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肝脏胶原蛋白检测进展与评析
胶原含量多少可以直接反映肝脏纤维化程度之轻重,胶原蛋白含量测定在肝纤维化机制与药理研究中极其重要,往往是结果分析的"终点指标".综述肝脏胶原蛋白的生化与病理检测方法,结合个人实践体会,分析其各种不同方法的特点及适应范围.认为肝组织胶原蛋白以羟脯氨酸含量检测可靠,培养细胞总胶原分泌宜采用同位素掺入与胶原酶消化的方法,各型胶原分泌量可采用ELISA法,各型胶原沉积量可采用Western blot法.肝组织与培养细胞胶原病理染色,主要用于胶原蛋白定性分析与表达位置检测,正确应用图像分析可半定量.
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柠檬醛、肉桂醛抗曲霉菌作用机制研究
目的研究中药活性成分柠檬醛和肉桂醛的抗曲霉菌活性,探讨其作用机制,为抗真菌中药进一步研究和开发提供实验依据.方法采用微量液体稀释法测定柠檬醛、肉桂醛对黄曲霉菌和烟曲霉菌的低抑菌浓度(MIC);运用同位素掺入技术测定在柠檬醛、肉桂醛作用下,黄曲霉菌和烟曲霉菌对3H-TdR,3H-UdR和3H-亮氨酸掺入的抑制率.结果柠檬醛对黄曲霉菌、烟曲霉菌的MIC分别为:2.590μg/ml、0.648 μg/ml,肉桂醛对黄曲霉菌、烟曲霉菌的MIC分别为:0.109μg/ml、0.055μg/ml;柠檬醛和肉桂醛能明显抑制三种同位素前体的掺入(P<0.01).结论柠檬醛和肉桂醛在体外有较高的抗曲霉菌活性.推测其抗真菌的作用机理可能是通过抑制曲霉菌的DNA、RNA、蛋白质的合成而表现杀菌效应.
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正常中国人心血管系统内皮素受体及其亚型的分布
目的:用放射受体分析法测定了正常中国人意外死亡者心脏各种部位心升主动脉起始段内皮素受体及其亚型的分布.方法:用[I125]-ET1结合物及αF-PCR.同位素掺入,自然影方法从蛋白质和mRNA二个水平观察内皮素多体以变.
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BMP-2和TGFβ1对培养兔关节软骨细胞代谢的影响
目的探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和转化生长因子β1(TGFβ1)对体外培养兔关节软骨细胞代谢的影响,从而了解其在关节软骨损伤修复中的作用.方法利用荧光光度计,721-型分光光度计,35S-Na2SO4同位素掺入法等测定兔原代及反分化关节软骨细胞羟脯氨酸和蛋白多糖(PG)的变化.结果 BMP-2既能促进反分化关节软骨细胞DNA合成又能增加原代、反分化关节软骨细胞羟脯氨酸的含量和35S-Na2SO4掺入,而TGFβ1显著增加原代软骨细胞羟脯氨酸的合成和35S-Na2SO4掺入.结论 TGFβ1不能阻止关节软骨细胞反分化,而BMP-2能促进软骨细胞的增殖和维持其表型,还可使已丢失软骨表型的反分化软骨细胞有向恢复软骨表型方向分化的可能.
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透明质酸对体外培养半月板纤维软骨细胞的影响
目的观察体外培养半月板纤维软骨细胞的生长特点及生物学特性,研究中分子量透明质酸(hyaluronic acid, HA)对体外培养半月板纤维软骨细胞的影响.方法机械分离和胰酶、胶原酶联合消化,将兔半月板纤维软骨细胞进行体外分离培养,动态观察细胞形态变化和生长情况.设立对照,观察中分子量透明质酸HA(分子量2×106)对细胞生长增殖的影响,利用同位素标记技术,测定细胞对培养基中 3H-TdR、 3H-Pro和Na35SO4的摄取量,比较细胞DNA、胶原蛋白和蛋白多糖合成的速度.结果体外培养的半月板细胞呈多角形、有突起、富含分泌颗粒.当培养基中加入HA后,细胞 3H-TdR、 3H-Pro和Na35SO4的摄取量不同程度高于对照组,统计学相差显著(P<0.05).结论中分子量透明质酸能促进体外培养半月板纤维软骨细胞增殖和细胞外基质合成.
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微血管相关因素在瘢痕组织增生中作用的实验研究
瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕微血管有明显异常,是皮肤损伤后组织过度修复的结果.二者的发病机理尚不完全清楚.为进一步明确微血管及其相关因素在瘢痕增生中的作用,本课题采用免疫组化、原位分子杂交、脐静脉内皮细胞和皮肤成纤维细胞体外培养、同位素掺入、流式细胞仪分析等技术方法,对瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕组织中内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)的表达,细胞间粘附分子1的表达(ICAM-1),血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达,凋亡相关基因c-fos、bcl-2的表达,内皮细胞对成纤维细胞DNA和胶原合成的影响等微血管相关因素进行了研究.
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转化生长因子-β1对肌腱细胞DNA及胶原合成的影响
近年来的研究表明,转化生长因子-β1(TGF-β1)在肌腱的修复中起重要作用[1,2 ].而TGF-β1对细胞增殖分化作用的调节不仅与细胞来源、实验条件及其他生长因子有密切关系,亦与分化程度、细胞基质及其作用时间和剂量等密切相关[3].笔者通过同位素掺入及RT-PCR法观察TGF-β1不同作用剂量对人胚腱细胞DNA及胶原的合成效应,