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胃癌相关抗原模拟表位的筛选及鉴定
噬菌体表面呈现技术作为一种揭示蛋白质相互作用的快捷有效工具，已受到广泛重视，并在抗原表位的确定及多肽疫苗的设计中显示出优势〔1,2〕。噬菌体随机肽文库是基于上述技术而构建的。噬菌体其被认为是配体的“万能库”，这些配体不一定和天然配体完全相同，但能模拟天然配体与受体的结合特性。因此，在抗原表位-抗体的识别研究中，可以从肽库中直接筛选出能和抗体结合的表位，这些表位既可以是线性表位，也可以是模拟的构象性表位。
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抗原表位预测的免疫信息学方法研究进展
表位是抗原分子中由特殊的化学基团组成的结构,根据与抗原受体结合的不同可分为B细胞表位和T细胞表位.B细胞表位是抗原中可被B细胞抗原受体或抗体特异性识别并结合的线性片段或空间构象性结构.B细胞表位只有很少的一部分是线性表位,而绝大部分(约90%)是构象性表位.
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巴曲酶的线性和构象型B细胞抗原表位的预测
目的:预测巴曲酶的B细胞线性表位和构象型表位,本项目的预期成果可为该药物的安全化应用提供新思路.方法:基于巴曲酶的蛋白质序列,采用DNAStar软件和ABCpred、BCPREDS、BcePred和BepiPred 1.0服务器预测巴曲酶的线性表位.以蝮蛇毒蛋白C激活剂蛋白的晶体结构为模板,利用MODELLER9.10软件中的Pythonwin程序进行该酶的同源模建,并利用PROCHECK、ERRAT及PROSA程序进行合理化评价.根据巴曲酶的模建三维结构并结合DiscoTope和cons PPISP网络数据库预测构象型抗原表位.结果:得到肽端AA3~9、19~31、57~82、93~101、106~114、127~142、171~183、196~208、223~230区域为巴曲酶的B细胞线性表位优势区域.然后得到蛋白的N端41~48、57~71、76~82、93~100、109~115、127~133、146~152、194~203区段为B细胞构象型表位区域.结论:这些B细胞抗原表位可为降低巴曲酶的免疫原性提供实验依据.
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幽门螺杆菌鞭毛素B细胞线性表位的鉴定
幽门螺杆菌(Hp)在人群中的感染率超过50%,是慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌等疾病的主要致病因子[1].目前的"三联"或"四联"Hp治疗方案由于依从性差、耐药菌株增多及效-费比不合理等问题,客观上需要开发一种经济有效的疫苗用于群体防治.Hp疫苗研究目前集中在两个领域.
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噬菌体表达的短肽模拟蚯蚓与日本血吸虫共同表位研究
目的采用噬菌体呈现技术,获得蚯蚓与血吸虫的共同表位.方法依次以日本血吸虫病患者血清 (Sj-Ig)、蚯蚓免疫兔血清(Lt-Ig)和Lt-Ig、Sj-Ig作为靶分子,以噬菌体12肽库的第三轮扩增肽库为源肽库,进行2轮吸附-洗脱-扩增免疫筛选.每轮随机挑取蓝色噬菌斑各21个,用ELISA方法检测其抗原性,并对其反应性较好的阳性克隆进行测序.结果获得4个阳性克隆可与Sj-Ig、Lt-Ig较好的结合.得到3个阳性克隆的氨基酸序列,它们有蚯蚓与血吸虫共同的线性表位.结论结果说明,从12肽库筛选蚯蚓与寄生蠕虫抗原共同表位是可行的,同时也为获得寄生蠕虫共同抗原提供了一条新的途径.
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应用短肽阵列筛选哮喘患儿血清粉尘螨变应原特异性IgE抗体的结合表位
目的 筛选粉尘螨(Derf)主要和中等效价变应原(Der f1、Der f2、Der f4、Der f5和Der f7)可能具有的线性表位.方法 根据Der f1、Der f2、Der f4、Der f5和Derf7活性部位氨基酸序列,各合成含8个氨基酸的短肽,相互之间重叠7个氨基酸,将这些短肽点到芯片上构建微阵列,将此微阵列芯片与人血清IgE进行免疫标记反应,扫描芯片并分析数据.结果 合成了5组变应原共1128个短肽,并构建微阵列芯片.将6份对粉尘螨过敏的儿童血清混合并加样到微阵列芯片上,进行扫描和数据分析,终得到Der f1的4个表位(第46 ～53位氨基酸、第71 ～78位氨基酸、第99 ～110位氨基酸和第179 ～ 186位氨基酸),Der f2的3个表位(第15 ～22位氨基酸、第80 ～89位氨基酸和第106～ 113位氨基酸),Derf4的6个表位(第69 ～82位氨基酸、第107～116位氨基酸、第225 ～232位氨基酸、第261 ～268位氨基酸、第355 ～365位氨基酸和第483 ～496位氨基酸),Der f5的1个表位(第102 ～ 109位氨基酸)和Derf7的3个表位(第32 ～39位氨基酸,第52 ～64位氨基酸和第100 ～107位氨基酸).结论 确定了粉尘螨变应原Der f1、Der f2、Der f4、Der f5和Der f7线性表位.
关键词： 尘螨变应原 肽微阵列 免疫球蛋白E(IgE) 线性表位
