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中药寡糖生物活性及炮制过程中化学反应研究概况
中药寡糖来源及分布广泛,以其特殊的生物活性和化学性质,在营养保健、疾病防治等方面有巨大潜力,其成分研究逐渐增多,并不断拓展研究及应用范围.中药寡糖可通过天然提取、降解和人工合成方法获取,其中以层析法为代表的天然提取方法为适用.中药寡糖具有不同的基团和连接方式,其结构复杂,在炮制过程中也有不同化学反应.本文从中药寡糖的分离、生物活性及炮制过程中化学反应等方面综述该领域研究概况.
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瘤果黑种草子化学成分的研究
目的:研究瘤果黑种草子的化学成分.方法:采用硅胶柱色谱进行分离纯化,根据理化性质和波谱分析鉴定化合物的结构.结果:从瘤果黑种草子中分离鉴定了9个化合物,分别为黑种草三糖(Ⅰ)、常春藤皂苷元3-O-α-L-鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(Ⅱ)、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃木糖基-(1→3)-α-L-鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(Ⅲ)、蔗糖(Ⅳ)、硬脂酸(Ⅴ)、十六烷酸甘油酯(Ⅵ)、β-谷甾醇(Ⅶ)、胡萝卜苷(Ⅷ)、对羟基苯甲酸(Ⅸ).结论:化合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅷ,Ⅸ首次从该植物中发现,其中化合物Ⅰ为新化合物.
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青蛇藤中的一个新寡糖
目的:研究青蛇藤中的化学成分.方法:应用硅胶、Sephadex LH-20,MCI,Rp-18柱色谱进行分离、纯化,根据理化常数和光谱分析鉴定其结构.结果:从青蛇藤氯仿萃取部分分离鉴定了2个寡糖,鉴定为:4-O-acetyl-β-cym(1→4)-O-β-D-cym(1→4)-O-β-D-can(1→4)-O-β-D-cym(1→4)-O-oleandronicacid-δ-lactone(1),和perisaccharide B(2).结论:化合物1为新化合物,化合物2为首次从该植物中分离得到.
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临床样品中不同蚀斑表型单克隆轮状病毒VP8基因序列分析
轮状病毒属于呼肠孤病毒属，为没有包膜的双链 RNA病毒，人畜禽共患，其感染每年引起约50万婴幼儿死亡[1]。宿主细胞表面的寡糖分子是一个重要的因子，它们与轮状病毒和细胞的相互识别及吸附有关，同时还影响了病毒的宿主特异性[2]。研究表明，轮状病毒外壳蛋白 VP4的糖类结合区域位于 VP4的亚基 VP8，其与细胞表面寡糖分子的相互作用使病毒识别并吸附到细胞表面。轮状病毒对细胞的感染是通过 VP8与细胞表面多糖，尤其是与内部唾液酸（N-acetyl- and N-glycolylneuraminic acids，Sia）的结合完成的[3]。人株、猴株以及猪轮状病毒 VP8基因序列在识别细胞表面唾液酸或其衍生物甲基-α二氮乙酰神经氨酸的位点有显著的差异[1]，影响病毒在细胞培养上的敏感性和适应性。
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中分子的研究进展及总量测定
中分子物质是指存在于体液中分子质量在300～5000Daltons之间的一类具有毒性作用的中等分子质量的物质(middle molecular substance MMS),简称中分子,主要以寡肽类化合物为主,包括寡糖、核苷酸、维生素、精胺以及其它一些未被鉴定的化合物.1971年,Babb等提出了中分子物质假说,提出尿毒症中毒本源性物质是中分子,而不是传统中认为的血中尿素、肌酐、尿酸等小分子物质的含量.
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Lewis Y拟糖脂脂质体探针的制备及免疫活性检测
目的:自行合成Lewis Y拟糖脂并寻找一种合适的标记拟糖脂的方法.方法:应用Lewis Y四糖合成了Lewis Y拟糖脂,以此制备了含3H-胆固醇标记和Lewis Y 拟糖脂的脂质体,利用Lewis Y糖特异性的抗体鉴定了糖脂的免疫学活性,并检测了Lewis Y 拟糖脂-脂质体与该抗体的结合能力.结果:在适宜条件下,Lewis Y 四糖拟糖脂的合成率为40%,合成的特异性糖脂高效薄层层析为单一条带;制备的Lewis Y 拟糖脂-脂质体与Lewis寡糖抗体具有特异结合能力.结论:以3H-胆固醇标记的Lewis Y拟糖脂-脂质体是一种效果良好的间接标记的拟糖脂探针.
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菊薯寡糖的抗抑郁作用研究
目的：研究菊薯寡糖的抗抑郁作用。方法将大鼠分为对照组、地昔帕明组、菊薯寡糖低、中、高剂量组，采用低速率差式强化（ DRL 72 s）程序训练并测定大鼠的强化数和反应数。结果与结论在大鼠DRL 72 s模型上，灌胃给予菊薯寡糖50、100 mg／kg可显著增加大鼠DRL 72s强化数，腹腔注射地昔帕明5 mg／kg具有类似的作用，提示菊薯寡糖在该模型上具有抗抑郁作用。
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巴戟天寡糖中果糖的测定方法
目的研究巴戟天寡糖中果糖的分析方法.方法采用4种不同条件对巴戟天寡糖进行酸水解,然后分别采用薄层色谱法(TLC)、凝胶过滤色谱法(GPC)和毛细管电泳法(CE)分析酸水解产物.结果TLC和GPC方法分析表明,2mol/L三氟乙酸(TFA)-120C-2 h条件水解巴戟天寡糖后无法获得原型果糖,0.01 mol/L TFA-40C-10 h条件无法使寡糖水解完全,0.5 mol/L TFA-40℃-2 h和0.05 mol/L TFA-40℃-10 h两种水解条件可使寡糖水解完全,得到果糖和葡萄糖.CE法进一步分析表明,0.05 mol/L TFA-40℃-10h为佳酸水解条件,经测定,巴戟天寡糖在该条件下酸水解后果糖与葡萄糖的单糖摩尔比为10:1.结论本研究提示,强酸水解和还原反应不适于巴戟天寡糖和多糖中的果糖分析,应采用温和酸水解条件,而CE可用于单糖组成分析.
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地黄中寡糖的提取分离工艺研究
目的研究地黄(Rehmannia glutinosa)中寡糖的提取分离工艺.方法建立水苏糖的HPLC测定法;以水苏糖含量为指标 ,采用正交试验优化地黄水提取物的提取工艺,对水提物进一步用离子交换树脂进一步纯化 ,再进行活性炭柱层析,以不同浓度梯度乙醇洗脱,分得寡糖的不同部位.结果地黄水提取的佳工艺为A2B3C2,即溶剂(水)体积10倍,提取3次,每 次提取1h.水提物经活性炭柱层析得到4个部位,部位Ⅰ～Ⅳ,其中部位Ⅱ及部位Ⅲ中水苏糖的含量分别为20.99%及60.51%. 结论地黄水提取的较佳工艺条件为A2B3C2,活性炭柱层析可以较好地将地黄中寡糖进行分离,其中水苏糖的HPLC测定法简便、稳定、可靠.
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降血糖多糖及寡糖的研究进展
糖尿病是由于糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱引起的慢性病.目前全球患者已逾一亿,其中国内患者约3 000万,仅次于美国,位居世界第二.一般认为,糖尿病与遗传、环境、病毒感染、肥胖、种族、营养物质代谢失衡以及内分泌失调等因素有关.糖尿病主要分为两大类,1型和2型.1型主要表现为胰岛β-细胞受到破坏,血中胰岛素缺乏,但对胰岛素仍然敏感,需长期应用胰岛素治疗.2型称为非胰岛素依赖型糖尿病.
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λ-卡拉胶寡糖体外对血管生成的抑制作用
为探讨λ-卡拉胶寡糖体外对血管生成的抑制作用,采用鸡胚尿囊膜模型(CAM)观察λ-卡拉胶寡糖对CAM血管发育的抑制,发现该寡糖可明显抑制CAM微血管生成,在200 μg·egg-1时,抑制率达54.90%.随后采用MTT法测定λ-卡拉胶寡糖对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,发现该寡糖的细胞毒作用在不同的细胞间具有选择性,对HUVEC的抑制强,高浓度时(1 mg·mL-1)能明显抑制其增殖,但低浓度(＜250 μg·mL-1)对细胞几乎无毒.对寡糖的细胞迁移和侵袭抑制作用进行检测,并测定其对HUVEC表达基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的影响.结果表明,λ-卡拉胶寡糖能有效减缓HUVEC的迁移、侵袭能力,并具有抑制HUVEC中MMP-2表达的作用.该研究说明λ-卡拉胶寡糖通过抑制内皮细胞的增殖、细胞侵袭和迁移达到血管生成抑制的作用.
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液质联用(LC/MS)技术在单克隆抗体(曲妥珠单抗)结构表征上的应用
目的:应用LC/MS(液质联用)和LC/MSE方法(液相色谱/非数据依赖二级质谱数据采集方法,等频率切换高与低碰撞能量进行质谱数据扫描)对单克隆抗体(曲妥珠单抗,人源化单克隆免疫球蛋白IgGl)的结构进行深度表征.方法:先用LC/MS对曲妥珠单抗完整蛋白及其亚基(轻链和重链)的相对分子质量进行测定;然后用多种酶(胰蛋白酶和AspN)酶解蛋白并用LC/MSE肽图分析法对曲妥珠单抗的氨基酸全序列进行解析和确定,同时对可能发生的翻译后修饰(PTMs)进行定性和定量分析.再通过PNGase F酶来释放抗体上的糖链并应用LC/FLR/MS(液相色谱荧光检测与质谱联用)方法对其糖基化修饰进行结构分析及确认.结果:对曲妥珠单抗的完整蛋白及其亚基(轻链和重链)的相对分子质量测定得到良好的质量准确度,由此可判定特定蛋白修饰在轻链和重链上的分布.通过对曲妥珠单抗酶解后的氨基酸全序列确认,可对其翻译后修饰以及可能的错误氨基酸序列进行解析.该抗体肽图分析的氨基酸序列覆盖率是100％.糖基化分析是通过对游离的N-链接寡糖进行2-AB荧光标记后再用LC/FLR/MS(液相色谱荧光检测与质谱联用)方法来进行的.联合使用这些分析方法,能够有效地对不同批号和不同工艺的抗体药物进行常规质量检测和深度表征,控制药物质量,为患者提供安全可靠的生物治疗药品.结论:结合液质联用(LC/MS和LC/MSE)技术,通过完整蛋白相对分子质量的测量,肽图分析测定氨基酸序列以及翻译后修饰的定性和定量分析,结合游离N-链接寡糖的分析表征,对单克隆抗体曲妥珠单抗进行了全面的结构表征,并建立了一套单克隆抗体结构表征的平台化方案.
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巴戟天寡糖对鼠强迫性游泳和获得性无助抑郁模型的影响
为了深入和全面地评价巴戟天寡糖(MOs)的抗抑郁作用，本研究观察了不同批次的MOs对大鼠，小鼠强迫性游泳和大鼠获得性无助抑郁模型的影响. 结果显示，3批MOs在20～50 mg*kg-1(ip或po)剂量范围内显著缩短大鼠和小鼠强迫性游泳期间的不动时间，其剂量效应均显示行为药理学所特有的U型曲线. 不同批次的MOs有效剂量均非常接近. 在大鼠获得性无助抑郁模型，MOs 60～100mg*kg-1(ip,每天2次，连续8次)显著减少大鼠的逃避失败次数，60 mg*kg-1还明显减少逃避失败动物数. 这些结果进一步表明MOs具有抗抑郁作用.
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Lewis Y寡糖在小鼠胚泡表面的表达受α1,2-岩藻糖基转移酶基因的反馈调控
目的探讨胚泡的Lewis Y寡糖合成关键酶α1,2-岩藻糖基转移酶基因FUT1及α1,3-岩藻糖基转移酶基因FUT4的表达和其表面Lewis Y寡糖抗原表达间的关系.方法以寡糖特异性单克隆抗体封闭体外培养的胚泡表面Lewis Y抗原,应用RT-PCR和间接免疫荧光方法检测胚泡的Lewis Y寡糖合成关键酶α1,2-岩藻糖基转移酶基因FUT1和α1,3-岩藻糖基转移酶基因FUT4及其表面Lewis Y抗原的表达.结果在胚泡表面Lewis Y寡糖被抗体封闭后,其FUT1的表达迅速升高,FUT4的表达则未见明显变化,而胚泡表面的Lewis Y寡糖在除去抗体后一直到再培养约21 h后才重新出现,在约30 h几乎全部复现.结论着床前胚泡表面的Lewis Y寡糖的表达主要受胚泡α1,2-岩藻糖基转移酶FUT1的反馈调节.
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巴戟天药材寡糖化学成分的高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测器指纹图谱研究
目的 建立巴戟天药材寡糖化学成分的高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测器(HPAEC-PAD)特征指纹图谱,为制定巴戟天药材质量标准提供参考数据.方法 利用HPAEC-PAD,色谱条件为,Hamilton RCX-10(4.1 mm×250 mm,7 μm),100 mmol·L-1 NaOH溶液(A)-100 mmol·L-1 NaOH,500 mmol·L-1 NaAc混合溶液(B)流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min -1,柱温为30℃,检测电压0.1V,分析时间为40 min.结果 建立了巴戟天药材寡糖化学成分的HPAEC-PAD指纹图谱,并标定出巴戟天药材20个共有峰,其中3个峰经与对照品比对为蔗果三糖、耐斯糖( nystose)、1F-果呋喃糖基耐斯(1F-fructo-furanosylnyslose),经指纹图谱系统解决方案软件(ChromafingerTM)生成共有模式,并进行相似度和主成分分析.不同产地巴戟天药材均含有以上共有峰,但在共有峰的峰高上有差异,并可用于区别巴戟天及其常见混伪品.结论 利用该方法建立的巴戟天寡糖类化学成分的指纹图谱特征性和专属性强,且该方法快速、灵敏、可靠,可用于控制巴戟天药材的质量.
关键词： 巴戟天 寡糖 高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测器 指纹图谱 -
巴戟天寡糖的高效薄层色谱指纹图谱研究
目的 建立巴戟天寡糖的高效薄层色谱(HPTLC)指纹图谱,并对不同产地巴戟天药材、炮制饮片、混伪品及含巴戟天药材的复方制剂--口服液X中寨糖成分进行分析比较.方法 在湿度40%-55%,温度20-32℃条件下,以乙酸乙酯-甲醇-水-冰醋酸为展开剂二次展开,展距13 cm,α-萘酚试液加热至显色,于可见光下检视.将巴戟天寡糖HPTLC指纹图谱导入指纹图谱系统解决方案软件(CHROMAP 1.5)生成共有模式.结果 巴戟天寡糖指纹图谱由11个特征条带(色谱峰)构成,并指认了其中的果糖、蔗糖,1-蔗果三糖、耐斯糖及1F-果呋喃糖基耐斯糖5个峰.结论 通过HPTLC指纹图谱考察,炮制后巴戟天寡糖成分出现质与量的改变;来源于4省的巴戟天药材无明显差异;混伪品中不含巴戟天寡糖不能作为巴戟天替代药材入药;含巴戟天药材的制剂仍可采用该HPTLC法进行制剂质量评价与控制.
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利用高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测法测定不同生长年限巴戟天中6种寡糖类成分含量
目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测法(HPAEC-PAD)对巴戟天不同生长期中的6种寡糖(葡萄糖、果糖、蔗糖、1-蔗果三糖、耐斯糖、1 F-果呋喃糖基耐斯糖)进行检测,对其动态积累规律进行分析,为研究巴戟天的佳采收期提供参考.方法 利用高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测法,色谱条件如下:Hamilton RCX-10色谱柱(4.1 mm×250mm,7μm),100 mmol·L-1 NaOH溶液(A)-100 mmol·L-1 NaOH溶液,500 mmol·L-1 NaOAc混合溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,柱温35℃,进样量25 μL.结果 随着生长年限的增加,巴戟天根中的单糖呈现减少的趋势,蔗糖则逐渐增加,聚合度为3或以上的1-蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖则在1～5年间渐增加,然后缓慢降低.结论 不同生长年限巴戟天中6种寡糖成分的组成及含量相差较大,提示该类成分的合成与生长年限有一定的关系,为制定适宜的采收期提供参考.
关键词： 巴戟天 寡糖 高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测法 生长年限 -
大豆低聚糖理化性质及其生理功能
1 大豆低聚糖低聚糖(或称寡糖Oligosacaccharides)是指分子结构由2～10个单糖分子以糖苷键相连接而形成的糖类总称,它是界于单糖(葡萄糖、果糖、半乳糖)和多糖(纤维素、淀粉)之间的"家族",分子量为300～2000.
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N链接聚糖,癌症诊断的标志物
蛋白质糖基化是一种常见也是复杂的蛋白质翻译后修饰过程,是指蛋白质或脂质附加上聚糖的过程.糖蛋白的聚糖部分的重要功能之一是维持多细胞生物体细胞的稳态.糖基化过程在外界生物化学环境的影响下会发生改变,包括生理条件的改变和某些特殊疾病状况例如癌症,从而导致糖链结构的改变.目前由于传统癌症标志物灵敏度和特异度较低,导致癌症不能在疾病早期阶段被识别,寻找新的癌症诊断标志物成为癌症研究的重要方向之一.近年来,糖基组学技术的进步为深入分析糖链结构提供了有力条件.因此,寻找合适的糖基作为癌症诊断的新的标志物成为癌症研究的热点.本篇综述阐释了聚糖作为癌症诊断标志物这一研究方向的进展状况.
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营养大讲堂之低聚糖
低聚糖对于很多人来说可能是个陌生的名词,但是说起双歧因子,您肯定有所耳闻.低聚糖就是一类典型的双歧因子.低聚糖,又称寡糖,是由3～9个单糖经糖苷键缩聚而成的低分子糖类聚合物.
