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胰腺癌细胞膜平衡型核苷转运载体和集中型核苷转运载体的检测
目的:检测胰腺癌细胞膜上Na+非依赖的平衡型核苷转运载体(ENT)和Na+依赖性的集中型核苷转运载体(CNT),并对ENT进行定量检测.方法:将胰腺癌细胞株(Panc-1)在含潘生丁(100 μmol/L)的培养基中分别温育8,15,60,120 min,收集细胞用乙腈裂解,荧光分光光度计测定细胞悬液中潘生丁的荧光强度,依据平行悬液中的细胞数量计算出单个细胞表面ENT的数量;再将Panc-1分别在含5-氟尿嘧啶(5-FU)和5-FU+潘生丁两种培养基中分别温育15,30,60,120,240 min,毛细管区带电泳法测定5-FU含量;根据平行悬液中的细胞数量和单细胞体积计算单细胞中5-FU的浓度,间接判定细胞膜上是否存在CNT载体.结果:Panc-1在含潘生丁的培养基温育8 min后即能检测到细胞的荧光强度,15 min达高峰20.2×10-19 mol;借助潘生丁测得单个细胞表面有1.25×105个ENT.用潘生丁阻断ENT后,5-FU仍可被转运入胰腺癌细胞中,且细胞内的5-FU高浓度达到(138.3±9.77) mg/L,明显高于培养基中5-FU的浓度(P=0.011).结论:与潘生丁结合后,通过荧光法可以定量检测细胞表面的ENT;通过阻断ENT并测定细胞中5-FU浓度,可以判断胰腺癌细胞膜上存在CNT,从而对合理应用化疗药物,提高化疗效果提供依据.
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南瓜蛋白对人胰腺癌细胞系PANC-1的细胞毒性及化疗增敏作用
目的 观察南瓜蛋白(CUS)对人胰腺癌细胞系PANC-1的细胞毒性和化疗增敏作用.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,观察不同浓度(量效)的CUS及作用不同时间(时效)对胰腺癌细胞PANC-1的细胞毒性;采用Chou Talalay联合指数法判断CUS增加胰腺癌细胞对吉西他滨(GEM)的化疗敏感性.结果 CUS对胰腺癌PANC-1细胞具有显著的增殖抑制作用,0.3125,0.625,1.25,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0,80.0 μg/mL的CUS作用于胰腺癌细胞24 h,其抑制率分别为9.16%,11.9%,14.4%,20.2%,32.0%,36.4%,44.1%,50.3%和58.6%,呈现明显的剂量依赖性;随着作用时间的延长,其抑制率明显增加,24,48,72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为40.24,8.24,1.17μg/mL,呈现明显的时间依赖性.两药在不同效应时各自所需浓度之间相互作用均为协同作用(CI<1),单吉西他滨用于胰腺癌细胞的IC50为36.76 nmol/L,CUS与其合用时的IC50为12.14 nmol/L,合用比单用时吉西他滨的剂量减少67.0%.结论 CUS对胰腺癌的细胞毒性作用呈明显的剂量依赖性和时间依赖性,与吉西他滨联合使用可增加其细胞毒作用,起到化疗增敏效应.
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反义缺氧诱导因子-1α对胰腺癌细胞BxPC-3化疗敏感性的影响
目的观察反义缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对胰腺癌细胞BxPC-3化疗敏感性的影响.方法实验分组:(1)缺氧条件下(0.5% O2)体外培养4h,未转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3细胞设为缺氧对照组;(2)常氧条件下体外培养,未转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3 细胞设为常氧对照组;(3)缺氧条件下(0.5% O2)体外培养4h,稳定转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3细胞设为实验组.采用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)检测各组的HIF-1α和survivin表达情况. 流式细胞术和MTT比色法检测不同剂量的化疗药物(5-氟尿嘧啶、阿霉素、吉西他宾)对各组的凋亡率和生长抑制率的影响. 结果实验组HIF-1α和survivin的表达明显降低 (P<0.05),与对照组相比,实验组的凋亡率、抑制率与剂量成正比,高剂量引起高抑制(P<0.05). 结论反义HIF-1α可能通过阻断survivin的表达而增强胰腺癌对化疗的敏感性.据此可望通过阻断HIF-1α的表达为胰腺癌基因治疗提供一种新途径.
关键词： 胰腺肿瘤/药物疗法 反义缺氧诱导因子-1α 化疗敏感性 基因疗法 -
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的抗胰腺癌细胞的作用
目的 探讨腺病毒介导的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因对人胰腺癌株Panc-1细胞的抑制作用及其机制.方法 利用腺病毒载体Ad-TRAIL将人类TRAIL全长cDNA转染导入Panc-1细胞.分别利用RT-PCR和Western blot检测TRAIL在mRNA水平及蛋白水平的表达.利用MTT法测定细胞增殖活性及TRAIL基因的旁观效应.利用流式细胞仪检测胰腺癌细胞的凋亡率,并用Western blot检测procaspase-8和procaspase-3蛋白的表达.结果 Panc-1细胞感染Ad-TRAIL腺病毒后,可稳定地高表达TRAIL.Ad-TRAIL能显著抑制Panc-1细胞的生长.高表达TRAIL的转染细胞能通过旁观效应导致未转染细胞的生长抑制.Ad-TRAIL实验组的凋亡率显著高于对照组(P＜0.01),且Ad-TRAIL能使procaspase-8和procaapase-3蛋白表达下降.结论 Ad-TRAIL对胰腺癌Panc-1细胞具有明显的抑制作用,其机制可能与促凋亡和旁观效应有关.
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RNA干扰抑制胰腺癌细胞XIAP表达对化疗敏感性的影响
目的 探讨运用载体介导的RNA干扰技术对X-连锁的凋亡抑制蛋白的抑制效率,以及观察抑制XIAP后胰腺癌细胞对化疗药物敏感性的变化.方法 应用PBSHHI质粒构建针对XIAP的RNA干扰载体,转染胰腺癌细胞系SW1990;用RT-PCR和Westem blot检测XIAP的抑制效率,以gemcitabine处理细胞,流式细胞仪和荧光显微镜观察细胞凋亡的变化;分析XIAP的表达与细胞凋亡之间的关系.结果 成功构建4个XIAP的RNA干扰载体,其中2个载体对XIAP的瞬时抑制效率达50%以上.XIAP被抑制后,细胞对化疗药物诱导的凋亡敏感性增强(P＜0.05),XIAP的表达水平与细胞的凋亡指数之间呈负相关性(r=-0.809,P＜0.05).结论 运用针对XIAP的RNA干扰载体可以有效地抑制XIAP的表达,提高胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性.
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氟尿嘧啶与生长抑素受体基因联合治疗鼠胰腺癌移植瘤的研究
目的 观察生长抑素二型受体(SSTR2)基因体内转染后裸鼠胰腺癌移植瘤对5-氟尿嘧啶(5-FU)的反应,并探讨其可能机制.方法 将人胰腺癌细胞株panc-1种植于裸鼠背部皮下形成胰腺癌移植瘤模型.成模后动物随机分成4组(每组6只);Ⅰ组为对照组;Ⅱ组为腹腔注射5-FU治疗组;Ⅲ组为瘤内注射pCMV-6C-SSTR2-脂质体转染SSTR2基因治疗组;Ⅳ组为基因治疗+5-FU治疗组.观察肿瘤生长速度,测量瘤体大小及重量.用免疫组织化学方法和免疫印迹技术(Westernblot)检测转染效率;用凋亡原位检测方法(Tunel)检测胰腺癌细胞的凋亡率.结果 体内转染后SSTR2可重新表达.5-FU和SSTR2基因联合治疗(Ⅳ)组肿瘤生长速度显著慢于单独基因治疗(Ⅲ)组及单独5-FU治疗(Ⅱ)组和空白对照(Ⅰ)组(P＜0.01);终肿瘤大小,重量也显著小于其他3组(均P＜0.01),而癌细胞凋亡率显著高于其他3组(均P＜0.01).结论 SSTR2重新表达后可增强胰腺癌细胞对化疗药物5-FU的敏感性,联合5-FU和SSTR2基因治疗可望成为治疗胰腺癌新的途径.
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5-氟尿嘧啶缓释剂瘤内注射治疗胰腺癌的实验研究和临床研究
目的观察5-氟尿嘧啶(5-FU)缓释剂对荷胰腺癌裸鼠肿瘤细胞及胰腺癌患者血清肿瘤标记物和细胞免疫的影响.方法 (1)5-FU缓释剂的体外释放实验和体外抑瘤实验:测定浸出液药物的浓度,计算释放量;检测其浸出液对人胰腺癌细胞株PC3的抑制作用.(2)将荷胰腺癌细胞株PC3裸鼠60只,随机分成静脉对照组(A组)、5-FU静注组(B组)、基质植入组(C组)、大剂量5-FU缓释剂植入组(D组)和小剂量5-FU缓释剂植入组(E组).治疗前及治疗后14 d测肿瘤大小.治疗2周后观察肿瘤组织学变化.免疫组化法测定bcl-2和Bax的蛋白表达水平;TUNEL法检测凋亡指数(AI).(3)手术探查不能切除之胰腺癌69例随机分成3组.将5-FU缓释剂瘤内植入治疗组(治疗组)、术后行5-FU静脉化疗组(化疗组)和对照组.分别于术前1d和术后第14天采血,测定各组血清中NK细胞,T细胞亚群和CEA,CA50,CA19-9,CA125,CA242血清肿瘤标记物水平.结果 (1)5 mg 5-FU缓释剂第1天释放量大,为0.85 mg,第3天为0.45 mg,其后在0.25 mg水平维持稳定的缓慢释放;释放时间长达14 d以上.(2)5-FU缓释剂第1天的浸出液对人胰腺癌细胞株PC-3的抑制率达60.27%,第3天为34.25%,以后稳定在25.00%左右.5-FU缓释剂瘤内注射治疗组裸鼠移植瘤生长速度减慢,bcl-2基因表达明显低于其他各组,而Bax基因表达明显高于其他各组,肿瘤细胞的AI明显高于其他各组.D组和E组肿瘤组织中炎症反应和血管内膜增厚程度明显高于其他各组.术后治疗组CD4+/ CD8+和 NK细胞水平高于化疗组,而血清中上述5种肿瘤标记物低于对照组和化疗组.结论 5-FU缓释剂能在2周内在体外较稳定地持续释放,对人胰腺癌细胞株PC3有持续抑制作用.该剂瘤内注射可明显抑制荷胰腺癌瘤裸鼠瘤体的生长,其作用机制与药物在肿瘤组织中引起的炎症反应和血管内膜增厚等因素有关;并可能与诱导肿瘤细胞的凋亡有关.该剂植入患者胰腺癌实体内,能明显降低5种血清肿瘤标记物水平,同时对患者的细胞免疫功能影响较小,5-FU缓释剂可望成为治疗不能切除之胰腺癌的较好的制剂.
关键词： 胰腺肿瘤/药物疗法 氟尿嘧啶/治疗应用 氟尿嘧啶/投药和剂量 -
奥曲肽对胰腺癌细胞转染SST2后的作用
目的将生长抑素二型受体(somatostatin receptor type 2,SST 2)基因转染至胰腺癌细胞株PC-3细胞,探索奥曲肽对阳性表达SST 2的PC-3细胞凋亡影响.方法采用脂质体(Liposome)将SST 2基因转染至PC-3细胞,免疫组织化学染色检测其转染效果.MTT比色法及流式细胞术检测不同浓度梯度奥曲肽对PC-3细胞转染SST 2基因前后凋亡的影响.结果胰腺癌细胞转染SST 2后,不同浓度奥曲肽(0.2,0.4,0.8μg/ml)杀伤已转染SST 2的PC-3细胞的能力较杀伤未转染SST 2的PC-3细胞的能力均有明显增强(均P＜0.05).结论生长抑素用于治疗PC-3细胞效果不佳可能与SST 2下调有关,转染SST 2后可增加奥曲肽对PC-3细胞的杀伤能力,这为临床利用SST 2基因转染加生长抑素类似物治疗胰腺癌提供了实验基础.
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区域性化疗在胰腺癌中的应用
由于胰腺癌自身的生物学特征,手术效果不佳,对放疗、化疗不敏感,耐药性强,目前尚缺乏明显有效的治疗手段.系统性化疗对胰腺癌的效果有限,以5-FU为主多种方案的反应率均不超过20%,中位生存期仅为6个月,除吉西他滨以外其他药物并不证明更有效.而区域性化疗目前显示出其在反应率、生存期、改善症状等多方面的优势.
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生长抑素缓解中晚期胰腺癌动脉灌注化疗不良反应的临床研究
目的 观察生长抑素在中晚期胰腺癌患者动脉灌注治疗中的临床疗效.方法 36例中晚期胰腺癌患者按随机数字表法分两组,对照组16例行动脉灌注化疗,观察组20例在对照组常规治疗的基础上应用生长抑素.治疗结束后第2天通过酶联免疫吸附法(ELISA法)检测受试者外周血中的细胞因子白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)的表达水平和血、尿淀粉酶变化.利用患者视觉模拟评分法(VAS)观察受试者的疼痛反应情况,同时观察胃肠道反应.采用卡氏功能状态评分标准(KPS评分法)对受试者进行行为能力评分.结果 治疗结束后,观察组患者IL-8、TNF-α水平低于对照组,hs-CRP水平高于对照组,血、尿淀粉酶水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).观察组腹痛、胃肠道反应及胰腺炎发生率明显少于对照组,VAS评分明显低于对照组,KPS评分明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 动脉灌注生长抑素可明显降低患者腹痛及胃肠道反应,减轻胰腺组织缺血及水肿,从而降低动脉灌注术后急性胰腺炎发生率.
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蜈蚣提取液对大鼠胰腺癌治疗作用的研究
目的 探讨蜈蚣提取液对大鼠胰腺癌的治疗作用.方法 90只SD大鼠按随机数字表法分为A、B、C三组,将二甲基苯并蒽(DMBA)直接置入到大鼠胰腺被膜下胰腺实质内,建立胰腺癌模型.A组每周灌服蜈蚣提取液一次,连续灌服5个月;B组每周腹腔注射曲古霉素(TSA)一次,连续5个月;C组不做干预饲养5个月,观察三组SD大鼠胰腺肿瘤的发生及生长情况,并进行χ2及秩和检验分析.结果 A组与B组比较胰腺肿瘤的发生率差异无统计学意义(24.1% vs 25.0%,P＞0.9),A组、B组分别与C组比较差异有统计学意义(24.1%、25.0% vs 51.7%,P＜0.05);A组与B组的肿瘤大小比较差异无统计学意义(P＞0.05),而A、B两组分别与C组的肿瘤大小相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 蜈蚣提取液能抑制SD大鼠胰腺癌的发生和生长.
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三维适形放疗联合热化疗治疗局部晚期胰腺癌的临床观察
目的 评价三维适形放疗联合热化疗对局部晚期胰腺癌的临床疗效.方法 将2008年6月至2011年6月间本院收治的70例局部晚期胰腺癌患者分为两组:单纯放疗组30例仅采用单纯放疗,综合治疗组40例在放疗同时及以后给予热化疗.放疗采用三维适形放疗,90％ ～ 95％等剂量曲线,单次剂量1.8 ～2.0 Gy,总放射剂量50 ～70 Gy;热化疗自三维适形放疗开始后同步进行,热疗时维持温度41.5 ～43.5℃,每次1h,每周2次,共6次.热疗中同时给予注射用三氧化二砷20mg、重组改构人肿瘤坏死因子1000万U静脉滴注,进行4～6次,或三维适形放疗同时及治疗后给予吉西他滨0.6 ～1.0 g/m2 d1、8静脉滴注;顺铂20～30mg/m2 d1～3静脉滴注,每28天重复一次,总疗程3～6个周期.结果 治疗后3个月综合治疗组总有效率CR+ PR为70.0％(49/70),其中放疗联合化疗组、放疗联合热化疗组有效率分别为56.5％、88.2％,单纯放疗组有效率56.7％.放疗联合热化疗组有效率与放疗联合化疗组、单纯放疗组相比差异均有统计学意义(x2=4.68,4.98,P＜0.05),而后两者比较差异无统计学意义(P＞0.05).全组1年、2年生存率分别为46.8％和20.3％,其中综合组分别为52.4％和26.7％,单纯放疗组分别为42.5％和16.2％,两组1年、2年生存率比较差异均有统计学意义(x2=14.17,P＜0.05;x2 =9.74,P＜0.05),治疗及随访期间未见穿孔、大出血、持续高热等严重并发症.结论 三维适形放疗联合热化疗治疗局部晚期胰腺癌患者近期疗效满意,毒副反应可耐受,且能提高患者生存质量及生存期,是治疗局部晚期胰腺癌较好的方法.
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消癌平注射液联合适形调强放疗治疗局部晚期胰腺癌的临床研究
目的 观察消癌平注射液联合适形调强放疗治疗局部晚期胰腺癌的临床疗效.方法 选择局部晚期胰腺癌91例,分为吉西他滨加消癌平注射液联合适形调强放疗组46例(消癌平组)及吉西他滨联合适型调强放疗45例(吉西他滨组).消癌平组:吉西他滨1000mg/m2,d1,d15.28d重复,消癌平注射液60ml,静脉滴入,d1~d15,吉西他滨组:吉西他滨1000mg/m2,d1,d15.28d重复,共4周期.两组均开始时适形调强放疗,Dt50Gy~60Gy.结果 消癌平组有效率54.3%,吉西他滨组有效率51.1%,两组差异无统计学意义(P>0.05).消癌平组和吉西他滨组的6个月生存率分别为76.0%和73.3%(P>0.05);12个月生存率分别为47.8%和44.4%(P>0.05).消癌平组和吉西他滨组临床收益反应(CBR)分别为67.3%和55.6%,两组差异有统计学意义(P<0.05).两组严重不良反应总的发生率分别为13.0%(6/46)和28.9%(13/45),两组间有统计学差异(P<0.05).消癌平组NK细胞活性及CD4/CD8比值治疗后明显高于吉西他滨组(P<0.05).结论 消癌平注射液联合适形调强放疗治疗局部晚期胰腺癌有较好的疗效,能减轻放疗的不良反应,提高生存质量,增强机体免疫功能.
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经动脉灌注盐酸吉西他滨和奥沙利铂治疗中晚期胰腺癌的疗效观察
目的:评价盐酸吉西他滨、奥沙利铂经动脉灌注化疗对中晚期胰腺癌的临床疗效.方法:19例患者均采用Seldinger氏技术,动脉插管后选择性在肿瘤供血动脉处灌注盐酸吉西他滨和奥沙利铂,治疗间隔为3～4w,观察肿瘤改善情况及临床受益反应(Clinical benefit response, CBR).结果:PR 2例(10.5%),NC 6例(31.6%),SD 6例(31.6%),5例无法评价.Kaplan-Meier法计算6个月和9个月累积生存率分别为56.2 %和31.4%.频数分布法计算中位生存期为6.5个月,中位进展期为3.1个月.临床受益率为38.2%.结论:经动脉内灌注盐酸吉西他滨、奥沙利铂是治疗胰腺癌的安全有效方法,具有良好的临床受益反应.
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2-脱氧葡萄糖联合顺铂对胰腺癌细胞系的体外抑制作用
目的:探讨糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-DG)联合广谱抗肿瘤药物顺铂对不同种系胰腺癌细胞系在不同情况下的体外抑制作用以及其机制.方法:使用2-DG以及联合顺铂对2种胰腺癌细胞系(Mia,Panc-1)实施生长干预,进行2-DG对不同细胞系抑制作用的MTT试验,及对细胞系进行凋亡的相关检测.结果:2-DG对不同种系的胰腺癌细胞抑制以及凋亡作用效果不同,但都呈时间反应性增加;2-DG联合顺铂较单药作用对细胞的抑制作用更为明显.结论:不同种系胰腺癌细胞系对2-DG都有一定的时间依赖性抑制作用,机制可能为2-DG对细胞凋亡的促进作用,2-DG在体外实验中体现一定的抗肿瘤活性以及联合化疗的活性,可能在胰腺癌的辅助化疗以及新辅助化疗等治疗中起到一定的作用.
