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不同DNA聚合酶对HBV PCR产物保真度的影响
PCR已广泛用于HBV感染标志物病毒DNA的定量检测~([1]),对PCR产物进行测序可分析HBV基因点突变,如检测拉夫米定等药物治疗诱导的与耐药相关的HBV基因点突变~([2-3]),研究乙型肝炎慢性化与转归的分子机制~([4]),分析基因多位点突变与HBV感染导致的肝细胞癌转移与复发的疾病预后的关系~([5]).PCR在HBV基因多位点突变的检测与研究中起重要作用.
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乙型肝炎病毒全基因组PCR扩增产物的直接测序
目的 建立乙型肝炎病毒全基因组PCR扩增产物直接测序的方法并对序列进行分析.方法 PCR法扩增乙型肝炎病毒全长基因,PCR扩增产物纯化后直接进行DNA序列测定;将已测定序列的PCR扩增产物用上述方法进行再测序以评价该方法的保真性;应用进化树分析及对齐比较等方法分析HBV基因型和YMDD变异情况.结果 20例标本中有18例扩增阳性并得到全长基因组序列;保真性分析表明,本法引起的人为核苷酸突变率约为1‰;序列分析表明,18例标本中有10例为基因型B、8例为基因型C;2例出现耐拉米夫定的YMDD变异,均为基因型C.结论 乙型肝炎病毒全基因组PCR扩增产物直接测序,方法简便,可满足临床和科研的需要.
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3例阿德福韦酯临床耐药患者血清乙型肝炎病毒逆转录酶基因序列分析
抗乙型肝炎病毒(HBV)新药-阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)已于2005年经国家食品药品监督管理局(SFDA)批准在我国上市.临床研究表明,ADV能有效抑制HBV DNA复制,使HBV DNA滴度迅速降低[1-3].但随着ADV的长期应用,目前已发现该药亦存在耐药现象.为了解临床耐药患者血清中HBV逆转录酶(reverse transcriptase,RT)基因变异情况,本研究采用PCR产物直接测序方法对此类患者体内HBV RT区基因序列进行分析.
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实时荧光定量PCR技术研究进展及应用
1 研究进展二十多年前,美国Perkin-Elmer Cetus公司人类遗传研究室Mullis等发明了聚合酶链反应(PCR)技术,这成为20世纪生物医学领域革命性创举与里程碑,使人们梦寐以求的体外无限扩增核酸片段的愿望成为现实.几年后,世界生物实验室中,PCR技术占据了统治地位,并成为分子生物领域的关键技术.大昔特异性PCR产物的生成使许多新的DNA分析方法的使用成为可能,这些分析方法包括下游修饰或互补性产物分析技术.
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实时荧光定量聚合酶链反应技术及其在医学生物监测中的应用
传统聚合酶链反应(PCR)技术在应用中,由于PCR产物需经过琼脂糖凝胶电泳和紫外线检测,产物易污染造成假阳性,且只能做到定性检测.近年来出现的核酸定量PCB技术,尤其是实时荧光定量PCB(real-time fluorescent quantitative PCB,FQ-PCB)技术 [1],实现了PCR由定性到定量的飞跃.
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9年内质粒介导喹诺酮类耐药决定子发生率
近年来,一些导致低水平喹喏酮类药物耐药的质粒介导耐药(PMQR)基因陆续被发现.本研究选取1998-2001年和2005-2006年韩国一所三级医院血标本中分离的261株大肠埃希菌、135株肺炎克雷伯菌和65株阴沟肠杆菌,采用多重PCR方法筛检qnrA、qnrB、qnrC、qnrS、aac(6′)-Ib和qepA 6个PMQR基因,并直接测序,aac(6′)-Ib阳性PCR产物使用BtsCI酶切,以明确aac(6′)-Ib-cr变异体.结果,461株中37株(8%)携带有上述6种PMQR中的1种,其中13株(5%)为大肠埃希菌,13株(10%)为肺炎克雷伯菌,11株(17%)为阴沟肠杆菌.
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几种基因突变模式在测序图中的鉴别
DNA测序技术作为一项成熟的技术已经被广泛应用于生物医学研究及遗传检验等领域,许多研究人员也经常将测序工作交给生物测序公司处理.然而在实际工作中由于缺乏经验,科研人员和研究生们经常会提出各种与测序相关的问题,例如如何鉴别PCR产物直接测序图[1]和TA克隆后测序图[2],如何鉴别点突变与移码突变等.本文针对这些常见问题举例说明.
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长沙地区汉族人群线粒体DNA高变区多样性检测及探讨
目的研究长沙地区汉族人群线粒体DNA序列特征. 方法应用PCR产物直接测序法. 结果线粒体DNA不同区域多态性程度不同,mt-0片段所在的HVI区域多态性高于mt-3所在的HVⅡ区. 结论对于呈单倍体遗传的线粒体DNA,检测目的片段越长,检测的个体数越多,检出的单倍型越多.
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简便快速的PCR产物回收方法
目的分析比较几种PCR产物回收方法的回收效果.方法针对PCR DNA的回收效果及回收特点,采用内皮素(Endothelin)基因PCR反应产物,分别利用本室建立的二种新方法--速冻-快速离心法、凝胶浸泡法和传统方法--玻璃珠试剂盒回收法对PCR产物DNA进行回收,用琼脂糖凝胶电泳鉴定3种方法回收PCR产物的效果.结果发现两种新方法回收DNA带的亮度强,与传统方法相比,差异无显著性(P>0.10).结论说明速冻-快速离心法与凝胶浸泡法不仅具有玻璃珠试剂盒回收PCR 产物的效果,而且经济、方便、可靠,是两种可行的PCR产物回收方法.
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应用十六烷基三甲基溴化铵纯化PCR产物
目的建立应用十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethylammoniumbromide,CTAB)PCR产物纯化的方法.方 法应用CTAB对PCR产物进行选择性沉淀.CTAB与DNA形成复合我1.2mol/LNaCl溶液中溶解,再用乙醇将PCR产物沉淀出来.结果这种方法可以去除PCR产物中引物和小分子dNTP.虽然纯化的产率占现在市场上的一些试剂盒产率的80%,但其成本比较低,仍不失是一种PCR产物纯化的方法.结论利用十六烷基三甲基溴化铵可以用于PCR产物纯化.
关键词: 十六烷基三甲基溴化铵 PCR产物 纯化 -
PCR产物酶联免疫检测法在临床检验中应用效果分析
目的:探究PCR产物酶联免疫检测法检测的临床应用效果.方法:对PCR产物进行微孔板技术、酶联免疫法、PCR杂交联合检测,分析检测结果对临床疾病的诊断价值.结果:PCR产物检测可以诊断结核分枝杆菌、肺炎支原体、人乳头瘤病毒、百日咳杆菌等多种病菌的引起的疾病,在临床疾病诊断中具有重要作用.结论:PCR产物采用酶联免疫检测法检测操作简单,受主观因素影响小,特异性高,稳定性强,具有较高的临床检验价值.
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PCR 产物酶联免疫检测法在临床检验中应用
目的::对 PCR 产物酶联免疫法检测在临床检验中的应用进行分析研究。方法:采用 PCR 产物酶联免疫法对我院收治的乳腺癌患者进行血清蛋白抗体检测的临床资料进行回顾分析。结果:采用 PCR 产物酶联免疫检测出本组76例乳腺癌患者的血清抗P53蛋白抗体阳性率为39.47%,特异性为100%。结论:PCR 产物酶联免疫具有检测快速,诊断特异性较高等优点,值得在临床检验中进行推广应用。
关键词: PCR产物 酶联免疫 临床检验 血清抗P53蛋白抗体