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孕产妇四种病原体感染血清学筛查的研究
目的探讨正常孕妇弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒(Torch)感染血清学筛查的意义,妊娠伴胚胎停止发育及产史不良与Torch感染的关系.方法间接荧光法检测血清Torch-IgG抗体和酶免疫捕获法检测Torch-IgM抗体.303例孕妇、27例妊娠伴胚胎停育及192例产史不良妇女进行了弓形虫血清学筛查,进行风疹病毒血清学筛查的分别278,30和214例,巨细胞病毒(CMV)筛查的分别为280,31和228例,单纯疱疹病毒(HSV)筛查的分别为236,25和168例.结果孕妇、妊娠伴胚胎停育和产史不良妇女血清弓形虫IgG/IgM抗体阳性率分别为2.3%/0.33%, 0/0, 1.04%/0;风疹病毒IgG/IgM抗体阳性率分别为93.2%/1.4%, 96.7%/0, 98.6%/0;CMV-IgG/IgM 阳性率分别为88.6%/1.1%, 87.1%/0, 91.2%/0;HSV-IgG/IgM 阳性率分别为93.2%/1.3%, 88.0%/0, 94.6%/0.外院Torch-IgM抗体阳性的31份孕妇血清标本仅确认1份为真正阳性.结论孕妇弓形虫感染率低,常规筛查的价值需要探讨.妊娠前确定风疹的免疫状态对孕妇风疹筛查意义重大.孕妇CMV血清学筛查方案需要进一步研究.初筛Torch-IgM抗体阳性的血清标本应当复查和确认,以避免假阳性.未发现妊娠伴胚胎停止发育以及产史不良与Torch感染存在关联.
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小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎中基质金属蛋白酶的表达及活性研究
目的探讨角膜感染Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)后基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制剂(TIMPs)在角膜中的分布及酶活性表达.方法 BALB/c小鼠眼角膜接种HSV-1(KOS株)以诱发单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK).分别收集正常眼球及感染后第2、7、14及28天的感染眼球.应用免疫组织化学法和Western blot方法检测MMP-2、-8、-9及TIMP-1、-2在角膜组织中的表达,并应用酶谱(Zymography)技术检测MMPs的酶活性.结果感染后第2天,感染眼的MMP-2、-9及TIMP-1、-2表达比未感染眼增加且表达主要位于浅表基质层及上皮下的炎性细胞中.感染后第14和28天可见坏死性角膜炎及角膜溃疡形成,同时角膜基质和浸润的炎性细胞中尤其溃疡处,可见MMP-2、-9及TIMP-1、-2表达显著增加.溃疡区域有大量MMP-8阳性染色的中性粒细胞.角膜感染HSV-1后,明胶酶(MMP-2、-9)活性和胶原酶(MMP-8)活性均增强.结论HSV-1角膜感染后,由角膜细胞和浸润的炎性细胞分泌产生的MMPs可能对上皮性角膜炎与溃疡形成过程起重要的促进作用.MMPs与TIMPs的相互作用可能对HSK的坏死性病变起重要调节作用.(中华眼科杂志,2004,40:395-399)
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联合应用自杀基因/前药系统和放疗对人骨肉瘤细胞的杀伤作用
目的观察联合应用自杀基因/前药系统和放疗对人骨肉瘤细胞的杀伤作用.方法以大肠杆菌JM107为模板,PCR扩增出CD基因,测序并将其插入真核表达质粒pEGFP-C1中,构建EGFPCD融合基因.用DOTAP将分别含有CD和HSV-TK的两种质粒pEGFP-CD和tgCMVHyTK同时导入人骨肉瘤细胞SAOS-2,经G418和潮霉素B共同筛选后,于荧光显微镜下观察阳性克隆细胞株SAOS-2CDTK.运用PCR和Northern blot方法检测SAOS-2CDTK细胞中的CD和HSV-TK基因及其表达.用MTT法检测单独或联合应用两种前药(GCV、5-FC)对SAOS-2CDTK细胞的存活率、"旁观者效应"以及细胞对放疗敏感性的影响.结果测序图和酶切鉴定证明CD基因的克隆和含EGFPCD融合基因的重组真核表达质粒pEGFP-CD的构建是成功的.荧光显微镜观察SAOS-2CDTK细胞胞质呈现绿色荧光.PCR和Northern blot分析均表明SAOS-2CDTK细胞中含有CD和HSV-TK两个基因,并获得mRNA水平的表达.与单一前药相比,联合应用两种前药时,SAOS-2CDTK细胞的存活率下降,"旁观者效应"及细胞对放疗的敏感性增强.结论联合应用两种自杀基因/前药系统和放疗可增强细胞毒作用,为骨肉瘤的治疗提供了一条新的有效途径.
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金丝桃素和盐酸赖氨酸抗疱疹病毒作用体外试验研究
目的:通过评价金丝桃素、盐酸赖氨酸体外抗疱疹病毒活性,为进一步研究疱疹后遗神经痛(PHN)以及继发抑郁的治疗提供更多理论支持方法:采用对病毒所致细胞病变(CPE)抑制法,观察金丝桃素和盐酸赖氨酸对Vero细胞和2BS细胞的细胞毒性,以及对单纯疱疹病毒I型(HSV-I)和水痘-带状疱疹病毒(VZV)的抗病毒活性.结果:金丝桃素对HSV-1和VZV抑制的小有效浓度和治疗指数相同,分别为0.39 mg/L和32;盐酸赖氨酸对HSV-1和VZV抑制的小有效浓度都是19.5 mg/L,治疗指数分别为64和129.结论:金丝桃素和盐酸赖氨酸在体外具有抗HSV-1和VZV作用.
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RV-HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗子宫颈癌的体内实验研究
目的探讨HSV-TK/GCV自杀基因系统对小鼠子宫颈癌细胞系Hela形成肿瘤的体内杀伤作用及其产生的旁观者效应.方法体内实验分Hela对照组、Hela/TK+Hela(1∶9)组、Hela/TK+Hela(1∶1)组和Hela/TK组.分别按实验组别要求接种3.0×106细胞/只于BALB/C小鼠的右腋窝皮下,观察各组肿瘤形成及肿瘤治疗情况.治疗结束后将标本制成石蜡切片和超薄切片进行病理学分析,RT-PCR检测HSV-TK基因在肿瘤组织中的表达情况.统计学分析采用SPSS软件进行完全随机的方差分析(ANOVA).结果丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)可明显抑制Hela/TK细胞在BALB/C小鼠体内的肿瘤形成.经GCV治疗后,Hela/TK+Hela(1∶9)、Hela/TK+Hela(1∶1)组和Hela/TK组分别较对照组肿瘤体积缩小约11.1%、30.6%和47.2%;RT-PCR检测HSV-TK基因在肿瘤组织中有表达.实验组肿瘤组织与对照组相比存在明显的病理学改变.结论 HSV-TK/GCV自杀基因系统在体内对子宫颈癌细胞有杀伤作用,且存在明显的旁观者效应.
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HSV-tk/GCV基因治疗在卵巢癌中的研究进展
卵巢癌自杀基因治疗多采用HSV-tk/GCV系统.该系统的旁观者效应可在一定程度上弥补基因转染率低的缺陷,通过缝隙连接胞间通信(GJIC)增强剂可提高该系统的旁观者效应,通过选择构建高效能载体系统、应用靶向性调控机制或与其他方法联合治疗可增强疗效.该系统治疗卵巢癌具有广阔的发展前景.
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HSV-tk/GCV系统治疗恶性肿瘤研究进展
自杀基因治疗恶性肿瘤是国内外研究的热点.因其独有的旁观者效应,可克服基因转导率低的缺陷,并可与其他方法联合应用,通过靶向调控机制增强疗效,是较为有效且具有临床应用前景的基因疗法.现综述近年来HSV-tk/GCV治疗恶性肿瘤研究进展.
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单纯疱疹病毒性脑炎的临床分析(附9例报告)
病毒性脑炎是中枢神经系统常见的感染性疾病,其中2%～9%是由Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV1)所致,即单纯疱疹病毒性脑炎(HSE).病理上又称急性出血性坏死性脑炎,病情多凶险,临床表现早期无特异性,易被误诊,病死率高达70%[1].近年来诊断和治疗手段的提高,改善了预后.我院以1995年2月至1999年5月收治了9例HSE,现报道如下:
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PCR-RFLP法对单纯疱疹病毒感染诊断和分型的研究
目的建立单纯疱疹病毒的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测法,为生殖器疱疹的诊断及分型提供可靠而特异的方法.方法以特异性引物法为对照,用一对单纯疱疹病毒外层通用引物扩增出长度为438bp的片断,并进行酶切以分型.结果 PCR-RFLP法可特异性检测出单纯疱疹病毒并进行分型,同特异性引物法比较,两种方法无显著性差异.结论 PCR-RFLP法是一种准确、特异的对单纯疱疹病毒感染进行诊断和分型的方法.
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HSV-2 333株在Vero细胞中持续感染及增殖特性研究
[目的]探讨单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)在非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)中感染及增殖的特性.[方法]将HSV-2接种于Vero细胞中培养和传代,制备电镜样品观察,于不同时间收获病毒液并测毒力,进行pH值、血清以及在Vero细胞传代、不同感染复数等不同培养条件的摸索.[结果]pH值、残留牛血清是HSV-2在Vero细胞培养的影响因素,佳收毒时间为36～72 h.在Vero细胞上培养病毒3～5代,病毒毒力较高.[结论]建立了HSV-2在Vero细胞上培养增殖的初步方法,为下一步建立HSV-2的潜伏与激发细胞模型打下基础.
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长沙地区434例新生儿脐血HSV血清学检查调查分析
[目的]调查长沙地区新生儿单纯疱疹病毒(HSV)先天感染的发病率和意义.[方法]采用ELISA方法检测长沙地区四所医院同一时间段内出生的434例新生儿脐血中HSV-1和HSV-2的IgG和IgM抗体,并与其出生情况作对比分析.[结果]434名新生儿中,HSV血清阳性率5.76%,均为IgG 阳性,其中HSV1-IgG阳性率3.92%;HSV2-IgG阳性率1.84%.同时发现 母亲有多次妊娠史的新生儿HSV血清阳性率比孕1产1的新生儿高;出生时Apgar评分＜7分的新生儿HSV2-IgG血清阳性率比7～10分者高.[结论]长沙地区新生儿脐血HSV血清阳性率为5.76%.
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单纯疱疹病毒性角膜炎潜伏期HSV-1 LATs功能研究
[目的]研究单纯疱疹病毒I型(Iaerpes simplex virus type 1,HSV-1)感染兔眼球以后潜伏相关转录体(Latency associated transeript,LATs)在兔角膜中的表达,探讨LATs的表达与单纯疱疹性角膜交之间的关系.[方法]将25μL滴度为1×106 U/mL HSV-l stockek病毒株接种于健康新西兰白兔的角膜上建立单纯疱疹性角膜炎动物模型,分别于角膜接种病毒后的d10、d60、d110取角膜片及患侧三叉神经节作PCR检测,分析潜伏期内HSV-1基因表达模式.[结果]未感染HSV-1的兔角膜中不表达LATs,HSv-1感染兔的早期即可诱导LATs在角膜中的表达,并且表达持续存在.[结论]HSV-1上调LATs在兔角膜中的表达,LATs在兔角膜中的表达与角膜炎的发生和发展密切相关.
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宫颈癌与病毒感染的关系(附32例报告)
为观察宫颈癌与病毒感染的关系,作者对32例宫颈癌患者中乳头状瘤病毒16,18(HPV 16,18)、单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)、人巨细胞病毒(HCMV)的感染进行了观测.
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外用板兰根注射液对单纯疱疹的疗效观察
单纯疱疹,是纯疱疹病毒引起的常见病毒性皮肤病,好发于皮肤粘膜交界处.以成簇水疱、伴有灼热、瘙痒或绷紧感、易复发等为特点,一般病程约10天左右.1998年以来,我们采用板兰根注射液涂搽患处,共治疗30例,获得较好的疗效,现报告如下:
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干扰素联合抗病毒药治疗单纯泡疹病毒性角膜炎
单纯泡疹病毒性角膜炎(SHK)是常见而严重的眼病,又是致盲原因之一.目前对SHK的治疗以化学合成的核苷类抗病毒药物为主,如0.1%无环鸟苷(ACV)、0.1%泡疹净(IDU)、阿昔诺讳等,通过干扰病毒DNA代谢达到抑制病毒复制的目的,但由于此类药物易产生耐药性,临床运用效果欠佳.文献报道用干扰素(INF)联合抗病毒药物治疗SHK已获满意效果[1].现将我院1994-1999年治疗52只眼的疗效观察结果报告如下.
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HSV-tk/GCV系统对高转移性粘液表皮样癌细胞系M3SP2的抑制作用
目的: 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统对高转移性粘液表皮样癌细胞系M3SP2的作用.方法: 采用阳离子脂质体介导法将含HSV-tk基因复制缺陷型逆转录病毒载体(pBabe/tk)导入M3SP2细胞,嘌呤霉素筛选抗性克隆.用MTT比色法测定HSV-tk/GCV对tk阳性M3SP2细胞(M3SP2/tk)生长的影响及旁观者效应;用流式细胞术分析HSV-tk/GCV对M3SP2/tk细胞周期的影响.结果: M3SP2/tk细胞对GCV的敏感性显著增加,细胞生长受到抑制,在GCV(0.1～1000 mg *L-1)作用6 d时,M3SP2/tk细胞存活率为62.3%-14.5%, IC50值为0.68 mg*L-1,而转空载体细胞和亲本细胞IC50值大于1000 mg*L-1.M3SP2/tk细胞在GCV(1～10 mg *L-1)作用48 h 时,明显阻滞于S期.10% tk阳性的M3SP2/tk细胞与90% tk阴性的亲本细胞M3SP2混合培养, 10 mg*L-1的GCV仍可杀伤54.4%的细胞.M3SP2/tk细胞含GCV (1, 10 mg *L-1)培养上清液仍能影响tk阴性的舌癌细胞系TbpTL的生长.结论: HSV-tk/GCV具有显著抑制涎腺粘液表皮样癌细胞体外生长的作用,其作用机制与细胞周期进程停滞和旁观者效应有关.
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CMV,HSV和TOX感染与先天性心脏病的关系
目的:为了探讨巨细胞病毒(CMV)、弓形体(TOX)和单纯疱疹病毒(HSV)感染与先天性心脏病病因学的关系.方法:收集先天性心脏病心肌组织66份,非先心病心肌组织38份,采用PCR技术进行病原基因的检测.结果:在66例先心病心肌组织中检测到CMV,HSV,TOX的阳性率分别为26%,4%和15%,而38例对照组中阳性率分别为21%,3%和3%,TOX在两组中检测有显著性差异(P<0.05),而CMV,HSV在两组中无统计学意义(P>0.05).结论:我们首次应用PCR技术在先心病的心脏组织中检测到了巨细胞病毒、弓形体和单纯疱疹病毒基因,提示TOX的感染与先心病的发病关系密切,而CMV,HSV的感染与先心病间无关.
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单克隆抗体间接免疫荧光试验检测生殖器单纯疱疹病毒感染
目的:评价间接免疫荧光试验 (IFA)在生殖器疱疹(GH)诊断中的应用价值.方法:采用以单纯疱疹病毒(HSV)型共同性单克隆抗体为夹心的IFA方法,检测了120例临床诊断为GH患者皮疹中的HSV,并与病毒培养法进行比较.结果:IFA检测HSV的总阳性率为85.8%,高于病毒培养法的阳性率(70.8%,χ2=12.04,P<0.01).两种方法检测GH患者皮肤水疱内的HSV阳性率分别为93.3%和90.0%,无明显差异(χ2=1.96,P>0.05);而检测糜烂和结痂性皮疹内的HSV时,IFA 的阳性率分别为92.6%和69.4%,均分别高于病毒培养法(75.9%,χ2=5.82,P<0.05;47.2%,χ2=14.17,P<0.01).结论:IFA 法具有简单、快速、敏感性高的优点,适用于检测GH患者皮疹内HSV,有临床实用价值.
