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肺炎链球菌重组自溶酶(Re-LytA)滴鼻免疫小鼠的实验研究
目的 评价重组肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)自溶酶(autolysin,LytA)滴鼻免疫诱导小鼠抗Sp感染的保护性效果.方法 用亲和层析的方法纯化出重组Sp LytA蛋白,以CpG作佐剂,对小鼠进行滴鼻免疫(A组).对照组(B组)用无菌盐水滴鼻;多糖疫苗组(C组)用23价多糖疫苗肌肉注射.于末次免疫后2周,用Sp分别以滴鼻和腹腔注射两种方式进行攻击感染.攻击之前采集血清和鼻咽灌洗液等样品,采用ELISA测试其抗体水平.滴鼻攻击后4 d,采集小鼠鼻咽灌洗液和肺灌洗液,进行Sp细菌计数;腹腔注射攻击后7 d内观察各组小鼠死亡情况.结果 B组未检测到LytA抗体和多糖抗体,C组多糖抗体阳性;A组LytA抗体(包括tgG、IgA、sIgA)均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).腹腔注射攻击后,A、C组小鼠的存活率明显高于B组(P<0.05),A组和C组之间没有明显区别(P>0.05).滴鼻攻击后,A组鼻咽部灌洗液Sp细菌计数明显低于B组和C组(P<0.05).结论 Re-LytA滴鼻免疫可诱导实验小鼠产生一定的抵抗Sp感染的保护性免疫力,这种保护性的免疫力可能与sIgA相关.
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流行性脑脊髓膜炎
一、病原学及流行病学1病原学脑膜炎双球菌属奈瑟氏菌属,革兰阴性,在37C、含5%～10%CO2、pH7.4环境中易生长.本菌含自溶酶,如不及时接种易溶解死亡.对寒冷、干燥较敏感,低于35℃、加热至50℃或一般消毒剂处理,极易使其死亡.
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再谈青霉素用药过程中易忽略的问题
青霉素是临床一线抗生素药物[1].青霉素G是β-内酰胺类抗生素,对大多数革兰氏阳性球菌、杆菌、革兰氏阴性球菌和各种螺旋菌具有强大的杀菌作用,此外,还可触发细菌的自溶酶,致使细菌膨胀、变性、破裂、溶菌而死亡[2].具有杀菌性强、全身分布良好、毒性低、对敏感菌感染的疗效较满意等优点[3],因此,青霉素G静脉输注在临床上依然普遍应用.然而,由于青霉素G是一种有机酸,易受各种理化因素的影响,静脉输注时如只注意它的配伍禁忌,不注意它的理化性质、药理活性及其溶媒与其他药物的相互作用,不仅会造成浪费、延误治疗,甚至危及病人生命.
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小檗碱对MRSA自溶酶系统作用的研究
目的 探讨小檗碱与β内酰胺类抗生素对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的协同抗菌作用机制.方法 采用蛋白印迹试验(Western-blot)测定小檗碱对MRSA的青霉素结合蛋白(PBP)2a表达的影响,TritonX-100诱导的自溶试验及自溶酶谱分析测定小檗碱对MRSA自溶酶系统的影响.结果 小檗碱对MRSA所产PBP2a的表达无影响,但能显著诱导MRSA的自溶酶系统.结论 小檗碱对自溶酶系统的激活作用可能是小檗碱增强β内酰胺类抗生素对MRSA抗菌作用的机制之一.本研究为今后小檗碱用于临床抗MRSA治疗提供了科学的理论基础.
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连续监测血培养系统中肺炎链球菌自溶特点分析
目的 研究连续监测血培养系统(CMBCSs)中肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)的自溶特点和影响因素,建立肺炎链球菌培养假阴性的检验方法和预防措施.方法 选取肺炎链球菌标准株ATCC 6303、ATCC 49619、卫生部2012年4号质控菌(WSB-1204)和6株临床分离株,在Bactec 9120型血培养仪中培养,观察肺炎链球菌在不同时间段的菌体形态差异,比较不同来源菌株、不同血培养搋等阳性报警时间及报警后自溶死亡时间的差异.同时,采用肺炎链球菌ATCC 6303进行实验,比较快速免疫层析法、乳胶凝集法和16S rRNA基因扩增及测序3种方法对于肺炎链球菌的检测能力.结果 模拟实验中肺炎链球菌在CMBCSs中阳性报警后可在8～10h内自溶死亡,自溶死亡的时间受菌株来源、血培养瓶种类、营养条件等多种因素的影响.其中Bactec需氧瓶相对于小儿瓶和厌氧瓶的报警后自溶死亡的时间更短.自溶的肺炎链球菌,直接涂片镜检可能为革兰阴性球菌或难以辨认的细胞碎片,但可采用乳胶凝集法、胶体金免疫层析法和16S rRNA基因扩增及测序的方法进行检测,其低检测限分别为106 CFU/mL、105 CFU/mL和105 CFU/mL.结论 连续监测血培养系统中肺炎链球菌自溶的影响因素较多,采用需氧+厌氧血培养、报警后及时取阳性瓶转种,有利于防止肺炎链球菌假阴性培养的发生,提高血培养的阳性检出率.
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刺参生物活性物质的研究进展
此文综述了刺参的主要生物活性物质组成及其药理作用的研究进展,以期为刺参生物活性物质的开发和利用提供参考.
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肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白B细胞表位的预测、筛选及确定
目的 确定肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白B细胞线性表位.方法 通过生物信息学方法预测肺炎链球菌LytA蛋白分子的B细胞表位并人工合成相应肽段;经克隆、表达、纯化等步骤得到纯化的重组LytA(rLytA)蛋白用以免疫小鼠并进行Westen blot鉴定;取免疫组小鼠和对照组小鼠血清分别与人工合成的候选B细胞表位肽段进行间接ELISA检测,筛选出B细胞表位.结果 利用多种方法分析LytA蛋白分子的B细胞表位,经整理得到11条候选肽段,命名为LB1到LB11,并进行了人工合成.利用分子生物学技术获得了rLytA蛋白并成功地免疫了小鼠,间接ELISA结果显示:肽段LB3、LB5、LB6、LB7、LB11与rLytA免疫小鼠的血清发生反应,其OD 450 nm读数比相应的阴性对照小鼠显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 确定了肺炎链球菌LytA蛋白分子5个B细胞线性表位的位置和序列.
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肺炎链球菌自溶酶(LytA)黏膜免疫小鼠的生物安全性评价
目的 开展肺炎链球菌自溶酶(LytA)生物安全性的动物实验研究,为其申报生物制品鉴定提供实验数据.方法 制备纯化的重组表达LytA蛋白,以6.5 μg、13.0 μg和19.5 μg 3种剂量黏膜免疫BALB/c小鼠,根据(中华人民共和国国家标准食品安全性毒理学评价程序>(GB15193.1-1994)进行LytA的90 d喂养试验、传统致畸试验及遗传毒性试验检测,以分析其生物安全性. 结果 90 d喂养试验结果显示各实验组小鼠与对照组小鼠的体重增长趋势一致,且各时间点检测的小鼠体重均无显著性差异(P>0.05).传统致畸试验检测发现各实验组小鼠与对照组小鼠心脏、肺、肝脏、肾、脾、胃、子宫重量、红细胞和白细胞数目、谷丙转氨酶、尿素氮、总胆固醇、甘油三脂、血糖、总蛋白、白蛋白及球蛋白等指标均无明显差异(P>0.05).小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果显示LytA经鼻腔黏膜免疫小鼠无遗传毒性.结论 利用90 d喂养试验、传统致畸试验及遗传毒性试验证明LytA鼻腔黏膜免疫BALB/c小鼠安全、毒副作用不明显,有良好的生物安全性,值得进一步研究.
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一种改良的金黄色葡萄球菌自溶酶谱分析方法
目的 建立金黄色葡萄球菌自溶酶谱的研究方法.方法 用SDS抽提金黄色葡萄球菌的自溶酶粗提蛋白.将同样菌体热杀灭后用SDS抽提其细胞壁粗提物作为自溶酶的底物,以SDS-PAGE电泳分析金黄色葡萄球菌的自溶酶谱.结果 凝胶在黑色背景下可见每条泳带上有20多条大小不一的黑色条带,如用1%亚甲基蓝染色,则可见凝胶背景为蓝色,自溶酶条带呈透明状.结论 该方法可用于研究金黄色葡萄球菌在不同因素影响下的自溶酶谱及其活性,有助于研究抗菌药物对金黄色葡萄球菌自溶酶系统的作用.
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肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白T细胞表位的预测、筛选及确定
目的 确定肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白CD4 T细胞及CD8 T细胞的表位.方法 通过生物信息学方法预测肺炎链球菌LytA蛋白分子小鼠的MHC-Ⅰ结合肽(CD8T细胞表位)和MHC-Ⅱ结合肽(CD4T细胞表位)序列并人工合成相应肽段；经诱导表达、纯化、透析、去内毒素、定量等步骤得到纯化的rLytA蛋白用以免疫小鼠；分离每只免疫组小鼠和对照组小鼠的脾及淋巴结细胞并分别与每条人工合成的候选表位肽段体外共培养,取培养上清进行双夹心ELISA检测每组细胞IFN-γ的产生情况；用初步筛选到的表位多肽刺激小鼠的脾及淋巴结细胞并进行细胞内染色及细胞流式技术检测,筛选出LytA蛋白分子T细胞表位.结果 利用多种方法分析了LytA蛋白分子的MHC-Ⅰ结合肽及MHC-Ⅱ结合肽,经整理得到候选MHC-Ⅰ结合肽26条,候选MHC-Ⅱ结合肽7条,并进行了人工合成.利用分子生物学技术获得了rLytA蛋白并成功免疫了小鼠；双夹心ELISA结果初步提示:肽段LⅠ4、LⅠ5、LⅠ6、LⅠ7、LⅠ11、LⅠ 12、LⅠ13、LⅠ 14、LⅠ 25以及肽段LⅡ3、LⅡ4、LⅡ5刺激免疫小鼠细胞产生的IFN-γ量比相应的对照小鼠显著升高;细胞流式技术进一步确定:经肽段LⅠ4、LⅠ6、LⅠ7、LⅠ11、LⅠ12、LⅠ 13、LⅠ 14及LⅠ 25刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD8双阳性的细胞百分比较对照小鼠细胞的百分比显著升高；经肽段LⅡ4和LⅡ5刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD4双阳性的细胞百分比较对照小鼠细胞的百分比显著升高.结论 确定了肺炎链球菌LytA蛋白分子2个CD4 T细胞及8个CD8 T细胞的表位.
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格氏链球菌自溶酶AtlS的研究进展
格氏链球菌自溶酶AtlS是形成正常细胞壁结构和生物膜以及细菌自溶的关键蛋白。AtlS可调节细菌应激耐受力、生物膜形成和胞外DNA的释放，其表达是一个复杂的调节系统。本文除变异链球菌等口腔链球菌自溶酶外，重点就AtlS在格氏链球菌中的表达、信号转导通路及其相关调节研究进展作一综述。
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用脱脂牛奶保存淋病双球菌的效果观察
淋病双球菌属奈瑟菌属,对外界因子抵抗力较低,人工培养要求营养条件高,且能产生自溶酶,在培养过程中需及时移种,否则极易死亡,菌株也不易保存.但是,为了对淋病双球菌做进一步分析研究,保存和积累菌株是必不可少的工作.我们观察了用脱脂牛奶在不同温度下保存淋病双球菌的效果. 材料和方法一、菌株来源于性病门诊采集疑似淋病患者男性尿道、女性宫颈管和尿道标本,接种于淋球菌T-M培养基(英国OXOID)分离培养,选择具有淋病双球菌典型形态菌落、涂片革兰染色阴性双球菌及氧化酶试验阳性的菌株,再做生化鉴定,葡萄糖(+)、蔗糖(-)、麦芽糖(-)、乳糖(-)的菌株确认为淋病双球菌用于试验.
