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A组乙型链球菌脂磷壁酸的提取及其交叉反应性研究
目的探讨A组乙型链球菌(GAS)脂磷壁酸(LTA)提取方法及其在风湿热发病过程中的意义.方法用曲通114 (TX-114)从GAS中提取LTA并用阴离子交换树脂二乙基氨基纤维素(DEAE-Sephacel)层析纯化;做LTA与人心瓣膜抗原吸附试验;分析LTA抗体的滴度与风湿性心脏病瓣膜病理结果的关系.结果用TX-114提取并用阴离子交换树脂DEAE-Sephacel层析纯化的LTA纯度较高,且保持了LTA的生物学活性;吸附抗体后的血清标本LTA抗体由阳性转为阴性,而未吸附抗体的血清标本LTA抗体仍为阳性,提示LTA与人心瓣膜之间存在交叉抗原性;血清LTA-IgG抗体阳性的4例患者中有3例病理切片发现心瓣膜或心肌间质有灶性炎症细胞浸润;血清LTA-IgG抗体阴性的6例病人均未见灶性炎症细胞浸润(Fiher精确概率＝0.033).结论 TX-114法是提取GAS的LTA的有效新方法;GAS的LTA与人心瓣膜之间存在交叉抗原性,LTA可能参与了风湿热的发病过程.
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双歧杆菌及其表面分子的免疫增强作用
研究双歧杆菌及其脂磷壁酸、细胞壁肽聚糖、培养乏液对小鼠腹腔渗出细胞、脾细胞IL-1、IL-2、IL-6、TNF、IFN-γ活性和脾NK、LAK细胞活性的影响.结果发现双歧杆菌全菌、脂磷壁酸、肽聚糖多次注入小鼠腹腔一段时间后,小鼠脾NK细胞、LAK细胞活性和IFN-γ活性增强,腹腔渗出细胞产生IL-1、IL-6、TNF活性增强,其中以脂磷壁酸作用强,肽聚糖次之,培养乏液也有一定作用.双歧杆菌及其表面分子对小鼠脾细胞、腹腔渗出细胞IL-2活性无显著影响.双歧杆菌的免疫增强作用在抗感染、抗肿瘤机理中占有十分重要的地位.
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长双歧杆菌NQ-1501脂磷壁酸提取及免疫功能的研究
目的 确定长双歧杆菌脂磷壁酸的佳提取工艺及其免疫调节作用.方法 通过对不同方法提取长双歧杆菌脂磷壁酸含量的测定及对昆明小鼠免疫球蛋白含量和T细胞、B细胞的增殖检测来探讨长双歧杆菌脂磷壁酸对小鼠细胞免疫的调节作用.结果 采用10％ TCA水浴(38℃、3h)提取脂磷壁酸效果好,LTA对体液免疫有一定的刺激作用,并且能够促进T细胞和B细胞的增殖.结论 长双歧杆菌LTA具有免疫功能.
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双歧杆菌脂磷壁酸对D-半乳糖致衰老小鼠表型的影响
目的 通过研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸(LTA)对D-半乳糖致衰老小鼠生物表型的影响,探讨双歧杆菌抗衰老的作用.方法 雄性昆明系小鼠,随机分组,在建立D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型的同时,每日注射双歧杆菌LTA.各组小鼠连续处理8周后处死,观察器官组织形态的变化并测定脏器指数、骨指标、血清指标.结果 青年组小鼠骨干重与体重比值为1.52±0.09,血清中NO为(18.79±0.99)μmol/L;模型组小鼠骨干重与体重比值为1.27±0.13(P<0.01),血清中NO为(14.03±2.41)μmol/L(P<0.01);此外,与对照组相比,模型组小鼠活动减少,胸腺、肾脏、脑及睾丸萎缩;骨钙、骨磷严重减少(P<0.01),血钙升高、血尿素氮和肌酐升高(P<0.05);而双歧杆菌LTA能显著逆转上述变化.结论 双歧杆菌LTA能改善D-半乳糖致衰老小鼠的衰老表型,具有一定的抗衰老作用.
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纳米四氧化三铁双歧杆菌LTA对实验性胃癌增殖及凋亡的影响
目的 观察纳米四氧化三铁(Fe3O4)双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoicacid,LTA)对实验性胃癌增殖细胞核抗原(PCNA)和bcl-2、bax蛋白表达的影响.方法 用胃癌BGC-823细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察不同浓度纳米Fe3O4双歧杆菌LTA组与LTA组及环磷酰胺组移植瘤的生长情况,免疫组化法检测bcl-2和bax及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 纳米Fe3O4双歧杆菌LTA各剂量组胃癌移植瘤PCNA阳性细胞面密度以及bcl-2阳性细胞面密度均显著低于肿瘤对照组(P<0.01),而bax 的阳性细胞面密度显著高于肿瘤阴性对照组(P<0.01).结论 纳米四氧化三铁LTA能明显降低人胃癌移植瘤的增殖活性及增强bax的蛋白表达,同时使其bcl-2基因蛋白的表达下调.
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脂磷壁酸的提取工艺及免疫功能的研究
目的 确定婴儿双歧杆菌脂磷壁酸(LTA)的佳提取工艺及其免疫调节作用.方法 通过对不同方法提取婴儿双歧杆菌LTA的测定及对植瘤小鼠淋巴细胞的转化来探讨LTA对小鼠细胞免疫的调节作用.结果 采用脱脂后水法提取效果好,与对照组和全菌组相比,LTA使淋巴细胞转化增加.结论 婴儿双歧杆菌及其LTA均有免疫功能,但LTA的效果要优于婴儿双歧杆菌.
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双歧杆菌脂磷壁酸对NF-κB在结肠癌细胞中表达的影响
目的 探讨双歧杆菌脂磷壁酸(LTA)对NF-κB在结肠癌细胞HCT-116中表达的影响.方法 采用免疫细胞化学染色、PAGE及Western blot等,分析经双歧杆菌LTA处理前后,NF-κB蛋白在结肠癌细胞HC-116中表达的差异.结果 经LTA处理后,NF-κB在HCT-116细胞中的表达明显降低,且呈剂量依赖性.结论 双歧杆菌LTA可下调NF-κB的表达,对了解LTA诱导HCT-116细胞凋亡的机制提供了一定的实验依据.
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Caspase信号通路在双歧杆菌脂磷壁酸诱导结肠癌细胞凋亡中的作用
目的 探讨Caspase信号通路在双歧杆菌脂磷壁酸(LTA)诱导结肠癌细胞凋亡中的作用.方法 RT-PCR检测经双歧杆菌LTA处理后,结肠癌Lovo细胞中MyD88和FADD mRNA的表达变化;Annexin V检测经Caspase通用抑制剂(Z-Val-Ala-Asp-FMK)预先处理后,双歧杆菌LTA诱导结肠癌Lovo细胞凋亡率的变化;荧光法检测经双歧杆菌LTA处理后,Lovo细胞中Caspase-8活性的变化.结果 经双歧杆菌LTA处理后, Lovo细胞中MyD88的mRNA表达明显升高(P＜0.05),而FADD信号分子的mRNA表达无明显变化;双歧杆菌LTA能够增强Lovo细胞中Caspase-8的活性(P＜0.05),且其诱导Lovo细胞凋亡的作用能够被Caspase抑制剂所抑制(P＜0.05).结论 MyD88信号分子在双歧杆菌LTA诱导Lovo细胞凋亡中可能起着承接上游分子TLRs与下游信号分子FADD的作用;而Caspase信号通路可能是双歧杆菌LTA诱导结肠癌Lovo细胞凋亡的主要信号传导途径.
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双歧杆菌脂磷壁酸与5-氟尿嘧啶联用的抗肿瘤研究
目的 探讨双歧杆菌脂磷壁酸与5-氟尿嘧啶(5-Fu)联用对H<,22>荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及免疫功能的影响.方法 双歧杆菌脂磷壁酸单独或联合5-Fu处理H<,22>荷瘤Balb/c小鼠,定期测量肿瘤大小,观察小鼠一般状况;计算抑瘤率、血红细胞数和白细胞数,取脾和胸腺计算脏器指数;HE染色分析肿瘤组织变化;MTT法检测小鼠脾T淋巴细胞增殖转化功能以及ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ含量.结果 双歧杆菌脂磷壁酸及5-FU单独应用均可抑制肿瘤生长,但单独5-FU处理组小鼠一般状况差,毒性反应重;双歧杆菌脂磷壁酸与5-FU联合应用,与单独5-FU处理组比较,不仅抑瘤率明显提高(P＜0.01),且荷瘤小鼠一般状况改善,白细胞数升高,脏器指数增加,小鼠脾T淋巴细胞增殖能力强,脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平提高;光镜观察HE染色瘤体组织,双歧杆菌脂磷壁酸处理组可见大量炎症细胞浸润.结论 双歧杆菌脂磷壁酸联合5-FU能增强化疗的抑瘤作用,并能扭转化疗引起的免疫低下现象,起到增效减毒作用.
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双歧杆菌脂磷壁酸对B16荷瘤小鼠NK细胞受体NKG2D及其配体的影响
目的 探讨双歧杆菌脂磷壁酸(LTA)对黑色素瘤B16荷瘤小鼠NK细胞受体NKG2D及其配体的影响.方法 将黑色素瘤B16细胞接种于C57BL/6小鼠皮下,待触及肿块后于荷瘤小鼠皮下注射双歧杆菌LTA.采用MTT、流式细胞术(FCM)、RT-PCR方法分别检测经双歧杆菌LTA处理后B16荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性、NK细胞NKG2D受体蛋白表达以及肿瘤组织内Rae-1、H60mRNA表达的变化.结果 与对照组相比,经双歧杆菌LTA处理后,B16荷瘤小鼠的NK细胞杀伤活性增强(P<0.05),NK细胞受体NKG2D表达明显增加(P<0.05),肿瘤组织Rae-1、H60 mRNA表达上升(P<0.05),并具有浓度依赖性.结论 双歧杆菌LTA能够增强B16荷瘤小鼠NK细胞的杀伤活性,其机制可能与上调NK细胞受体NKG2D的蛋白表达和肿瘤组织Rae-1、H60 mRNA的表达有关.
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NF-κB、PKC和PC-PLC在双歧杆菌的脂磷壁酸激活巨噬细胞产生NO中的作用
目的 探索双歧杆菌的LTA激活巨噬细胞产生一氧化氮(NO)的信号途径.方法 以LTA刺激大鼠腹腔巨噬细胞,用激光共聚焦显微镜定量测定其诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的含量,以Griess试剂检测巨噬细胞产生NO的含量.结果 LTA刺激组大鼠腹腔巨噬细胞iNOS和NO的含量明显高于对照组(P＜0.01).以PDTC、Chelerythrine和D609分别预先孵育巨噬细胞,再以LTA刺激巨噬细胞,其产生iNOS和NO的量明显低于LTA刺激组(P＜0.01).结论 双歧杆菌的LTA可通过NF-κB、PKC和PC-PLC激活巨噬细胞,使之产生多量的iNOS以及NO.
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双歧杆菌脂磷壁酸对结肠癌细胞CD44v6和MMP-2表达的影响
目的 研究双歧杆菌脂磷壁酸(LTA)对结肠癌细胞中CD44v6与基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响,探讨其在抑制结肠癌转移中的作用.方法 结肠癌LoVo细胞及HT-29细胞用含50 mg/L双歧杆菌LTA的培养液培养24 h后,RT-PCR和免疫细胞化学染色检测CD44v6和MMP-2在结肠癌细胞中的表达变化.结果结肠癌LoVo细胞及HT-29细胞中CD44v6和MMP-2的mRNA和蛋白质均呈高表达,经双歧杆菌LTA处理后,其表达均明显下降,与对照组比较,差异有非常显著性(P<0.01).结论 双歧杆菌LTA可能通过下调CD44v6和MMP-2的表达来抑制结肠癌的转移.
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纳米氧化铁双歧杆菌LTA对实验性胃癌抑制效果的影响
目的 探讨纳米氧化铁(Fe3O4)双歧杆菌脂磷壁酸(Lipoteichoic acid,LTA)对实验性胃癌体内抑制效果的影响及其抑瘤途径.方法 用人胃癌BGC823细胞建立裸鼠移植瘤模型,用硝酸还原酶法检测各剂量组裸鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和iNOS的含量,用免疫组化法检测移植瘤内VEGF、Survivin和TAMs的表达.结果 纳米Fe3O4-LTA各组与阴性对照组相比,NO生成量增加、iNOS活性增高,差异有非常显著性(P<0.01).移植瘤内VEGF、Survivin和TAMs蛋白表达显著低于阴性对照组(P<0.01).结论 纳米Fe3O4-LTA对人胃癌裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其抑瘤机制可能与激活巨噬细胞,使其分泌多种具有杀瘤作用的活性因子以及下调胃癌内VEGF、Survivin和TAMs的表达,进而抑制其血管形成有关.
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A群链球菌感染与肾炎、风湿热
一、A群链球菌A群链球菌(group A streptococcus,GAS)能产生多种菌体代谢物质,并具有多种生物学与免疫学活性(Nagamune 2005).本菌分离之初和培养早期,可见荚膜,菌体细胞壁表层则为以脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)为主的LTA结合蛋白和血纤柄蛋白(fibrinonectin)结合蛋白,并依此与宿主细胞反应.细胞壁C多糖体是GAS特异性群抗原,型别则由细胞壁表层M蛋白及T蛋白的抗原性不同而进行区分,现分类为80型以上.M蛋白是具α螺旋结构的稳定的二聚体、以螺旋型卷曲状分子突出于菌体表层.
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双歧杆菌脂磷壁酸抗免疫衰老的实验研究
目的:探讨双歧杆菌抗衰老的分子机理.方法:在建立D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型的同时,每日注射双歧杆菌LTA.检测各组小鼠体重增长曲线、胸腺形态、胸腺指数、用免疫组化方法检测胸腺c-fos、 p16蛋白表达及用ELISA法检测外周血IL-2的含量.结果:与青年对照组小鼠相比,衰老模型组小鼠胸腺组织形态结构异常,体重、胸腺指数、胸腺c-fos蛋白表达与外周血IL-2含量显著下降,胸腺p16蛋白表达显著升高;而双歧杆菌LTA,能显著逆转上述这些变化.结论:双歧杆菌LTA具有抗衰老作用.
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双歧杆菌脂磷壁酸抗氧化作用的实验研究
目的 通过研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸(LTA)对D-半乳糖致衰老小鼠氧化系统指标及Klotho基因表达变化的影响,探讨双歧杆菌LTA延缓衰老的分子机制.方法 在D-半乳糖诱导小鼠亚急性衰老的同时,每日腹腔注射双歧杆菌LTA.用试剂盒检测小鼠肾脏组织SOD活性及MDA的含量,同时用RT-PCR、Western blot及免疫组化方法检测各组小鼠肾脏组织Klotho基因表达情况.结果 与青年对照组小鼠比较,衰老模型组小鼠SOD活性显著下降,MDA含量显著升高,Klotho基因在转录和翻译水平表达均明显下降;而双歧杆菌LTA能显著逆转上述变化.结论 双歧杆菌LTA可能通过提高衰老小鼠的抗氧化活性及上调Klotho基因表达,从而发挥其延缓衰老的作用.
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双歧杆菌脂磷壁酸对衰老小鼠脑组织自由基代谢和器官指数的影响
目的通过研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸(LTA)对亚急性衰老小鼠脑组织自由基代谢及器官指数的影响,探讨双歧杆菌抗衰老的分子机理.方法 D-半乳糖诱导小鼠衰老的同时,连续注射双歧杆菌LTA,检测小鼠器官指数、脑组织自由基代谢的变化.结果模型组小鼠的脑指数、胸腺指数、肾指数显著降低,脾指数显著升高;脑组织的SOD、NO、NOS显著下降,MDA显著升高.而双歧杆菌LTA能显著逆转上述变化.结论双歧杆菌LTA具有一定的抗衰老作用.
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乳酸杆菌脂磷壁酸通过下调脂筏中Lck激酶水平抑制大鼠肝脏Kupffer细胞TLR4通路
目的:探讨保加利亚乳酸杆菌脂磷壁酸(Lipoteichoic Acid of Lactobacillus bulgancus,LBG-LTA)是否能下调细胞膜脂筏中的淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lymphocyte-specific protein tyrosine kinase,Lck),进而抑制大鼠肝脏Kupffer细胞Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)通路.方法:分离培养10只雄性Wistar大鼠的Kupffer细胞;培养LBG并制备LBG-LTA;有或无LBG-LTA、脂筏裂解剂甲基-β-环糊精(methyl-β-cyclodextrine,MβCD)、Lck抑制剂PP2分别预处理情况下,以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激Kupffer细胞,提取各组细胞的膜-浆蛋白及核蛋白,蔗糖密度梯度离心法提取膜-浆蛋白中的脂筏及非脂筏组分,Western blot检测脂筏及非脂筏组分中TLR4、TANK结合激酶1(TANK binding kinase-1,TBK1)、Lck及核蛋白中的核因子B (nuclear factor-κB,NF-κB),酶联免疫吸附法检测培养上清中的肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素1β(interleukin-1β,IL-1β).结果:LPS上调的TLR4、Lck主要在脂筏内(与对照孔脂筏相应数值之比为0.95 0.23 vs 0.0120.0023,1.05 0.26 vs 0.022 0.0052,P均＜0.05),TBK1主要在非脂筏组分中(与对照孔非脂筏组分数值之比1.02 0.21 vs 0.0480.011,P＜0.05),核蛋白中的NF-B及培养上清中的TNF-α和IL-1β亦明显升高(与对照孔相应数值之比为0.78 0.16 vs 0.0760.014,189.2 27.1 vs 5.62 0.82,131.6 18.8 vs 7.24 1.14,P均＜0.05).与MαCD或PP2一样,LBG-LTA也明显抑制LPS的作用(LTA+LPS孔脂筏中TLR4、Lck与LPS孔相应数值之比为0.15 0.036 vs 0.95 0.23,0.17 0.052 vs 1.05 0.26,非脂筏组分中TBK1与LPS孔的比较为0.25 0.062 vs 1.02 0.21,NF-B、TNF-α及IL-1β与LPS孔相应数值之比为0.17 0.035 vs 0.78 0.16,32.2 4.37 vs189.2 27.1,23.4 3.29 vs 131.6 18.8,P均＜0.05).结论:LBG-LTA下调大鼠Kupffer细胞膜脂筏中的Lck,进而抑制其TLR4通路.
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乳酸杆菌脂磷壁酸抑制脂多糖诱导的大鼠肝脏Kupffer细胞TLR4通路的激活
目的:探讨保加利亚乳酸杆菌脂磷壁酸(Lipoteichoic Acid of lactobacillus bulgaricus,LBG-LTA)对大鼠肝脏Kupffer细胞Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)信号通路的作用.方法:雄性健康Wistar大鼠10只(2月龄,体重250～300g)处死后,分离培养肝脏Kupffer细胞;培养LBG,并提取制备LBG-LTA;Kupffer细胞,在有或无LBG-LTA (0.1、1、10 μg/mL)预处理的情况下,给予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,1 EU/mL)刺激后,Westem blot检测各孔Kupffer细胞的TLR4、TANK结合激酶1(TANK binding kinase-1,TBK1)及核中的核因子B(nuclear factor-κB,NF-κB)水平,酶联免疫吸附法检测各孔培养上清中的肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素1β(interleukin-1β,IL-1β).结果:分离的Kupffer细胞经不同浓度LBG-LTA预处理后,其在LPS刺激下所表达的TLR4、TBK1、核中NF-B的水平及生成的TNF-α和IL-1β明显低于无LBG-LTA预处理情况下的LPS孔(P＜0.05),且LBG-LTA的作用呈浓度依赖性.结论:LBG-LTA以浓度依赖的方式抑制了LPS诱导下大鼠Kupffer细胞TLR4通路的激活.
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Toll样受体介导的脂磷壁酸生物学效应
Toll样受体是新近发现的一组介导天然免疫的受体.Toll样受体在革兰阳性菌脂磷壁酸的各生物学效应中发挥了启动作用,Toll样受体的信号通路是终产生天然免疫的途径,在脂磷壁酸抗感染免疫中Toll样受体2、Toll样受体4起了关键作用.脂磷壁酸在抗肿瘤免疫等其他生物学效应中的作用还有待进一步证实.另外介绍了一些受体相关分子MvD88、MD-2、CD14,它们在Toll样受体介导的脂磷壁酸各生物学效应的信号传导中起了重要作用.
