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病毒入侵的细胞生物学机制
随着我们对细胞膜分子、病毒蛋白质微粒结构的了解及它们与受体分子间相互作用的认识,我们对病毒入侵的机制有了深入的了解,这为研制有效的拮抗剂、疫苗及特异性的载体提供了新视野和思维方法.本文就病毒入侵的细胞生物学机制方面的研究进展作一综述.
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PrP及其缺失突变体与微管蛋白的体外相互作用的初步研究
为了进一步确定PrP蛋白与微管蛋白是否发生分子间相互作用以及PrP蛋白多肽链中与微管蛋白相互作用的区域,我们表达纯化了全长的PrP以及PrP蛋白缺失突变体,提取了兔脑组织中天然微管蛋白.利用pull-down及免疫共沉淀方法检测全长PrP及PrP蛋白缺失突变体与微管蛋白是否发生分子间相互作用.结果显示,全长His-PrP23-231能与微管蛋白发生体外相互作用,并首次证实了PrP与微管蛋白相互作用的区域位于PrP N端第23位至91位氨基酸.此研究为进一步研究PrP在神经细胞的主动转运机制以及Prion疾病的发病机制提供了一定的理论基础.
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载脂蛋白ApoE的原核表达以及与PrP蛋白间相互作用的初步研究
利用RT-PCR方法从人源细胞系SH-SY5Y cDNA中扩增出载脂蛋白ApoE基因,并在pET32a载体中表达融合蛋白His-ApoE,以纯化的融合蛋白免疫实验用兔获得特异性抗体,利用ELISA及免疫共沉淀方法对ApoE及PrP之间的相互作用进行研究.结果表明,SDS-PAGE显示表达的His-ApoE蛋白的相对分子量约为54 000,所制备的抗血清ELISA效价可达到1∶406 900,并能够有效地识别重组及动物组织中的内源性ApoE蛋白.ELISA和免疫共沉淀实验均显示,原核表达的ApoE可与全长的PrP蛋白(PrP23-231)在体外发生相互作用,其作用位点可能位于PrP蛋白的N端.这些结果为TSE经血传播的机制研究提供了新思路.
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Omics 时代的到来:检验医学的新希望与新挑战
随着人类基因组计划的顺利完成,功能基因组(functional genomic)、蛋白质组学(proteomic)、代谢组学(metabonomics)、激酶组学(kinomic)、免疫基因组学(immunogenomics)、肿瘤免疫组学(cancer immunomics)、免疫组学(immunomics)、抗原组学(antigenome)、抗原表位组学(epitomics)等等组学(omics)研究相继开展,大量有关人类组织细胞结构、功能、代谢及分子间相互作用的信息被发现.所有这些omics研究的目标均是通过一组数据反映人体特定组织器官的功能、代谢等.
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结核分枝杆菌分泌蛋白64抗原模拟表位的筛选研究
MTB分泌蛋白64(MPT64)是MTB重要的保护性抗原,也是结核病血清学诊断的理想抗原之一[1].然而目前报道MPT64抗原对血清标本的直接检出率较低[2].20世纪80年代兴起的噬菌体展示随机肽库(phage display peptide library)技术是一种快捷、高效分析蛋白分子间相互作用的工具[3],尤其适于筛选生物活性大分子的配体.
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共无定型药物系统的研究进展
将两种水难溶性的晶态药物通过球磨、淬冷或低温研磨的方法制成共无定型药物系统,既能提高药物的稳定性及溶出速率,又能减少单一药物不良反应的发生,从而解决难溶性药物联合用药面临的诸多问题.通过差示扫描量热法(differential scanning calorimetry,DSC)、X射线粉末衍射法(X-ray powder diffraction,XRPD)、拉曼光谱(raman spectroscopy,RS)和傅里叶转换红外光谱(fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)等可以验证共无定型药物系统的形成情况和分子间相互作用.共无定型药物系统的稳定性由它的玻璃化转变温度(glass transition temperature,Tg)及分子间相互作用共同决定.依据Gordon-Taylor方程和Flory-Huggins方程可以分别推算理论Tg值和相互作用参数x,从而在分子水平上对共无定型药物系统进行理论分析.共无定型药物系统的出现为联合用药提供了新的思路.
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微环境pH调控技术在固体分散体中的应用
微环境pH( pHM)调控技术是指利用pHM调节剂对药物粒子周围饱和溶液的pH进行调控的技术.该技术在固体分散体中有两方面的应用:一方面通过调节PHM提高弱酸或弱碱性药物溶解度;另一方面通过介导与药物分子间的相互作用促进药物形成无定形态,抑制药物重结晶,增加固体分散体稳定性.两种机制共同作用显著提高了难溶性药物的溶出与溶解.文中对pHM调控技术在固体分散体中的应用新研究进展进行综述,以期为固体分散体研究起到一定的借鉴和指导作用.
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一种将HEK293细胞固定在毛细管内壁上作为药物筛选固定相的新方法研究
将细胞固定在毛细管内壁上,利用亲和毛细管电泳研究受体配体相互作用并对组合化学合成化合物及天然产物进行筛选是近年来发展起来的新技术.在本文中,我们发展了一种将HEK293细胞固定在毛细管内壁上的新方法,对4个重要的固定化条件进行优化,其中包括细胞注入密度、PLL浓度、细胞培养时间和无菌处理方法.在优化后的实验条件下制备的固定化细胞贴壁毛细管柱,其均匀度、稳定性和耐用性良好,适用于毛细管电泳实验.该方法也可将超表达特定膜受体的HEK293细胞固定在毛细管内壁上,进而应用于靶向特定膜受体的亲和毛细管电泳药物筛选.
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造血干细胞归巢研究进展
造血干细胞(HSC)归巢是指HSC通过静脉移植经外周血循环进入受体后,经复杂的分子间相互作用而介导的其在骨髓内的识别与定位.归巢包括一系列过程,以移植的干细胞滚动粘附于骨髓血窦内皮始,继之以稳定的粘附并穿行内皮细胞,终达到血管外骨髓微环境并开始重建造血[1].
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LIM同源盒基因L3/Lhx8对腭突发育及腭裂形成的影响
LIM同源盒(homeobox)基因群是同源盒基因的亚家族之一.该基因群可编码的蛋白,N末端含有两个LIM领域,C末端含有一个LIM同源盒基因领域.它作为一类转录调节因子,通过其结构域特异的分子内或分子间相互作用,在不同种类动物的形态形成过程中,发挥着极为重要的调控作用[1~3].
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灯盏花素脂质体/水分配系数的研究与应用
目的应用脂质体/水分配系数,初步揭示灯盏花素与磷脂分子间相互的作用机理,探讨灯盏花素口服吸收机制,并且解释一些因素影响灯盏花素脂质体包封率的规律.方法采用平衡透析法测定灯盏花素的脂质体/水分布系数.结果与灯盏花素的油/水分配系数随着pH值的增加而减小相反,脂质体/水分配系数随着pH值的增加而增大;磷脂浓度增大,脂质体/水分配系数有增大的趋势.结论药物与磷脂膜的作用除疏水相互作用(hydrophobic interaction)外,离子间静电、氢键等相互作用占了很大比例;初步推测灯盏花素的吸收差可能是因为其吸收有除简单的被动转运外的其它机制;实验结果可以用来解释包封率影响因素的一些规律.
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用荧光光谱法研究分子间结合常数和结合位点数时的公式选择
基于荧光猝灭的荧光光谱法在药物分子之间相互作用的研究中有重要地位和广泛应用.根据药物分子间相互作用结合比例、荧光分子和操作条件等的不同,应采用不同的计算公式计算结合常数.对目前常用的线性Stem-Volmer方程、Lineweaver-Burk曲线、双对数回归曲线、Scatehard方程和Tachiya模型等计算公式的适用范围及其应用进行讨论,为研究工作中公式的选取提供参考.
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血浆MMP-3、TIMP-1、u-PA和uPAR检测在肝硬化肝癌患者中的临床价值
乙肝后的肝硬化和肝癌是细胞与分子间相互作用,导致肝细胞外基质(ECM)过量的纤维蛋白沉积及正常的肝脏组织结构畸变。ECM的降解主要由基质金属蛋白酶家族(MMPs)作用,MMPs包括MMP-1、MMP-2、MMP-3和MMP-9等多种酶,MMP-3为基质溶解素-1。uPA与纤维蛋白亲和力低,主要通过细胞膜上uPAR的协同作用激活纤溶酶原为纤溶酶,后者能激活MMPs(如MMP-3),引起ECM的降解。MMPs的主要调节因子是TIMP-1[1]。本文探讨测定MMP-3、TIMP-1、uPA和uPAR水平在肝硬化肝癌患者中的临床价值。
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柯萨奇B组病毒致病性的分子生物学研究
柯萨奇B组病毒(coxsackievirus group B,CVB)是微小RNA病毒科肠道病毒属成员,病毒性心肌炎的病例中大约有20%~25%是由柯萨奇B组病毒引起.CVB的致病机制十分复杂,病毒基因组以及病毒蛋白均在病毒致病过程中发挥重要作用.因此,对柯萨奇B组病毒的基因组、结构蛋白以及某些非结构蛋白与靶细胞内分子间相互作用生物信息的认识是阐述该病分子机制的基础.
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甲酰胺与腺嘌呤相互作用的理论研究
1研究背景 分子间相互作用的研究在新药的合成与设计、晶体工程和材料的性质的研究中也举足轻重,其中小分子与DNA碱基的相互作用是具有代表性及研究意义的一类分子间相互作用.DFT方法是近年来比较流行的一种处理相互作用多粒子体系的量子化学似计算方法.一般地, DFT的计算量约与基函数个数的3次方成正比,大体与ab initio HF SCF方法的计算量相当.
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差示扫描量热技术在中药脂质体研究中的应用
综述了近年来差示扫描量热技术在中药脂质体制备条件的选择、中药脂质体的结构表征以及中药药物成分与脂质体膜的分子间相互作用等方面的应用, 展望了高灵敏差示扫描量热技术在中药复方脂质体中的应用, 旨在为差示扫描量热技术在中药脂质体研究中更深入的应用提供参考.
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人单核细胞上尿激酶型纤溶酶原激活物受体参与细胞迁移
目的 研究单核细胞膜蛋白-尿激酶型纤溶酶原激活物受体在细胞迁移过程中的作用及相关机制.方法 采用密度梯度离心和粘附法分离、纯化人外周血单核细胞;在单核细胞趋化蛋白1诱导下,观察尿激酶型纤溶酶原激活物及其抗体、纤溶酶原激活物抑制剂1和尿激酶型纤溶酶原激活物受体抗体等因子对单核细胞迁移的影响.结果 在25 μg/L单核细胞趋化蛋白1诱导下,尿激酶型纤溶酶原激活物有促进单核细胞迁移的倾向,迁移细胞由对照组的179.40±38.49升高至251.00±26.11,P=0.076;尿激酶型纤溶酶原激活物抗体和纤溶酶原激活物抑制剂1对细胞迁移没有明显影响;而尿激酶型纤溶酶原激活物氨基末端则抑制迁移的细胞数至56.40±76.98,与对照组比较,差异有显著性(P<0.01).加入抗尿激酶型纤溶酶原激活物受体抗体之后单核细胞迁移也受到抑制,160 μg/L组迁移细胞数为151.20±20.33,与10 μg/L组(228.40±83.96)比较显著降低(P<0.05).结论 尿激酶型纤溶酶原激活物受体参与单核细胞趋化蛋白1诱导的单核细胞迁移,尿激酶型纤溶酶原激活物氨基末端对迁移具抑制作用,该作用甚至强于尿激酶型纤溶酶原激活物受体抗体,提示单核细胞迁移中尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体分子间相互作用的重要性.
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几种寡糖对白细胞-内皮细胞粘附影响及抗休克作用探讨
目的:探讨几种合成的寡糖对白细胞-内皮细胞粘附的影响及可能的抗休克作用, 筛选有效的抗白细胞-内皮细胞粘附药物.方法:(1)在载玻片上培养大鼠肺血管内皮细胞,分离重症烧伤休克大鼠外周血白细胞,用液流室和显微录像观察在不同切应力条件下寡糖对重症烧伤休克白细胞粘附率的影响.(2)复制重症烧伤休克大鼠模型,一侧颈总动脉插管给予寡糖,观察动物血压变化及存活时间.结果:与生理盐水组相比,TRT-2、TR O-2两种四糖寡糖可显著降低重症烧伤休克白细胞与内皮细胞的粘附(P<0.05),使重症烧伤休克大鼠血压在较长时间内保持稳定,存活时间显著延长(P<0.05),其它四种二糖和两种四糖无显著作用( P<0.05).讨论与结论:目前,寻找与粘附分子配体功能相近或更强的物质的工作越来越为国内外学术界所重视,原因有以下几个方面:一是粘附分子在多种病理生理过程中的重要作用,如休克、缺血再灌注损伤、器官移植、肿瘤转移等;二是对与粘附有关的病理过程尚缺乏明确而有效的防治方法;三是粘附分子间相互作用的机理逐渐得到阐明;四是通过化学方法合成粘附分子糖配体日趋成熟和可行.尽管如此,还没有一个疗效肯定的抗粘附药物问世 ,实验工作仍在进行之中.我们用自选设计合成的四个二糖和四个四糖进行了抗重症烧伤休克白细胞与内皮细胞粘附实验和抗休克实验,发现四个二糖无明显抗粘附作用,而四个四糖中 TRT-2和TRO-2有明显的抗粘附作用,同CD62L单抗相近甚至更好.值得注意的是,有抗粘附作用的寡糖可以显著延长重症烧伤休克大鼠的存活时间,没有抗粘附作用的寡糖则无此效应 ,还有一个有意思的现象是TRT-2或TRO-2单次给药和多次给药对重症烧伤休克大鼠血压的影响,虽然单次给药和多次给药动物存活时间统计差异不明显,但单次给药是使血压在较低水平维持较长时间的稳定,而多次给药是使血压在较高水平维持较长时间的稳定. 结果:合适结构的寡糖可以使白细胞与内皮细胞的粘附降低,且四糖比二糖的效果要好,有抗白细胞/内皮细胞粘附作用的寡糖具有抗休克作用,早期持续给药疗效较好,可延长重症烧伤休克大鼠存活时间.
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TRBP分子克隆及其功能初步研究
目的:构建TRBP原核表达载体,评价表达的重组TRBP蛋白对双链RNA的结合能力.方法:利用RT-PCR扩增小鼠TRBP基因双链RNA结合区,构建其与His标签融合的表达载体,转化E coli BI21( DE3)菌株,利用Ni-NTA磁珠对重组蛋白进行分离纯化;体外转录合成小鼠肝脏miR-122前体RNA Pre-miR-122,分别利用PAGE电泳和等温量热滴定仪检测TRBP与Pre-miR-122的结合能力.结果:分离纯化得到的重组TRBP蛋白为可溶蛋白,Mr为32 400,结合在NINTA磁珠上的TRBP能有效的结合Pre-miR-122.结论:成功建立了TRBP原核表达系统,初步研究了TRBP重组蛋白与双链RNA的结合能力.
关键词: RNA结合蛋白TRBP 原核表达 分子间相互作用 -
局灶性光热作用研究进展
激光发展的历史,早在1916年,20世纪伟大的科学家Albert Einstein就通过了分子间相互作用的原理提出了激光的概念.激光的全称为"Light Amplification by Stimulated Emissionof Radiation",即为"由受到刺激而发射的光放大产生的辐射".在这个理论的基础上,科学家Maiman在1960年成功地研制了世界上第一台红宝石激光器,象征激光治疗应用的开始.这时候的激光在使用上有很大的局限性,因为这时的激光为连续性、非选择性激光,尚无法精密地控制对组织的热损伤,对靶组织及周围组织都会造成烧灼作用,经常会造成对作用部位全部损伤和遗留瘢痕等缺点,这些缺点也使得该时期的激光只能用于对病变的切除而无法应用于美容方面.