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隐源性肝炎相关新基因CHBP2的原核表达及蛋白纯化
目的:构建隐源性肝炎相关新基因CHBP2原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达,并纯化CHBP2融合蛋白.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以提取的Huh7细胞mRNA为模板,扩增获得CHBP2基因片段,连接到pGEM-T载体,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a(+)-CHBP2,转化大肠杆菌BL21,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,获得CHBP2融合蛋白的可诱导性表达,通过SDS-PAGE电泳、Western blot免疫印迹分析证实蛋白表达的特异性.超声破碎表达细菌,SDS-PAGE分析.利用镍离子亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性.结果:成功构建原核表达载体pET-32a(+)-CHBP2,并将CHBP2融合蛋白成功表达,通过Western blot免疫印迹,证实了蛋白表达的特异性.SDS-PAGE分析表明其为包涵体表达,并对蛋白成功进行了纯化和复性,获得了表达蛋白的纯品.结论:成功表达、纯化CHBP2蛋白,为研究CHBP2蛋白的生物学功能打下了基础.
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噬菌体表面展示技术筛选隐源性肝炎血清蛋白结合蛋白
目的:通过筛选隐源性肝炎血清蛋白结合蛋白,为隐源性肝炎的发病机制研究探索新途径.方法:应用噬菌体表面展示技术,将隐源性肝炎患者血清作为固相筛选蛋白,用噬菌体正常人肝细胞T7 cDNA文库进行5轮生物筛选,经噬斑PCR,对筛选克隆进行DNA序列分析,将推断的氨基酸序列在蛋白质库中进行搜索,自GenBank中获得结合蛋白的cDNA和基因组的全长序列,然后再探讨该蛋白在隐源性肝炎发病机制中的作用.结果:噬菌体经过5轮生物富集后,从随机筛选的60个克隆中得到24个阳性克隆,经序列测定后进行同源搜索,初步确定人类HCV NS5A转化调节蛋白13(NS5ATPl3)为人体肝脏中固有的与隐源性肝炎血清蛋白结合的蛋白.结论:应用T7 cDNA噬菌体表面展示技术,我们发现隐源性肝炎血清蛋白与人类肝细胞HCV NS5A转化调节蛋白13相互作用,在隐源性肝炎发生及抗病毒治疗有重要意义.
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隐匿性丙型肝炎病毒感染
引起肝脏功能异常的原因很多,有感染(尤其是病毒感染)、化学物质(包括药物)、酒精、脂肪沉积、代谢疾病、自身免疫、肝脏肿瘤(原发或继发)、淤血性肝损害等,但临床上仍有5%～10%患者出现的肝功异常不能用上述病因来解释,被称为"隐源性肝炎"[1].在这类肝炎患者中,越来越多的研究资料证实隐匿性乙型病毒性肝炎及丙型病毒性肝炎的存在,并引起了广大学者的关注.
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走出肝炎诊断的误区
本期刊出了缪晓辉医师对"隐源性肝炎"诊治的有关问题的探讨性文章.我个人认为能及时提出这些问题是很重要的.<肝脏>自创刊以来,一贯提倡学术上展开自由探讨和争鸣,以繁荣和加速肝脏病学的发展.去年宁波市缪正秋医师对肝衰竭和重型肝炎的命名和定义提出自己的见解,曾引起广泛重视.我们希望藉此使本刊的自由讨论进一步发展.
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隐源性肝炎诊治方面的若干问题
引起肝损害的原因很多,有感染(尤其是病毒感染)、化学物质(包括多种药物)、酒精、脂肪沉积、代谢性疾病、原发或继发性肝脏肿瘤、肝脏淤血以及自身免疫等,临床上仍有不少病例不能用上述病因来解释,即所谓"不明原因肝损害",包括"隐源性肝炎"和"隐源性肝硬化",这类病例约占所有肝损害病例的5%～10%,这在我国是一个相当庞大的群体.
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隐源性肝炎的病因分类与处理
肝炎本身不是一种独立性疾病,而是一类由特定的临床、生化和组织学发现组成的综合征.现将肝炎综合征的分类及隐源性肝炎的可能原因及其处理原则简述如下.
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硫普罗宁对隐源性肝炎肝功能指标的影响
目的:观察硫普罗宁[(Tiopronin)商品名:凯西莱]对隐源性肝炎肝功能指标的影响.方法:选择隐源性肝炎69例,随机分为两组.治疗组用硫普罗宁片治疗,对照组用常规保肝护肝药物治疗,3个月后观察肝功能丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(TBiL)4项指标变化.结果:治疗组肝功能4项指标治疗前后比较差异均有显著性意义(P＜0.01),对照组4项指标差异均无显著性意义,治疗组肝功能4项指标复常率明显高于对照组(P＜0.01).结论:硫普罗宁治疗隐源性肝炎疗效显著,值得临床应用.
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茵陈柴胡汤加减治疗热盛郁肝型隐源性肝炎32例
笔者近年来采用吾师郑宋民的经验方茵陈柴胡汤加减治疗热盛郁肝型隐源性肝炎32例,取得满意疗效,现介绍如下.1一般资料选择本院中医肝科门诊2010年06月至2011年12月属热盛郁肝型[1]的隐源性肝炎32例,均符合《病毒性肝炎防治方案》诊断标准[2].其中男17例,女15例;年龄24～63岁;病程15天～1年6个月,平均4.2个月.
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清利活血汤对隐源性肝炎相关血清学指标的影响
清利活血汤是海派中医丁氏内科传人、上海市中医医院肝科已故全国首批500名老中医韩哲仙的治肝名方,对慢性肝病肝功能指标持续异常有较好的疗效.隐源性肝炎(或称原因不明性肝炎)由于发病隐匿,对肝损害的原因不明,临床上常通过各种检测手段,采取排除法来"诊断".其主要表现为肝功能异常,肝纤维化指标异常,肝肿大或肝硬化,少数可出现重型肝炎.很多患者发病期间基本无症状,或仅有乏力,神疲,肝区不适感.
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隐源性肝炎136例调查分析
目的 探讨隐源性肝炎的流行病学特征、临床特点、疗效.方法 对136例隐源性肝炎的年龄、职业分布、流行病学史及家族史、临床表现、病理结果、治疗等进行分析.结果 隐源性肝炎以青壮年农民多发,起病较急、黄疸型多见,肝功能损害较轻,近期疗效较好.结论 隐源性肝炎发展隐匿,临床表现不典型,需积极诊治,尽早查明病因及时处理,以免病情发展.
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1039例隐源性肝炎患者AMA-M2抗体的筛查
目的 在1039例隐源性肝炎患者中筛查AMA-M2抗体,对男性和女性的M2抗体滴度、M2抗体阳性患者和M2抗体阴性患者的免疫指标、PBC患者的临床表现等进行统计分析,以早期诊断PBC.方法 采用ELISA法检测M2抗体滴度.结果 在1039例隐源性肝炎患者中,81例(7.9%)M2抗体阳性,其中57例为女性,24例为男性,平均年龄53.0±14.8岁;在78例PBC患者中,乏力(74.4%,58/78)、黄疸(61.5%,48/78)和皮肤瘙痒(37.2%,29/78)多见;合并ANA阳性者39例(50.0%,39/78),合并抗-SSA/Ro抗体阳性14例(17.9%,14/78).结论 AMAs的检测是诊断原发性胆汁性肝硬化的重要指标,检测M2抗体有助于早期诊断PBC.
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邵铭治疗隐源性肝炎验案2则
邵铭教授为江苏省中医院感染科主任、主任中医师,任江苏省中医学会感染病分会副主任委员、江苏省中医学会肝病专业委员会第一副主任委员,师从全国名老中医徐景藩教授学习,跟师期间,发表《徐景藩教授诊治肝硬化的经验》、《徐景藩教授论“肝性胃病”》、《徐景藩教授诊治肝内结石经验》等多篇论文.擅长中医治疗各种类型的肝炎、肝硬化、肝癌术后等,对慢性胃炎、慢性萎缩性胃炎等疾病有颇深的造诣,笔者有幸师从邵铭教授学习,现选取邵铭教授两则隐源性肝炎验案,以飨同道.
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566例隐源性肝炎病理学与临床分析
目的 对隐源性肝炎患者进行肝脏病理学及临床分析,以期为临床诊断及治疗提供参考.方法 对566例隐源性肝炎患者行肝脏穿刺活体组织学检查,对其肝脏病理学资料与临床资料进行对比分析.男女比例采用x2检验.其余计数资料因呈偏态分布,采用秩和检验.结果 共收集566例患者资料,其中酒精性肝病175例(30.92％),药物性或环境因素肝损害101例(17.84％),遗传代谢性疾病93例,感染性疾病84例,脂肪性肝炎53例,自身免疫性肝病30例,病理诊断尚不能明确的30例.不同的疾病在性别、年龄分布上差异均有统计学意义,ALT.γ-谷氨酰转移酶水平在不同疾病中的差异均有统计学意义.其中自身免疫性肝病组性别构成与各组比较,q值分别为9.140、7.435、5.071、9.529、12.500,P值均≤0.01；酒精性肝病组、自身免疫性肝病组年龄分别与遗传代谢性疾病组、感染性肝炎组、药物性或环境因素肝损害组、脂肪性肝病组比较,q值分别为17.254、17.523、9.170、7.118以及10.302、10.697、5.266、4.661,P值均≤0.01；酒精性肝病γ-谷氨酰转移酶水平与遗传代谢性疾病、感染性肝炎、药物性或环境因素肝损害组比较,q值分别为8.003、4.793、4.404,P值均≤0.01,差异均有统计学意义.结论 病理学分析为隐源性肝炎的明确诊断提供较好的诊断手段,提示在隐源性肝炎患者,年龄、性别及生物化学检测结果等资料可成为诊断的部分依据.
