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胃癌相关抗原模拟表位的筛选及鉴定
噬菌体表面呈现技术作为一种揭示蛋白质相互作用的快捷有效工具,已受到广泛重视,并在抗原表位的确定及多肽疫苗的设计中显示出优势〔1,2〕。噬菌体随机肽文库是基于上述技术而构建的。噬菌体其被认为是配体的“万能库”,这些配体不一定和天然配体完全相同,但能模拟天然配体与受体的结合特性。因此,在抗原表位-抗体的识别研究中,可以从肽库中直接筛选出能和抗体结合的表位,这些表位既可以是线性表位,也可以是模拟的构象性表位。
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应用噬菌体表面展示技术筛选丙型肝炎病毒NS5A抗原模拟表位
目的:筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A(HCVNS5-A)特异性噬菌体模拟表位,为抗HCV的疫苗研究探索新途径.方法:应用噬菌体表面展示技术,以抗-HCV NS5A的单克隆抗体作为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机12肽库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选过程,随机挑取30个克隆,经噬菌体酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验,后对所选克隆进行DNA序列分析,以确定HCV NS5A抗原的模拟表位.结果:经噬菌体富集后,从随机筛选的30个克隆中得到12个阳性克隆,确定氨基酸序列XXXPXXXLLRXX为HCV NS5A的模拟表位.结论:用噬菌体12肽库成功筛选得到HCV NS5A的模拟表位,为开展用HCV模拟表位探索HCV的防治研究创造了条件.
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结核分枝杆菌分泌蛋白64抗原模拟表位的筛选研究
MTB分泌蛋白64(MPT64)是MTB重要的保护性抗原,也是结核病血清学诊断的理想抗原之一[1].然而目前报道MPT64抗原对血清标本的直接检出率较低[2].20世纪80年代兴起的噬菌体展示随机肽库(phage display peptide library)技术是一种快捷、高效分析蛋白分子间相互作用的工具[3],尤其适于筛选生物活性大分子的配体.
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华支睾吸虫模拟抗原表位的筛选和鉴定
目的 从噬菌体12肽库中筛选华支睾吸虫模拟抗原表位.方法 应用噬菌体随机12肽库亲和筛选华支睾吸虫病患者混合血清IgG,经过3轮的淘筛,随机挑取蓝色噬菌斑进行扩增,以ELISA检测其免疫活性,挑选免疫活性较高的克隆进行序列分析及免疫学鉴定.结果 8个阳性克隆测得6个DNA序列,Western-bloting显示6个单克隆噬菌体均可与华支睾吸虫患者血清反应,斑点免疫金银染色法有3个克隆可被华支睾吸虫患者血清识别.结论 应用噬菌体肽库筛选技术可以获得华支睾吸虫模拟抗原表位.