组、rhEPO治疗组和对照组,分别应用透射电镜、流式细胞技术和荧光四肽底物法检测各组大鼠脑挫伤灶旁细胞凋亡情况及Caspase-3活性. 结果 脑外伤后存在细胞凋亡,细胞凋亡的发生在伤后24 h达到高峰,rhEPO治疗组在伤后24 h和48 h细胞凋亡发生率低于相应的对照组(P＜0.05);rhEPO治疗后12,24和48 h大鼠脑挫伤灶旁细胞Caspase-3活性均低于各自时间点对照组(P＜0.05或0.01). 结论 rhEPO治疗对创伤性脑损伤后细胞凋亡的发生及Caspase-3的活性有影响,抑制细胞凋亡及Caspase-3活性下降很可能是rhEPO对创伤性脑损伤治疗作用的重要机制.
-
Caspase-3抑制剂 z-DEVD-fmk对大鼠脑损伤的保护作用
目的 研究caspase-3抑制剂z-DEVD-fmk对大鼠外伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后神经细胞凋亡、脑含水量影响.方法 分为假手术组、等渗盐水组、抑制剂组,采用改良的Feeney自由落体损伤模型,于损伤前后各30 min右侧脑室注射z-DEVD-fmk或等渗盐水,72 h后,断头取脑,用HE染色及电镜观察形态学变化,用干湿法测量脑含水量,流式细胞(Annexin-V/PIFCM)及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口术端标记(TUNEL)法检测神经细胞凋亡.结果 在外伤中心区可见大量神经细胞坏死;损伤周围区神经细胞数量减少,出现细胞凋亡的特征,少量细胞出现坏死,等渗盐水组相对于抑制剂组较为明显;假手术组以正常细胞为主.抑制剂组大鼠损伤周围脑组织凋亡细胞数及脑含水量明显高于假手术组;但较等渗盐水组明显减少.结论 大鼠脑损伤后在损伤周围区存在大量神经细胞凋亡;使用z-DEVD-fmk抑制caspase-3活性以后,能减少凋亡、减轻脑水肿,起到脑保护作用.
