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NADH对X射线照射正常肝细胞L02后PARP和Caspase 3活性的影响
目的：为了研究NADH对X射线诱导的细胞凋亡和PARP、Caspase 3活性的影响。方法设假照射组、对照组及处理组。处理组正常肝细胞在6MV Varian 5．0Gy照射后立即加入含NADH（400μg／mL） RPMI 1640完全培养基，假照射组和对照组只加入培养液，培养24 h，用Annexin V／PI法检测细胞凋亡率；流式细胞仪检测bcl－2和bax蛋白阳性表达率；免疫印迹检测PARP和Caspase3活性。结果处理组与对照组相比细胞凋亡率明显下降， bax蛋白阳性表达百分率明显下调，而bcl－2表达则明显上调（P＜0．05）。对照组PARP和Caspase 3蛋白均出现剪切片断，处理组未发现剪切片断形成。结论 NADH具有抗辐射诱导的L02肝细胞凋亡损伤作用，其作用机制可能通过bcl－2和bax调控线粒体途径有关。
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半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对脑缺血再灌注大鼠Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达及细胞凋亡的影响
目的:应用不同浓度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,Cys C)干预脑缺血再灌注大鼠,检测Bcl-2、Bax、Beclin-1阳性细胞的表达,探讨自噬蛋白Beclin-1与凋亡之间的关系.方法:成年雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham组),缺血再灌注组(I/R组),Cys C低、中、高浓度组.用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2h再灌注24h.采用免疫印迹半定量检测损伤中心脑皮质组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达;免疫组织化学检测Bcl-2、Bax和Beclin-1阳性细胞数;TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡.结果:与I/R组相比,Cys C低、中浓度组Bcl-2的表达有不同程度的升高,Bax的表达降低,细胞凋亡减少;而Cys C高浓度组Bcl-2的表达明显降低,Bax的表达显著上升,细胞凋亡增加;Cys C各浓度组Beclin-1的表达都有不同程度的升高.凋亡细胞与Beclin-1表达的相关性分析显示,Cys低、中浓度组细胞的自噬和凋亡呈负相关;Cys C高浓度组细胞的自噬和凋亡呈正相关.结论:Cys C在一定浓度范围内,随自噬蛋白Beclin-1表达的升高可抑制细胞的凋亡,对缺血再灌注损伤脑组织具有保护作用.其作用机制和Bcl-2的表达上调,Bax的表达下调有关;而Cys C较高浓度则无上述作用.
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骨折愈合中骨再生的生物学和生物力学
一、骨再生的生物学1.骨骼的生长和发育骨骼的生长和发育涉及很多细胞和组织的分化和增殖,虽然其过程复杂,却精确有序.在胚胎发育阶段,长骨先形成一个间充质细胞团块,然后软骨化形成软骨基质.随着发育的渐进,软骨细胞肥大,细胞外基质开始矿化,形成初级骨化中心.软骨细胞通过调亡的方式死去,矿化的软骨在成骨细胞和破骨细胞的协同下形成骨组织.
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Caspase-3特异性抑制剂对缺血再灌注损伤诱导的大鼠心肌细胞凋亡的作用
目的:探讨caspase-3特异性抑制荆在大鼠缺血再灌注损伤诱导心肌细胞凋亡中的作用.方法:SD大鼠36只,随机分为3组:对照组、I/R3 h组和抑制剂组.应用TUNEL法及流式细胞仪分析心肌细胞凋亡的变化,借助caspase-3荧光分析试剂盒,荧光比色法,检测心肌细胞凋亡过程中caspase-3活性的变化.结果:TUNEL及流式细胞仪分析显示caspase-3抑制剂组的AI值和细胞凋亡百分率分别为(4.48±0.98)%,(6.42±1.00)%;与I/R3 h组[(18.33%±1.71)%,(29.88±3.74%)]相比明显降低并有显著差异(P＜0.01).caspase-3活性检测显示caspase-3抑制剂组的caspase-3活性明显降低,比I/R3 h组降低了45.67%(P＜0.01).结论:caspase-3抑制剂能明显抑制心肌缺血再灌注后的心肌细胞凋亡.caspase-3抑制剂能明显抑制心肌缺血再灌注后的心肌caspase-3蛋白酶活性.
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CD40L在川崎病发病机制中的作用探讨
为探讨CD40L在儿童川崎病发病机制中的作用,用流式细胞技术及ELISA法检测急性期川崎病(KD)患儿外周血单个核细胞(PBMC)体外表达CD40L水平、细胞凋亡率及可溶性CD40L(sCD40L)对单核细胞株THP-1产生TNF-α的影响.结果:KD表达CD40L明显增高;存在淋巴细胞凋亡延迟;患儿PBMC培养上清(可能含有sCD40L)可诱导THP-1产生高浓度的TNF-α.抗CD40L单抗可纠正上述异常效应.CD40L的异常表达在川崎病的发病中起重要作用,抗CD40L单抗对KD具有潜在的免疫学治疗前景.
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热休克蛋白与肿瘤的关系
热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是广泛存在于生物界(从原核生物到真核生物)中具有高度保守性质的蛋白质,在应激状态下可以被诱导表达,故又称为应激蛋白[1].根据同源程度及分子量大小可分为HSP110、HSP90、HSP70和HSP60、小分子HSP(22～23 kD)以及泛素等几个家族.热休克蛋白在细胞生长、发育、分化、基因转录等功能方面发挥重要的作用,其主要的生物学功能是在应激状态下保护细胞生命活动必需的蛋白质,维持细胞生存.
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丹参酮抗肿瘤的研究进展
近年来,随着细胞生物学及分子生物学的研究进展,新的肿瘤治疗途径及靶点被陆续发现,为中药抗肿瘤研究提供了新的思路及方法.丹参酮是中药材丹参(salvia miltiorrhiza bge)的有效成分之一,为一组脂溶性菲醌类成分,包括丹参酮Ⅰ、丹参酮(Tan)ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮、二氢丹参酮等.
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锂对脑缺血损伤后神经细胞保护的研究进展
锂对脑缺血后神经细胞的保护机制,包括增加营养因子BDNF和抗调亡蛋白BCL-2的表达,激活AKT,抑制GSk-3β活性,灭活NMDA受体,减少P53和Bax等调亡蛋白的表达等.此外,锂还能抑制谷氨酸兴奋性毒性诱导的PKB、CREB的失活及JNK、P38的激活.现就此方面的研究进展作一综述.
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脑损伤后不同时间给予高渗盐-羟乙基淀粉液的治疗效应
目的 探讨在创伤性脑损伤后不同时间给予高渗盐-羟乙基淀粉液(HSH)对脑损伤的影响.方法 选用SD大鼠64只,采用Feeney自由落体损伤模型,于伤后早期(伤后10 min)和后期(伤后6 h)分别经尾静脉注射HSH、生理盐水(4 mg/kg),并据此分为四组,24 h后处死动物,干湿重法测定脑组织含水量,伊义氏兰(EB)测定对血脑屏障的影响及应用流式细胞仪测定各组对损伤区周围皮质调亡的影响.结果 伤后10 min HSH10组的脑组织含水量和EB含量略高于NS10组,而皮层脑细胞调亡数明显低于NS10组(P<0.05);伤后6 h HSH6组的脑组织含水量、EB含量和皮层脑细胞调亡数均明显低于NS6组(P<0.05);HSH6组的脑组织含水量、EB含量和皮层脑细胞调亡数均明显低于HSH10组(P<0.05).结论 脑损伤早期给予HSH会加重脑水肿,伤后6 h给予HSH不会加重腩水肿;无论伤后早期还是晚期给予HSH均可减少皮层脑细胞调亡数,晚期给药效果更佳.
关键词： 脑损伤 高渗盐-羟乙基淀粉液 脑水肿 调亡 -
极低频率电磁场对肝癌细胞SODD和Survivin基因表达的影响
目的 研究极低频率电磁场(ELF)对肝癌细胞死亡结构域沉默子(SODD)和凋亡抑制基因Survivin基因表达的影响,探索ELF在肝癌治疗中的作用.方法 应用RT-PCR和流式细胞仪(FCM)检测经ELF处理的肝癌细胞系BEL-7402的SODD和Survivin基因表达情况,并以L-02肝细胞为正常对照,分析ELF对肝癌细胞SODD和Survivin基因表达的影响.结果 经ELF处理后,BEL-7402细胞SODD和Survivin基因表达均明显下降(P＜0.05),而对L-02细胞无影响(均P＞0.05).结论 ELF能促进肝癌细胞凋亡,为临床应用ELF治疗肝癌提供了线索.
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肝星状细胞活化的炎性调控机制及中药抗纤维化研究进展
肝纤维化是细胞外基质的过度沉积为主要特征的损伤后修复反应，包括炎症及其后的纤维生成。肝星状细胞(HSC)的激活是肝纤维化发生的中心环节，而肝脏中多种炎性细胞与炎症相关因子是调节HSC激活及其后的纤维化发生发展的关键因素，涉及的分子机制亦十分复杂。中医药抗纤维化的研究从20世纪70年代中期开始，随着细胞生物学与分子生物学技术的应用，中医药抗纤维化机制的阐明也越来越深入。
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水蛭提取物对人白血病HL60细胞体外抑制作用研究
目的:研究水蛭提取物对人白血病HL-60细胞的体外抑制作用.方法:用液氮快速冻融法制备水蛭提取物,将不同浓度提取物作用HL-60细胞,观察提取物对HL60生长与增殖的影响、诱导调亡效应、并计算出水蛭提取物作用HL-60的半数抑制浓度(IC50).结果:浓度高于0.1mg/mL的水蛭提取物对HL60有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性；水蛭提取物作用HL60细胞48h的IC50为1.4mg/mL;另外水蛭提取物也具有诱导HL60细胞凋亡作用.结论:水蛭提取物可抑制HL60细胞增殖并诱导调亡.
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射线诱导细胞周期阻滞与肿瘤放射增敏的研究进展
20世纪90年代随着细胞分子生物学和肿瘤分子生物学的一系列突破,人们认识到大多数癌基因与抑癌基因的功能效应终都参与细胞周期的调控,或者本身就是细胞周期的调控的主要部分,这些基因的突变,导致细胞周期的失控,使细胞增殖过多,调亡过少.
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氢气细胞保护作用机制的研究进展
氢气是由氢元素组成的双原子气体。大量实验研究发现，氢气在急性肺损伤、脓毒症、肝缺血再灌注损伤、心肌缺血和脊髓损伤等模型中均具有细胞保护作用，其保护机制可能与抗氧化、抗炎、抗凋亡及调节细胞信号转导通路有关。本文对氢气细胞保护的相关机制进行综述。
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氧糖剥夺后处理在氧糖剥夺-再灌注损伤中的抗凋亡作用
目的 观察氧糖剥夺后处理在缺氧缺糖再灌注损伤中的抗凋亡作用.方法 应用SK-N-SH细胞进行氧糖剥夺4h,然后恢复氧糖20 h建立氧糖剥夺-再灌注损伤模型,3次循环的氧糖剥夺10 min/复氧糖10 min进行氧糖剥夺后处理；细胞分为对照组、氧糖剥夺-再灌注组(OGD/R组)与后处理组,MTT法与Hoechst33258染色分别检测氧糖剥夺后处理对细胞存活率与凋亡的影响.结果 OGD/R组细胞存活率较对照组下降约43％ (P＜0.01),后处理组细胞存活率比OGD/R组提高约22％(P＜0.01)；凋亡计数显示,OGD/R组和后处理组的细胞凋亡率较对照组增高(P＜0.01),而后处理细胞凋亡率低于OGD/R组(P＜0.01).结论 氧糖剥夺后处理能提高氧糖剥夺-再灌注损伤细胞的存活率,可能与其抑制细胞凋亡有关.
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肝口服液对大鼠肝癌细胞凋亡的影响
目的观察肝口服液对二乙基亚硝胺诱导的大鼠肝癌细胞凋亡的影响,并且与乙氧三甲基喹啉和全反式维甲酸进行比较.方法将大鼠随机分成5组,A组为肝口服液大剂量预防组、B组为肝口服液成人等效剂量预防组、C组为全反式维甲酸预防组、D组为乙氧三甲基喹啉预防组、E组为病理对照组.第14周末处死大鼠取肝脏,细胞调亡采用透射电镜、末端转移酶标记技术(TUNEL)检测.结果A组、B组和D组可见凋亡小体.TUNEL染色分级:凋亡细胞数A组、B组、D组与E组相比显著增多(P<0.05),C组与E组相比无显著性差异(P>0.05).结论肝口服液可诱导大鼠肝癌细胞的调亡.
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槐米中槲皮素对人鼻咽癌CNE2细胞增殖与凋亡作用的研究
目的 探讨槐米中拼皮素对人鼻咽癌CNE2细胞的增殖与凋亡的作用.方法 应用台盼蓝拒染法检测不同浓度槲皮素作用细胞24,48,72 h后的增殖状况;hoechest33342荧光染色观察细胞凋亡形态.结果 随着槲皮素浓度增加和作用时间的延长,槲皮素对人鼻咽癌CNE2细胞的抑制作用越明显.细胞培养48 h后,荧光染色观察随着药物浓度增加,凋亡细胞增多并且越来越明显,当浓度达到60 μmol/L时,镜下出现了大量不完整的细胞核和细胞碎片.结论 槐米中槲皮素可以有效地抑制人鼻咽癌CNE2增殖,诱导细胞凋亡,为临床上治疗鼻咽炎提供了新的实验依据.
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厚朴酚对兔视网膜缺血再灌注神经元凋亡和bcl-2、caspase-3表达的影响
目的 研究厚朴酚(Magnolol,Mag)预处理对视网膜缺血再灌注损伤后神经元凋亡和bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响,并探讨其对视网膜缺血保护的可能机制.方法 用升高眼压的方法制作兔视网膜缺血模型,将新西兰大白兔随机分为正常组、生理盐水组及Mag组.缺血前24h,对照组耳缘静脉注射生理盐水,Mag组注射厚朴酚100mg/kg.观察缺血再灌注后不同时间段对照组及Mag组视网膜组织学变化,TUNEL检测及bcl-2、caspase-3蛋白的表达.结果 视网膜缺血再灌注各时间段,HE染色Mag组大鼠视网膜内层厚度均较对照组厚,且内核层细胞数较多(P＜0.01); TUNEL法检测正常组无凋亡细胞,缺血再灌注24h凋亡达高峰,Mag组内核层的凋亡细胞比对照组少(P＜0.01);Mag组和对照组在缺血再灌注12h均检测到bcl-2、caspase-3蛋白表达,Mag组较生理盐水组少(P＜0.01).结论 Mag预处理可以促进视网膜缺血再灌注后细胞的存留,减少细胞凋亡,bcl-2、caspase-3蛋白表达的调节可能参与这种保护机制.
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PGE1对缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡Bc1-2蛋白表达影响及机制的研究
目的:研究前列腺素E1对缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡Bc1-2蛋白表达的影响,对其机制进行了初步探讨.方法:采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分为5组:正常细胞培养组、缺氧/复氧损伤模型、缺氧/复氧损伤+PGE1(5、15、45μg/L)组.用流式细胞计数法检测心肌细胞凋亡百分率及western blot法检测Bc1-2蛋白表达情况.结果:PGE1可明显减低由缺氧/复氧损伤所致的细胞凋亡百分率,并且可增加Bc1-2蛋白的表达.结论:PGE1具有明显的抗缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡作用,其机制可能与上调Bc1-2蛋白表达有关.
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SurViVin在顺铂诱导Panc-1细胞凋亡中的作用
目的:体外观察顺铂是否具有诱导胰腺癌细胞株(Panc-1)凋亡的作用,同时观察在此过程中凋亡抑制蛋白Survivin的表达变化,为探讨胰腺癌的化疗耐药机制提供理论基础.方法:用人Panc-1株进行培养传代;MTT试验检测顺铂以不同浓度和不同时间对Panc-1株生长的抑制作用;用RT-PCR检测凋亡过程中Survivin基因表达的动态变化.结果:顺铂可明显抑制Panc-1细胞增殖,其增殖抑制率呈浓度和时间依赖性;DNA电泳可以观察到凋亡的发生,而且呈药物浓度、作用时间依赖关系;Survivin表达水平随着顺铂作用浓度的增加而下降,当顺铂浓度为50μg/ml时下降明显(61%);Survivin cDNA/β-actin cDNA比值与细胞增殖抑制率和细胞凋亡率呈负相关(P＜0.01).结论:顺铂可以有效诱导Panc-1株的细胞凋亡,而且Survivin基因的抑制在顺铂诱导Panc-1株的细胞凋亡中起重要作用.
