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添加rhGH与Gln的肠外营养对短肠大鼠小肠代偿作用的研究
目的研究添加生长激素(rhGH)及谷氨酰胺(Gln)的肠外营养(PN),对短肠大鼠残存小肠代偿的作用及作用机制.方法将SD大鼠按2×2析因设计方案随机分成STD组(-rhGH,-Gln)、rhGH组(+rhGH,-Gln)、Gln组(-rhGH,+Gln)及GG组(+rhGH,+Gln)共四组,建立PN短肠大鼠动物模型,行PN6天.PN结束后行小肠粘膜形态学定量检查,以免疫组化及TUNEL法行小肠粘膜上皮细胞PCNA表达及凋亡小体测定,RT-PCR法行凋亡相关基因bcl-2与baxmRNA表达测定,Northernblot法行小肠粘膜IGF-ImRNA表达测定.结果GG组残余小肠粘膜形态学上呈显著代偿表现,其PCNA表达明显增高,凋亡指数下降;凋亡相关基因bcl-2mR-NA表达升高,baxmRNA表达下降,P<0.01.析因分析表明rhGH与Gln间存在协同作用.小肠局部IGF-ImRNA表达在rhGH组及Gln组均增高,在GG组增高为明显,P<0.05.结论联用rhGH组与Gln,显著促进PN时短肠大鼠残余小肠代偿,二者间作用存在协同肠粘膜上皮细胞增生增加及凋亡抑制与小肠代偿密切相关;小肠局部IGF-I在rhGH与Gln协同作用的发挥中起重要介导作用.
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坏死性胰腺炎大鼠肠粘膜细胞表皮生长因子及其受体表达的变化
利用大鼠坏死性胰腺炎模型,测定小肠粘膜上皮细胞内表皮生长因子(EGF)含量、及其受体与mRNA表达。探讨这些变化与坏死性胰腺炎肠粘膜屏障损伤的关系。 1.材料与方法:(1)动物与分组:采用雄性Spragure-Dawly大鼠50只,体重340~380 g,随机分为5组:虚拟手术组(Ⅰ组);其余4组分别为制模后3 h组(Ⅱ组)、6 h组(Ⅲ组)、12 h组(Ⅳ组)处死和自然死亡组(Ⅴ组)。(2)大鼠急性坏死性胰腺炎模型的制备:采用2.5%戊巴比妥钠,1 ml/kg腹腔内麻醉后,腹部正中切口打开腹腔,在胆总管进入十二指肠开口下缘处用金属夹夹住十二指肠,然后向胰管方向注入5%牛磺酸钠1 ml/kg,注射完毕后用丝线结扎胆总管,2 min后松开银夹及胆总管处的丝线,关腹。虚拟手术组,操作同试验组,注入等量生理盐水,术后自由饮水。(3)方法与步骤:切取1 mm×2 mm的空肠组织块,3%戊二醛固定,依次脱水、包埋、超薄切片及醋酸铀、枸橼酸铅双染色,在透射电镜下对小肠粘膜细胞超微结构进行观察。于屈韧带远侧取近段空肠2 cm,甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋,5 μm连续切片,待作免疫组织化学及原位杂交染色。采用ABC法进行小肠粘膜细胞EGF及EGF受体的免疫组织化学染色,EGF受体mRNA采用地高辛随机引物原位杂交法。在单盲情况下应用四川大学研制的MIAS-300全自动图像分析仪,在每张免疫组织染色及原位杂交染色切片上任意选取20个阳性细胞进行吸光度扫描,计算平均吸光度值(A),即单位面积内EGF含量、EGF受体或EGF受体mRNA的表达。结果以均数±标准差表示,应用第四军医大学统计教研室SPLM统计软件进行统计学处理。
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尿海藻糖酶活性催化光度法测定
海藻糖酶(Trehalase,T,EC3.2.1.28)是许多动物体内存在的一种胞外酶.人海藻糖酶仅产生于肾小管和小肠粘膜上皮细胞.由于尿海藻糖酶只特异性来源于损伤的近端肾小管上皮细胞,并且海藻糖酶在尿液中生理活性稳定,因此,尿海藻糖酶可作为一种较理想的反映近端肾小管损伤的标志物,其活性测定对于重金属盐中毒与药物的肾毒性、急慢性肾小球疾病以及肾小管-间质疾病等的诊断和病情监测具有重要应用价值[1-5].
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肠道菌群失调、内毒素与小儿胃肠功能障碍
1胃肠功能和胃肠功能障碍胃肠功能主要有2个方面:①消化食物。由消化系统所分泌的各种消化液和消化酶,包括唾液、胃液、胰液、胆汁以及小肠粘膜上皮细胞微绒毛所产生的酶和有节奏、协调的胃肠蠕动来完成;②吸收营养素和排泄废弃物,主要由小肠粘膜上皮细胞即吸收细胞吸收各种营养素(结肠粘膜上皮细胞也可吸收少量电解质与水),通过结肠、直肠和肛门的协调运动排出粪便。胃肠功能障碍时,就会出现呕吐、腹泻、腹痛、腹胀和便秘等征象。因此,凡出现上述症状可视为胃肠功能障碍。其病因很广,不仅与胃肠动力功能紊乱,胃、肠、肝、胆、胰等任一脏器疾病有关,还受中枢神经系统、肠神经系统、呼吸系统、循环系统、血液系统、内分泌以及免疫系统等影响。胃肠功能障碍与肠道菌群失调也有关联,本文予以重点讨论。
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营养肉汤菌块形成试验初查肠集聚性大肠杆菌
EAggEC实质上是从EPEC菌群中分出的一类新致腹泻大肠杆菌,其重要特征是形成网状菌毛,能粘附于小肠粘膜上皮细胞,在其表面大量繁殖而引起微绒毛病变.由于在体外,与HEP-2或Hela细胞的共培养中,对这两种细胞形成特征性聚集性粘附,从而对其作出检测诊断.
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P-糖蛋白介导的药物疗效和毒性改变
1970年Bielder首次提出多药耐药(multidrug resistance, MDR)的概念,1986年Chen将MDR基因克隆,自此MDR研究得到广泛开展.MDR基因在人类有两种:MDR1和MDR2,其中前者起主导作用,与肿瘤的多药耐药有关.人类MDR基因位于第7号染色体长臂21区,含有28个外显子,全长4.5 kb,编码1280个氨基酸多肽,经糖基化后形成170 KD的P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp).P-gp是一ATP依赖型外向转运蛋白,属ATP结合盒(ATP binding cassette, ABC)超家族,由2个重复分子组成,每一分子包括6个跨膜的极度疏水区和一个包含高度保守的ATP结合域的亲水区.P-gp依赖ATP供能,排出细胞内药物或毒物.人类P-gp不仅存在于肿瘤细胞,而且在某些正常组织和屏障组织中也有表达.P-gp主要定位在小肠粘膜上皮细胞和胎盘滋养层细胞的刷状缘、肝小管和肾近曲小管的管腔面、脑血管内皮细胞血管面,参与药物的吸收、分布和排泄等过程.P-gp活性可经诱导或抑制,其底物、抑制剂及诱导剂在常用药物中普遍存在,介导多种药物的相互作用.
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谷氨酰胺与重症急性胰腺炎
谷氨酰胺(Glutamine,Gln)是体内含量丰富的游离氨基酸,它是小肠粘膜上皮细胞及所有快速增生细胞特别是免疫细胞的能源物质,被认为是机体在应激状态下的"条件必需氨基酸".