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同型半胱氨酸血症诱导内皮细胞蛋白激酶C和核转录因子-κB的活化
目的 探讨内皮细胞蛋白激酶C(PKC)和核转录因子-κB(NF-κB)信号传导系统在调节高同型半胱氨酸(Hcy)血症发病过程中的作用. 方法 Hcy、PKC抑制剂或两者联合作用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)不同时间点后,用TransAMTM系统和凝胶电泳迁移率实验(EMSA)法检测NF-κB P65的活性,蛋白质印迹技术分析相关蛋白的表达. 结果 EMSA和TransAMTM系统检测显示,在高浓度Hcy刺激下,HUVEC中NF-κB的活化高峰出现在作用0.5 h和6 h时;且伴有IκBα短暂快速的磷酸化(P＜0.05);Hcy刺激0.5 h后PKC水平较对照组明显上升(P＜0.05);予以PKC抑制剂Bisindolylmaleimide Ⅰ(100 nmol/L)处理后,由Hcy所介导的NF-κB的激活作用和IκBα磷酸化效应几乎完全被抑制. 结论 Hcy能诱导HUVEC NF-κB系统活化,这些生物学效应是通过PKC信号通路来实现的;PKC抑制剂能显著抑制上述效应.
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β淀粉样蛋白25-35诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞凋亡过程中核因子кB激活的调控
目的 探讨β淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)25-35诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)凋亡过程中核因子кB(nuclear factor кB,NF-кB)的活化与蛋白激酶B(Akt)和糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)之间的关系.方法 用Aβ(25-35)诱导PC12细胞凋亡,并分析在此过程中Akt、GSK-3β以及NF-кB的活性变化.在Aβ(25-35)诱导PC12细胞凋亡过程中,分别阻断Akt通路和GSK-3β通路,测定细胞活性以及Akt、GSK-3β、NF-кB的关系.结果 Aβ(25-35)诱导细胞凋亡过程中,细胞凋亡率与Aβ(25-35)的用量呈现剂量依赖关系,用0、5、10、20、40μmol/L Aβ(25-35)处理PC12细胞48 h后,细胞的凋亡率分别为(3.01±0.03)%、(3.08±0.03)%、(25.32±0.76)%、(42.88±0.60)%、(60.85±2.39)%.与对照组比较,Aβ(25-35)诱导细胞凋亡过程中NF-кB被激活,而Akt、GSK-3β的活性则均受到抑制.用渥曼青霉素(wortmannin)抑制Akt的活性可引起NF-кB活性的下降.GSK-3β活性上升.用GSK-3β的特异性抑制剂氯化锂(LiC1)抑制其活性,则NF-кB活性同样下降.而对Akt的活性无显著影响.结论 Akt和GSK-3β都是NF-кB的上游调节因子,他们共同调控Aβ(25-35)诱导的PC12细胞凋亡过程中NF-кB的活化.这些结果有助于更好地理解阿尔茨海默病的发病机制,并对其防治提供新的思路.
关键词： 淀粉样β蛋白 NF-kappa B 蛋白激酶类 糖原合成酶激酶类 -
S100A10基因沉默对人软骨细胞内核转录因子NF-κB活性的影响
目的：针对人S100A10基因设计siRNA序列并构建shRNA表达载体；重组载体转染人关节软骨（HCs）细胞，观察细胞内S100A10基因表达及其对细胞内核转录因子κB（NF-κB）活性的影响。方法登陆美国国家生物技术信息中心（NCBI）数据库，根据人钙结合蛋白A10（S100A10）基因信息，设计3条针对其编码区（ CDS）区的小干扰RNA（ siRNA）序列。根据设计的siRNA序列，设计两条互补的shRNA序列，构建shRNA重组表达载体；阳离子脂质体法转染shRNA重组表达载体到HCs细胞，转染后48 h，收集细胞，提取细胞总 RNA及总蛋白，使用实时PCR（ RT-PCR）及蛋白质印迹法（ Western blot）的方法检测转染后细胞中S100A10 mRNA及蛋白相对含量；Western blot检测细胞内NF-κB的P65及P50亚基磷酸化。数据统计使用单因素方差分析。结果成功设计siRNA序列并成功构建了shRNA表达载体；mRNA及蛋白含量检测结果显示，三条siRNA序列对目的基因均有沉默效果，其中1号siRNA序列为-有效，其转染后48 h，细胞内mRNA及蛋白含量相比较未转染组细胞，分别下降了74.2％和76.4％，差异均有统计学意义（t ＝5.21，P＜0.01）；HCs 细胞内S100A10基因沉默，能够明显抑制核转录因子NF-κB活性，与对照组比较，P65及P50亚基磷酸化明显减弱（ t＝3.02，P＜0.01）。结论 S100A10基因沉默可以有效抑制HCs细胞内NF-κB活性。
关键词： 钙结合蛋白A10 RNA干扰 NF-kappa B -
NF-κB P65亚基siRNA增强吉西他宾诱导胰腺癌细胞凋亡作用的实验研究
目的 探讨NF-κB P65亚基siRNA(NF-κB P65 siRNA)在体内外增强吉西他宾诱导胰腺癌细胞凋亡的作用及机制.方法 培养人胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1,分为空白对照组、阴性干扰序列对照组、吉西他宾组、NF-κB P65 siRNA组和联合治疗组.MTT方法检测细胞增殖情况;Western blot方法检测NF-κB P65及凋亡相关蛋白的表达水平;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测胰腺癌细胞凋亡情况;电泳凝胶迁移实验检测NF-κB的DNA结合活性.BxPC-3接种裸鼠皮下建立胰腺癌移植瘤模型.治疗后监测肿瘤体积;TUNEL染色检测移植瘤组织细胞凋亡指数.结果 转染后72 h,与其他组相比,联合治疗组显著降低了细胞活力指数(P<0.05),下调了Bel-2和proeaspase-3的表达水平,同时上调了Bax的表达水平;流式细胞仪检测结果显示,联合治疗组细胞凋亡率高于其他组(P<0.05);EMSA实验结果证实,NF-κB P65 siRNA组和联合治疗组NF-κB的DNA结合活性低于对照组(P<0.05).联合治疗能够通过诱导凋亡而抑制裸鼠移植瘤生长(P<0.01).结论 NF-κB P65 siRNA可以通过抑制NF-κB的DNA结合活性,调控凋亡相关蛋白的表达水平,激活线粒体凋亡途径,从而增强吉西他宾对胰腺癌细胞的促凋亡作用.
关键词： 胰腺肿瘤 RNA干扰 NF-kappa B 吉西他宾 凋亡 -
锌指蛋白A20在炎症性肠病患儿肠黏膜中的表达及意义
目的 探讨炎症性肠病(IBD)患儿肠道炎症反应与锌指蛋白A20(A20)表达水平之间的关系.方法 收集2008至2010年就诊于我院并行肠镜检查的患儿肠道黏膜标本共57份.将标本分为正常对照组(n=16)、IBD缓解期组(n=12)、IBD活动期组(n=13)和非IBD肠炎组(n=16).内镜下取各组患儿末端回肠黏膜标本,采用荧光定量PCR和免疫组化法检测A20、NF-κB、IL-6、IL-8的表达水平.结果 (1)NF-κB、A20在正常对照组肠黏膜中仅微量表达,IBD活动期组和非IBD肠炎组NF-κB、A20表达水平明显高于正常对照组(P均＜0.01);(2)IBD缓解期组较正常对照组NF-κB[(9.35±4.84)%vs(0.57±0.44)%,P＜0.01]、IL-6(t'=1.34,P＞0.05)、IL-8(t=1.38,P＞0.05)表达水平高,而A20在mRNA水平(t=1.03,P＞0.05)和蛋白水平[(0.36±0.18)%vs(0.87±0.29)%,P＜0.01]上表达均偏低;(3)与非IBD肠炎组相比,IBD活动期组NF-κB[(24.17±11.27)%vs(55.29±21.84)%,P＜0.01]、IL-6(t=2.22,P＜0.05)、IL-8(t=2.97,P＜0.01)表达水平明显升高,而A20在mRNA(t=2.26,P＜0.05)和蛋白水平[(29.23±11.70)%vs(16.8l±5.90)%,P＜0.01]上表达均较低;(4)IBD缓解期组与非IBD肠炎组相比,IL-6、IL-8表达水平差异无统计学意义(t'值和t值分别为0.03和0.28,P均＞0.05),而A20在mRNA水平(t=4.42,P＜0.01)和蛋白水平[(29.23±11.70)%vs(0.47±0.25)%,P＜0.01]上表达均较低.结论 IBD患儿存在肠道炎症反应过度而A20表达水平上调不足的现象;A20表达水平的异常可能参与了IBD的发生和发展.
关键词： NF-kappa B 炎性肠疾病 儿童 锌指蛋白A20 -
口腔鳞状细胞癌转移相关基因实时定量PCR的验证
目的 对应用基因表达谱芯片从高低转移潜能的口腔鳞癌细胞系中筛选出的差异表达基因,进行基因转录水平的定量验证,筛选转移相关的基因.方法 选择基因表达谱芯片检测发现的、在高低转移潜能的口腔鳞癌细胞系中的差异表达基因,应用实时定量PCR定量检测方法,在口腔鳞癌低转移细胞系Tca8113及其配对的高转移亚细胞系Tb细胞中,进行基因转录水平的检测.将两种检测结果进行对比分析,筛选出可能与口腔鳞癌转移有关的基因或信号转导通路.结果 选择9个基因进行研究.其中有6个基因在高转移的Tb细胞中高表达,1个基因表达下调,2个基因在Tb和Tca8113细胞中表达无明显差异.实时定量PCR检测结果与基因芯片结果的符合率为66.7%.NF-κB信号转导通路中的主要基因A20、IκBα、TANK和p65在Tb细胞中表达明显上调.结论 NF-κB信号通路和其它一些基因,如IER3、CD44和GPMNB可能在口腔鳞状细胞癌侵袭和转移过程中发挥重要作用,这些基因和信号通路为深入研究口腔鳞癌转移的分子机理和治疗靶点奠定了基础.
关键词： 鳞状细胞癌 基因芯片 转移 NF-kappa B -
睾丸扭转复位后生精上皮细胞核转录因子表达的改变及其凋亡
目的探讨睾丸扭转2 h复位后第3天睾丸生精上皮细胞核转录因子(NF-κB)表达的改变及其凋亡的关系.方法用24只雄性SD大鼠建立左侧睾丸扭转复位模型.分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组,每组8只.Ⅰ组动物睾丸扭转复位后用柳氮磺胺吡啶灌胃;Ⅱ组动物睾丸扭转复位后用等量的生理盐水灌胃;Ⅲ组动物假手术后用等量的生理盐水灌胃.分别用Western蛋白印迹和免疫组织化学原位检测睾丸生精上皮细胞中NF-κB的表达情况;TUNEL法检测生精上皮细胞凋亡情况.结果Ⅱ组动物睾丸扭转复位后第3天扭转侧睾丸生精上皮细胞胞质NF-κB蛋白质(9.4±2.68)表达与Ⅰ、Ⅲ组扭转侧睾丸生精上皮细胞胞质NF-κB表达(分别为:12±2.2;11.1±3)相比下降水平差异无统计学意义,胞核NF-κB表达升高水平差异有统计学意义(3组分别为8.4±3.1;21.1±3.6;6.0±2.3).免疫组织化学原位检测Ⅰ和Ⅲ组扭转侧睾丸生精上皮细胞中NF-κB的表达以胞质为主,Ⅱ组扭转侧睾丸生精上皮细胞中NF-κB的表达以细胞核为主,而且NF-κB阳性细胞比例较其他两组阳性率显著上升(三组分别为15.6%±2.6%,66.1%±3.8%,10.8%±2.7%).Ⅰ组(7.7%±2.0%)和Ⅲ组(5.9%±1.7%)扭转侧睾丸生精上皮细胞凋亡指数差异不明显;Ⅱ组扭转侧睾丸生精上皮细胞凋亡水平(37.2%±3.3%)跟以上两组相比升高有显著性差异.结论睾丸扭转2 h复位后第3 d,睾丸生精上皮细胞NF-κB蛋白已被激活,从胞质转移至核内,启动生精上皮细胞凋亡过程.NF-κB蛋白质的激活是导致睾丸扭转复位后生精上皮细胞特别是精原细胞和各级精母细胞凋亡增加的重要环节.
关键词： NF-kappa B 精索扭转 脱噬作用 生精上皮 -
JSH-23对人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的影响
目的 探讨JSH-23阻断NF-κB信号通路后人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的情况及NF-κB信号通路相关凋亡抑制基因Bcl-2的表达变化,进而为临床舌鳞癌的干预和治疗寻找新的药物提供实验依据.方法 采用体外培养人舌癌Tca8113细胞的方法,经不同浓度JSH-23作用不同时间后,用MTT法、RT-PCR及Western blot等方法检测JSH-23对Tca8113细胞增殖、凋亡的影响.采用SPSS13.0统计软件对数据进行方差分析及t检验.结果 Tca8113细胞经JSH-23作用后,增殖受到明显抑制,20 μmol/L JSH-23作用48 h时,抑制作用为显著,细胞生长抑制率达到60.45％.同时,Bcl-2凋亡抑制基因表达减少,与对照组相比,JSH-23作用48 h后,Bcl-2表达显著减少47.85％,差异有统计学意义(P＜0.05);Bcl-2蛋白含量也明显减少,作用48 h后,Bcl-2蛋白表达相对光密度值分别下降50.93％ (P ＜0.01).结论 JSH-23作为NF-κB信号通路抑制剂,可以明显抑制人舌鳞癌细胞的增殖,同时显著下调Bcl-2基因及蛋白的表达.
关键词： 舌鳞癌 Tca8113细胞 NF-kappa B JSH-23 Bcl-2 -
非特异性角膜炎症反应中PDTC对LPS诱导LFA-1 mRNA表达的影响
目的:探讨淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)的mRNA表达与非特异性角膜炎症反应的相关性及核因子NF-κB抑制剂对LFA-1 mRNA表达的阻断作用.方法:建立BALB/C鼠角膜缝线及联合结膜下药物注射的动物模型,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),对单纯缝线组、缝线联合脂多糖(LPS)组和缝线联合LPS及吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)组术后1、3、7和14 d不同时相点角膜LFA-1 mRNA的转录水平进行检测.结果:术后第1、3、7 d时,角膜缝线联合LPS处理组LFA-1 mRNA的表达明显高于单纯缝线组(P＜0.05);14 d时,角膜缝线联合LPS处理组与单纯缝线组比较差异无显著性(P＞0.05).而1和7 d时缝线联合LPS和PDTC组LFA-1mRNA的表达明显高于缝线联合LPS组;3和14 d时缝线联合LPS和PDTC组LFA-1 mRNA的表达明显低于缝线联合LPS组(P＜0.05).结论:联合结膜下注射LPS可在术后诱导LFA-1 mRNA的高水平表达,而核因子NF-κB抑制剂PDTC可抑制角膜LFA-1 mRNA的表达,表明PDTC对LFA-1 mRNA表达具有阻断调控作用.
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组织芯片研究Notch1与NF-κB在胃癌中的表达和意义
目的:研究Notch1和NF-κB在胃癌中的表达与临床病理特征的关系以及两者间相互作用的关系.方法:通过免疫组化的方法检测了含有168例胃癌和27例正常胃组织的组织芯片中Notch1和NF-κB的表达情况.结果:Noteh1在胃癌中表达较正常胃组织明显上调(P＜0.01),并与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、脉管浸润明显相关;NF-κB在胃癌中表达明显高于正常对照组,并与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、远处转移及脉管浸润明显相关.Kaplan-Meier分析显示Notch1和NF-κB阳性组的预后较阴性组差.Cox回归多因素分析显示Notch1是影响胃癌预后的独立因素之一(P＜0.05).结论:NF-κB的过度表达可能参与了Notch1信号通路失调介导的胃癌发生发展机制.Notch1可能成为评价胃癌预后和生存的新的指标,也可能作为胃癌治疗的新靶点.
关键词： 胃肿瘤 Notch1 NF-kappa B 免疫组织化学 -
131I对分化型甲状腺癌细胞核因子κB表达和功能的影响
目的 探讨131I对DTC细胞核因子κB(NF-κB)表达和功能的影响,以及1311和NF-κB抑制剂Bay 11-7082联合治疗的可行性.方法 用不同放射性浓度131I和不同浓度Bay 11-7082处理DTC细胞,加入四氮唑盐显色,测定450 nm的吸光度(A)值,用公式(A药物处理组- A空白)/(A对照组-A空白)×100％计算癌细胞存活率(A空白为空白孔的吸光度,A对照组为单纯细胞孔的吸光度);选择癌细胞存活率约60％左右的131I和Bay 11-7082浓度进行联合实验.将131I和Bay 11-7082作用于DTC细胞6、24和48 h后,提取核蛋白,分别与NF-κB结合序列探针相结合,测定450 nm的A值,NF-κB的DNA结合率=(A药物处理组-A空白)/(A对照组- A空白)×100％.用Western blot鉴定单用131I、Bay 11-7082和联合用药6h后NF-κB核蛋白相对表达水平的变化,并以β-actin作为内参对照进行半定量分析.用配对t检验、F检验和q检验进行统计分析.结果 细胞存活分析发现不同放射性浓度131 I和不同浓度Bay 11-7082处理后癌细胞的存活率不同(F=281.07和173.84,P均＜0.01);单用131I组、单用Bay 11-7082组与联合用药组癌细胞的存活率分别为(67.33 ±5.65)％、(61.83±6.68)％和(36.67±5.35)％,差异有统计学意义(F =45.79,P＜0.01),其中前2组分别与联合处理组相比q=8.20和8.35,P均＜0.01.DNA结合实验证实131I可以诱导癌细胞内NF-κB结合率增高,24h为(255.33±29.86)％(高);而联合使用Bay 11-7082后,在6、24和48 h时间点能够抑制到相应刺激状态下NF-κB功能的22.10％、39.75％和43.18％,联合处理组与单用131I组比较,3个时间点差异均有统计学意义(t:24.58、26.29和8.20,P均＜0.01);6h时NF-κB p65功能受抑程度明显,DNA结合率仅为(35.33±8.21)％,与对照组相比差异有统计学意义(t=28.98,P＜0.01).半定量分析:131I作用6h后p65和p50相对表达水平均升高,Bay 11-7082联合131I作用6h后两者的表达水平均受到明显抑制;不同给药方式作用后p65和p50的相对表达水平差异均有统计学意义(F=100.93和193.55,P均＜0.01),131I组和对照组两两比较,q=4.75和8.22,P均＜0.05,联合处理组与对照组两两比较,q=30.80和22.83,P均＜0.01.结论 131I会导致DTC细胞NF-κB表达增加、功能增强,联合使用NF-κB抑制剂可以抑制这种改变,获得协同疗效.
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一氧化氮的抗炎作用与动脉粥样硬化
动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是一种渐进性、以大动脉脂质及纤维成分的沉积为特征的疾病,病理学的研究表明血中炎性细胞,特别是单核/巨噬细胞在血管壁粥样硬化的发展中起重要作用[1].
关键词： 一氧化氮 NF-kappa B 动脉粥样硬化 -
NF-κB的信号通路与阻断策略
核因子κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)是普遍存在于细胞浆中以p50/p65异二聚体为形式的一种快反应转录因子, 与NF-κB的抑制性蛋白(inhibitor kappa B, IκB)结合而呈非活性状态.大量研究表明,它可以被多种刺激剂, 如TNF-α、IL-1、神经生长因子、蛋白激酶C激活剂、有丝分裂原、氧化剂、细菌、病毒、免疫刺激剂、脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)、自由基以及紫外线等激活[1-3].激活的NF-κB与IκB解离后转位入核与靶基因启动子/增强子上的κB位点结合, 从而调节许多靶基因的表达,因此被誉为控制早期基因表达的基因开关.目前所知,NF-κB调节的靶基因编码蛋白至少包括细胞因子、趋化因子、生长因子、转录因子、粘附分子、免疫受体、氧化应激相关酶以及急性期蛋白等.通过靶基因表达产物,NF-κB信号通路参与了感染、炎症、免疫反应、细胞凋亡和肿瘤等病理过程以及细胞周期调控与细胞分化等[4-6], 因而NF-κB信号通路与人类疾病的关系和阻断策略受到普遍关注,本文就其主要研究进展作一综述.
关键词： NF-kappa B 信号转导 炎症 肿瘤 -
破骨细胞分化成熟调节的分子机理研究进展
破骨细胞(osteoclast.OC)来源于骨髓的粒-巨噬细胞克隆形成单位(granulocyte and macrophage colony forming cells, CFU-GM).
关键词： 破骨细胞 骨保护素 NF-kappa B 分化 -
离子硅对成骨细胞NF-kappa B核内转录因子活性的影响
目的 研究离子硅对体外培养的成骨细胞NF-kappa B核转录因子活性的影响.方法 分别用终浓度为1 mmol/L和2 mmol/L离子硅(SiO32-)处理MC3T3-E1成骨细胞,处理时间分别为6、12、24和48 h,设置对照组(不加处理因素)；采用流式细胞术检测细胞周期,计算细胞的增殖指数；Western blotting方法检测NF-kappa B信号通路的相关蛋白表达量及其变化.结果 流式细胞术结果显示,与对照组相比,1 mmol/L浓度的离子硅处理24h组和48h组,MC3T3-E1细胞增殖明显；Western blot结果显示,1 mmol/L浓度的离子硅促进成骨细胞增殖与p-NF-kappa B表达上升密切相关. 结论 骨材料中释放的微量的硅不会引起成骨细胞损伤,相反,微量的硅酸盐可能通过激活NF-kappa B诱导成骨细胞增殖.
关键词： 硅 生物材料 骨修复 成骨细胞 NF-kappa B -
15-deoxy-△12,14-prostaglandin J2对ECV304细胞增殖与凋亡的影响
AIM: To investigate the effects of 15-deoxy-△12,14-prostaglandin J2 (15d-PGJ2) on cell proliferation and apoptosis in ECV304 endothelial cells and related molecular mechanism. METHODS: MTT, Hoechst33258, TUNEL, Flow cytometry, DNA ladder, RT-PCR, Western blot, and electrophoretic mobility shift assay (EMSA) analysis were employed. RESULTS: The 15d-PGJ2 induced apoptosis in ECV304 endothelial cells in a dose-dependent manner (the percentage of apoptosis was enhanced from 10.0 %+1.3 % to 32.8 %+1.6%), which was accompanied by inhibition of NF-κB and AP-1 DNA binding activity, down-regulation of c-myc, upregulation of Gadd45 and p53,and activation of p38 kinase. However, the expression of p21 was found no significant change. CONCLUSION:peroxisome proliferator-activated receptor gamma ligand, 15d-PGJ2, can inhibit proliferation and induce apoptosis in ECV304 endothelial cells through different mechanisms.
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在患有急性肺损伤的小猪的肺泡巨噬细胞中一氧化氮,表面活性剂和糖皮质激素对核因子-κB和激活蛋白-1的活性的调控作用
AIM: To investigate whether acute lung injury (ALI) in ventilated piglets with bacterial infection affects NF-κB and AP-1 expression in alveolar macrophages (AM) and whether nitric oxide (NO), surfactant (Surf), glucocorticoids (GC) affect NF-κB and AP-1 activation in AM in vivo and in vitro. METHODS: The animals were intraperitoneally injected Escherichia coli, which caused ALI. Nuclear extracts of AM were analyzed by electrophoretic mobility shift assay (EMSA) for the nuclear factor-kappa B (NF-κB) and activation protein-1 (AP-1) expression. Detection of IκB-α protein was from cytoplasmic extract by Western blotting. Immunocytochemistry staining was used for intracellular location of p65 subunits of NF-κB. RESULTS: In ex vivo experiments, strikingly higher expression of NF-κB and AP-1 by EMSA was found 6 h after bacterial injection in contrast to the Normal group. In the NO, SNO, and GC groups, markedly attenuated NF-κB and AP-1 activation was observed. The NF-κB and AP-1 activation in Surf group showed lower levels of the expression. Immunoblotting of AM cytoplasmic extract showed low expression of IκB-α protein in the Control and Surf groups. The stronger expression was observed in the NO, GC, and SNO groups. AM of the Control and Surf groups showed intense nuclear staining, with decreased nuclear staining in the NO, GC and SNO groups. In in vitro experiment, it caused a significant increase in NF-κB and AP l activity in AM 1 h after exposure to lipopolysaccharides (LPS). In AM treated by LPS+SNP and LPS+GC, all showed decrease of DNA binding activity of NF-κB and AP-1 compared to those exposed to LPS+Surf. Immunoblotting of AM cytoplasmic extract showed that LPS stimulation of AM resulted in the low expression of Iκ B-α protein, which was not observed in the presence of SNP and methylprednisolone. However, the surfactant did not show such effect. LPS+Surf-exposed AM had intense nuclear staining, whereas decreased nuclear staining in the LPS+NO and LPS+GC-treated cultures was found, confirming a decrease in NF-κB activity. CONCLUSION:Activation of NF-κB was found in AM of ventilated piglets with bacterial ALI. NO and GS could prevent NF-κB and AP-1 activation in vivo and in vitro. Surfactant has limited effects on NF-kB and AP-1 activity.
