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关节置换术后假体周围感染诊断的研究进展
假体周围感染(PJI)是人工关节置换术后患者的灾难性并发症之一,已经成为关节置换术后翻修的首要原因,目前的实验室和影像学诊断方法各有优缺点,PJI的诊断仍缺乏金标准.红细胞沉降率、C反应蛋白等传统诊断学方法敏感度和特异度不高;白细胞酯酶测定、α-防御素等关节液标记物具有极高的诊断价值,引起越来越多的重视;与血清中相比,关节液中的降钙素原和白细胞介素-6对诊断PJI更具价值;白细胞闪烁扫描、抗粒细胞闪烁扫描和”氟-氟脱氧葡萄糖等影像学技术具有较高的敏感度和特异度,但目前尚无法大规模应用;而二代测序等分子生物学技术能检测到常规细菌培养阴性的病原菌DNA,且不受抗生素使用与否的影响,已成为目前研究的热点.本综述旨在提供更具敏感度和特异度的诊断方法,使人工关节置换术后假体周围感染的患者能够早诊断、早治疗,从而减轻病人的痛苦和降低医疗费用.
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人α-防御素对人内皮细胞ECV304氧化低密度脂蛋白能力的影响及其机制的实验研究
目的 探讨人α-防御素(human α-defensin,HNP)-1对人内皮细胞氧化低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)的影响及其可能机制.方法 实验设HNP-1转染组(HNP-1转染的内皮细胞ECV304),siRNA干扰组(siRNA干扰抑制HNP-1表达的ECV304)和HNP-1刺激组(10 μg/mlHNP-1刺激的ECV304),并分别设有正常ECV304作为对照组,均经LDL处理3h后检测脂质氧化产物丙二醛(M DA)、蛋白氧化产物PCO(protein carbonyl,PGO)的生成量.分别采用流式细胞仪、荧光显微镜检测经LDL、脂多糖(LPS)、HNP-1预处理的ECV304(分别为LDL组、LPS组、HNP-1刺激组)和过表达HNP-1的ECV304(HNP-1转染组)中氧自由基的生成量,另设正常ECV304作为对照组.结果 (1) MDA和PCO生成量检测结果:HNP-1刺激组、HNP-1转染组MDA生成量均明显高于其相应的对照组[分别为(14.49±1.10)比(9.47±1.18) nmol/mg蛋白和(4.21 ±0.03)比(3.15±0.02)nmol/mg蛋白,P均＜0.05].siRNA干扰组MDA生成量则明显低于其对照组[(3.76±0.48)比(4.54 ±0.28) nmol/mg蛋白,P＜0.05].HNP-1转染组PCO生成量明显高于对照组和siRNA干扰组(P均＜0.C5),且siRNA干扰组较对照组低,但差异无统计学意义.(2)氧自由基水平检测结果:HNP-1刺激组和HNP-1转染组ECV304内氧自由基水平均较LDL组、LPS组及对照组高(P均＜0.05).结论 HNP-1可增强人内皮细胞ECV304氧化LDL的能力,机制可能与提高氧自由基的表达水平有关.
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关节液α防御素-1检测在人工关节感染诊断中的应用价值
目的：探讨关节液α防御素-1（AD-1）检测在人工关节感染（PJI）诊断中的应用价值。方法选取2013年3月至2015年10月福建省内多家三甲医院骨科45例需行人工关节翻修术患者，男性18例，女性27例，平均年龄（60±14）岁。根据美国肌肉骨骼感染学会（ MSIS）诊断标准，纳入标准为全髋及全膝关节置换术后需要进行翻修手术及术后怀疑感染的患者等，排除标准为存在其他身体部位感染病灶等，分为感染组22例，非感染组23例。对45例患者进行关节腔穿刺抽取关节液，采用酶联免疫吸附法（ ELISA ）检测关节液中 AD-1的表达水平。通过受试者工作曲线特征（ROC）曲线计算AD-1、关节液白细胞计数（SF-WBC）、多核比（PMN％）、红细胞沉降率（ESR）、C反应蛋白（ CRP）的敏感性及特异性，χ2检验计算细菌培养的敏感性及特异性。 AD-1与各指标间的敏感性及特异性采用χ2进行比较分析。结果 AD-1诊断PJI的敏感性为86.4％，特异性为91.2％，曲线下面积为0.95。45例患者合并有系统性炎症疾病的患者占31.1％，感染组抽取关节液前有使用过抗生素治疗的患者59％，但AD-1的表达水平并未受到这两项因素的影响。细菌培养、SF-WBC、PMN％、ESR、CRP的敏感性从80％到90.9％，特异性从56.5％到76％。 AD-1诊断PJI的敏感性比细菌培养、PMN％、ESR、CRP高，比SF-WBC低；而AD-1诊断PJI的特异性高于各诊断指标。 AD-1诊断PJI的特异性与PMN％、ESR、CRP比较差异有统计学意义（ P＜0.05），而与细菌培养、SF-WBC比较差异无统计学意义（P＞0.05）；AD-1诊断PJI的敏感性与细菌培养、SF-WBC、PMN％、ESR、CRP比较差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论 AD-1诊断PJI具有较高的敏感性及特异性，可作为诊断PJI的一项潜在诊断指标。
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α防御素在慢性乙型肝炎患者和HBV携带者之间的差异表达
目的 测定慢性乙型肝炎(CHB)患者和HBV携带者体内差异表达的基因,以揭示二者不同的发病机制.方法 采用抑制消减杂交(SSH)技术构建差异表达基因cDNA文库并筛选出差异表达基因α防御素.采集46例CHB和11例HBV携带者外周肝素抗凝血,用实时定量RT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测α防御素在2组患者中mRNA和蛋白水平的差异表达.结果 实时定量RT-PCR显示,α防御素在CHB患者中的表达是在HBV携带者中的1.4倍.ELISA结果显示,血浆α防御素在CHB患者中表达的水平为(216.40±81.25)μg/L,HBV携带者为(156.00±57.26)μg/L,二者比较差异有统计学意义(t=2.23,P<0.05).结论 α防御素在CHB患者中的表达较HBV携带者高,提示其可能参与了CHB的发病机制.
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下生殖道感染患者阴道局部免疫状态的研究
目的 研究下生殖道感染患者阴道局部免疫状态及其与疾病发生的相关性.方法 应用酶联免疫吸附试验测定外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)60例(VVC组)、细菌性阴道病(BV)60例(BV组)、滴虫性阴道炎(TV)40例(TV组)、宫颈人乳头状瘤病毒(HPV)感染60例(HPV组)、宫颈沙眼衣原体(CT)感染60例(CT组)及各组同期60例正常妇女(对照组)的阴道灌洗液辅助性T淋巴细胞(Th细胞)1、2细胞因子水平,其中Th1细胞因子以白细胞介素(IL)2表示,Th2细胞因子以IL-4、5或IL-13表示,并结合临床资料进行分析.BV、TV组患者同时测定趋化因子--IL-8.所有患者进行人防御素5(HD5)的检测.结果 (1)Th1细胞因子:WC、BV、TV、CT组与各自的对照组IL-2水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05).HPV组IL-2水平为(96±33)×10-3 pg/L,HPV对照组为(76±36)×10-3 pg/L,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).(2)Th2细胞因子:VVC、CT组与各自的对照组IL-4水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);BV组与BV对照组IL-5水平比较,差异也无统计学意义(P>0.05);TV组IL-13水平为(42±15)×10-3 pg/L,TV对照组为(30±29)×10-3pg/L,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);HPV组IL-4水平为(103±28)×10-3pg/L,HPV对照组为(36±22)×10-3pg/L,两组比较,差异也有统计学意义(P<0.05).(3)趋化因子:TV组IL-8水平为(5.8±2.7)pg/L,TV对照组为(2.6±2.4)pg/L,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);BV组与BV对照组IL-8水平比较,差异无统计学意义(P>0.05).(4)HD5:VVC、HPV、CT、BV、TV组HD5水平均高于各自对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 (1)阴道上皮的先天免疫因子HD5是下生殖道感染发病过程中的重要因子.(2)IL-13等Th2细胞因子在不同下生殖道感染发病过程中的作用较IL-2可能更为重要.(3)趋化因子IL-8在TV发病过程中可能具有重要的意义.
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基于防御素家族DEFA1/DEFA3基因拷贝数多态性构建重症患者HAP风险预警模型的可行性
目的 评价基于防御素家族DEFA 1/DEFA3基因拷贝数多态性构建重症患者医院获得性肺炎(HAP)风险预警模型的可行性.方法 选择本院ICU内HAP患者(HAP组)77例,并以性别、年龄匹配的非HAP的ICU患者(NHAP组)109例.采集外周血标本提取DNA,采用实时定量PCR法检测DEFA 1/DEFA3基因拷贝数多态性.记录患者来源、人ICU 24 h内气管插管情况、入ICU24 h内高急性生理情况评分、急性生理及慢性健康状况评分、序贯脏器衰竭评分,记录机械通气时间、住院时间、ICU停留时间以及转归.结合DEFA1/DEFA3基因拷贝数与入ICU 24 h内的临床因素(急性生理情况评分与急诊来源),应用logistic回归建立预测模型.应用受试者工作特征曲线评价模型预测效能.结果 HAP组DEFA 1/DEFA3基因拷贝数明显低于NHAP组(P＜0.05).结合DE-FA1/DEFA3基因拷贝数与入ICU 24 h内的临床因素建立的HAP预测模型,其预测HAP的受试者工作特征曲线下面积为0.789(95％可信区间0.724～0.854).结论 防御素家族DEFA1/DEFA3基因拷贝数多态性可用于构建重症患者HAP的风险预警模型.
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消化性溃疡患者血清α防御素,visfatin,IL-17的表达及意义
目的:分析消化性溃疡患者血清α防御素(alpha defensin,DEFA)、内脂素(visfatin),IL-17的表达及意义.方法:选择重庆市长寿区人民医院2016年3月至2018年3月收治的102例消化性溃疡患者,按疾病类型、幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)情况、病情程度分为不同组别,并同期选择95例健康体检者做为对照组.比较各组血清DEFA,visfatin,IL-17水平,并分析其相关性和诊断效能.结果:消化性溃疡组血清DEFA水平低于对照组,血清visfatin,IL-17水平高于对照组(P＜0.05).复合性溃疡组血清DEFA水平低于胃溃疡组及十二指肠溃疡组,血清visfatin,IL-17水平高于胃溃疡组及十二指肠溃疡组(P＜0.05).消化性溃疡Hp阴性组血清DEFA水平高于HP Ⅰ型组及HP Ⅱ型组(P＜0.05);血清visfatin,IL-17水平高于HP高型组及HP及型组(P＜0.05).消化性溃疡患者活动期血清DEFA低于愈合期且低于疤痕期,visfatin,IL-17水平高于愈合期且高于疤痕期(P＜0.05).消化性溃疡患者血清DEFA和visfatin呈负相关,DEFA和IL-17呈负相关(r分别为-0.526,-0.654 ),visfatin 和IL-17呈正相关(r为0.404).受试者工作特征(receiver-operating characteristic,ROC)曲线显示:血清DEFA水平诊断曲线下面积(area under curve,AUC)为0.756,visfatin水平诊断AUC为0.652,IL-17水平诊断AUC为0.830,DEFA+visfatin+IL-17水平诊断AUC为0.892.结论:DEFA,visfatin及IL-17均可参与消化性溃疡发病,其水平改变可能和炎症程度有关,可作为临床重要的观察指标.
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原血小板碱性蛋白和人中性粒细胞肽1-3与冠心病的相关性分析
[目的]探讨原血小板碱性蛋白(PPBP)、人中性粒细胞肽1-3(HNP 1-3)与冠心病的相关性.[方法]前瞻性选择2013年1月至2016年12月本院心内科收治的70例男性冠心病患者(冠心病组),另纳入35例男性健康体检者作为对照组.应用酶光度比色法检测两组血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),采用酶联免疫吸附法检测PPBP、HNP 1-3水平.[结果]冠心病组与对照组血清HDL-C比较,差异无统计学意义(P>0.05);冠心病组年龄、TC、TG、LDL-C显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).冠心病组血浆PPBP、HNP 1-3水平均显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).血浆PPBP、HNP 1-3与年龄、TC、LDL-C呈显著正相关(P<0.05),与TG,HDL无相关性(P>0.05).[结论]PPBP、HNP 1-3是潜在的炎症标志物,可能预示高脂血症患者冠心病的发病风险.
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急性心肌梗死患者全身与局部血浆α防御素1-3水平的变化
目的 评价急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)时全身与局部血浆α防御素1-3(DEFA1-3)水平的变化.方法 入选对象均为男性,冠状动脉正常[无冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)]组31例、稳定型CAD组44例、STEMI组47例.全身血样经造影导管取自主动脉根部,局部血样(STEMI组)经抽吸导管取自罪犯血管.夹心酶联免疫吸附法( ELISA)测定血浆DEFA 1-3水平.结果 全身血浆DEFA1-3水平STEMI组＞稳定型CAD组＞无CAD组(均P＜0.05).局部与全身血浆DEFA1-3水平差异无显著性(P＞0.05).DEFA1-3诊断STEMI的佳诊断分界点为136.3μg/L,其敏感度和特异度分别为77.2％和66.7％,受试者操作特征曲线(ROC)曲线下面积(AUC)为0.717(95％CI:0.624～0.811,P=0.000).结论 STEMI时患者全身血浆DEFA 1-3水平升高,有可能作为新型炎性标志物用于急性冠状动脉综合征患者风险或预后评估.
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抗菌肽及其在医学中的应用
抗菌肽是多细胞生物体内经诱导产生的一种小分子多肽,是先天免疫的重要防御物质,具有广谱抗菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫以及抗肿瘤等生物活件,且不易产生抗药性,有良好的应用前景.本文就抗菌肽的结构特点、作用机制及其在医学中的应用作一综述.
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HNP-3相互作用蛋白的酵母双杂交筛选
目的 筛选胎肾上腺cDNA文库中与人中性粒细胞多肽(HNP-3)成熟肽具有相互作用的蛋白分子.方法 通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 成功获得HNP-3成熟肽基因,并将其插入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转染酵母细胞AH109,而后经缺陷性培养基上培养并观察pGBKT7-HNP-3在AH109中的表达情况,检测诱饵载体有无毒性作用和自激活功能.同时收集胎肾上腺,提取RNA,通过自我检测、分析、报告技术(SMART技术)制备人胎肾上腺cDNA文库.并采用 Matchmaker LexA 酵母双杂交系统从胎肾上腺cDNA文库中筛选与HNP-3成熟肽相互作用的蛋白.后通过PCR筛选获得阳性克隆并测序,通过回转实验,谷胱甘肽巯基转移酶沉降技术(GST pull down)以及免疫共沉淀实验再次验证二者的相互作用关系.结果 成功构建诱饵质粒pGBK-T7-HNP-3以及胎肾上腺cDNA文库并在酵母细胞中正确表达,筛选获得HNP-3成熟肽相互作用的蛋白--促肾上腺皮质激素受体(ACTH-R)2、钙粘着蛋白关联蛋白1(CTNNB1)、低密度脂蛋白受体相关蛋白 5(LRP5)、成对样同源域转录因子2(PITX2)等.终选定ACTH-R作为主要研究对象,且经GST pull down 以及免疫共沉淀实验获得了证实二者间具有相互作用的相应的条带.结论 从胎肾上腺cDNA文库中成功筛选得到α防御素HNP-3成熟肽相互作用蛋白--ACTH-R.
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酵母双杂交筛选胎肾上腺cDNA文库中HNP-1结合蛋白
[目的]筛选胎肾上腺cDNA文库中与α防御素HNP-1成熟肽具有相互作用的蛋白分子.[方法]通过聚合酶链反应(PCR)成功获得HNP-1成熟肽基因插入酵母表达载体pGBK-T7中构建诱饵质粒,同时提取胎肾上腺RNA,SMART技术制备人胎肾上腺cDNA文库,并采用Matchmaker LexA酵母双杂交系统从胎肾上腺cDNA文库中筛选与HNP-1成熟肽相互作用的蛋白.后通过PCR筛选获得阳性克隆并测序,而后经回转实验,GST pull down以及免疫共沉淀再次验证两者的相互作用关系.[结果]成功构建诱饵质粒pGBKT7-HNP-1以及胎肾上腺cDNA文库并在酵母细胞中正确表达,筛选获得HNP-1成熟肽相互作用的蛋白-melanocortin 2 receptor(ACTH-R),CCAAT-enhancer-binding proteins(C/EBP),Tramembrane trafficking protein(TMP21),low density lipoprotein receptor-related protein 6 (LAP6).终选定促肾上腺皮质激素受体(ACTH-R)作为主要研究对象,且经GST pull down以及免疫共沉淀实验获得了证实两者间具有相互作用的相应的条带.[结论]从胎肾上腺cDNA文库中成功筛选得到α防御素HNP-1成熟肽相互作用蛋白--促肾上腺皮质激素受体.
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P2Y2受体对支气管哮喘豚鼠α防御素表达的调控
目的 研究支气管哮喘豚鼠α防御素(RNP)的表达及P2Y2受体对其的影响.方法 72只成年雄性豚鼠随机分为正常组(A组)和哮喘组(B组),以腹腔内注射联合雾化吸入卵白蛋白(OVA)复制哮喘模型.将A组及B组分为生理盐水组(AL/B1组)、ATP干预组(A2/B2组)、苏拉明干预组(A3/B3组),分别对豚鼠腹腔内注射生理盐水、ATP及苏拉明.检测豚鼠气道外周阻力(RL)、肺泡灌洗液(BALF)细胞总数及中性粒细胞(PMN)计数；HE染色显示炎性细胞浸润情况；ELISA法检测血浆RNP和白细胞介素8(IL-8)表达含量；免疫组化和RT-PCR方法检测肺组织中RNP蛋白和mRNA以及P2Y2 mRNA的表达情况.结果 哮喘组及其干预组豚鼠RL上升幅度较A组及其干预组增加10％ (P ＜0.05).HE染色证实哮喘组豚鼠支气管管腔变窄,炎性细胞浸润.B1组BALF中细胞总数及PMN计数高于A1组和B3组,低于B2组(P＜0.05)；A组间比较,差异无统计学意义.B1组血浆和肺组织中RNP表达较A1组和B3组增高,较B2组表达减低(P＜0.05)；A1组较A2组表达减低,与A3组比较增高(P＜0.05).B1组血浆中IL-8表达较A1组和B3组增高,较B2组减低(P＜0.05)；A组及其干预组比较,无明显差别(P＞0.05).RNP主要表达于细支气管中,尤其PMN浸润部位.RNP mRNA表达结果与肺组织中RNP表达趋势一致.A1组P2Y2 mRNA较A2组表达降低,与A3组比较增高(P＜0.05)；B1组P2Y2mRNA表达较B2组降低,与B3组比较增高(P＜0.05).直线相关分析显示A组及其干预组RNP与PMN、IL-8无明显相关性,RNP与P2Y2mRNA呈正相关；B组及其干预组RNP与PMN、IL-8、P2Y2 mRNA呈正相关.结论 α防御素在支气管哮喘豚鼠中表达增高；豚鼠α防御素表达可能与P2Y2受体有关.
