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FAP促卵巢癌侵袭和迁移的细胞内途径
目的：明确FAP发挥促增殖、侵袭和迁移作用的细胞内传递途径。方法： Transwell 实验和迁移实验检测FAP、RhoA/ROCK、Rac1-GTP对卵巢癌细胞系HO-8910 PM的增殖，侵袭和迁移的影响。结果：迁移和侵袭实验证实用Y-27632抑制RhoA/ROCK途径能促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭，与FAP联合作用时可使促进作用增强。迁移和侵袭实验证实NSC23766可抑制Rac1迁移和侵袭，与FAP联合作用可使FAP的促进作用减弱。结论：FAP不是通过细胞内RhoA/ROCK，而是通过Rac1-GTP信号通路在HO-8910 PM细胞发挥促增殖、迁移和侵袭作用的。
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富含T细胞表位的肿瘤成纤维细胞激活蛋白片段克隆表达及纯化
目的:表达并纯化富含T细胞表位的肿瘤成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)片段.方法:利用T细胞表位预测软件及酶切位点预测软件分析FAP全长,选取FAP蛋白内富含T细胞表位又缺少酶切位点的多肽AA264～AA449(NP_032012.1)作为目的表达片段.该多肽所对应的核酸片段为mRNA798～1418(GenBank:BC019190.1).利用PCR技术从含有FAP基因全长的质粒pCDNA3.1-FAP中扩增目的基因mRNA798～1418,并将该基因与原核表达载体pET-28a(+)连接,在BL21工程菌中实现重组蛋白His6-FAP264-449的表达,并利用His标签进行纯化.结果:成功构建了富含T细胞表位的FAP原核表达质粒pET-28a(+)-FAP798-1418,对该质粒进行BamH1/Xho1双酶切鉴定,鉴定结果与预期完全一致;实现了对该质粒编码的融合蛋白His6-FAP264-449的表达,表达后的融合蛋白主要以包涵体的形式存在;利用His标签纯化了该融合蛋白,纯化后灰度分析其纯度达95％.结论:成功表达并纯化了富含细胞表位的FAP片段,为下一步以FAP为靶标的肿瘤免疫治疗策略提供了实验基础.
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胃癌组织中成纤维细胞激活蛋白的表达及其与临床病理特征的关系
目的 探讨胃癌组织中成纤维细胞激活蛋白(FAP)的表达与临床病理特征和预后的关系.方法 选取2009年4月至2011年3月间江苏省中国人民解放军第82医院行手术治疗的121例胃癌患者的胃癌组织标本为研究对象,采用免疫组化染色检测癌变组织及距离癌变组织超过5cm处正常组织中FAP的表达情况,分析其与临床病理特征的关系.对患者进行5年随访,分析FAP表达与患者预后生存的关系.结果 121例胃癌病理组织中FAP表达阳性者为109例(90.1％),FAP阳性表达细胞数平均为(32.99±13.24)个,FAP在癌旁正常组织中的表达均为阴性.胃癌组织中FAP表达与患者肿块直径、分化程度、TNM分期和淋巴转移有关,差异均有统计学意义(均P＜0.05),与患者年龄、性别和是否吸烟无关.胃癌组织FAP高表达患者的平均生存时间及95％CI为35.29 (27.82,42.77)个月,而低表达患者平均生存时间及95％CI为44.15 (38.84,49.46)个月,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胃癌组织中FAP呈高表达,与胃癌的生长、进展和预后有关.
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FAP蛋白在卵巢癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activationprotein,FAP)在卵巢癌组织中的表达及与微血管密度(microvessel density,MVD)的关系.方法 通过体外实验研究,用免疫组化法检测FAP在卵巢正常组织、卵巢交界性肿瘤和卵巢癌组织中的表达并分析FAP与卵巢癌的分化程度、侵袭程度的相关性.结果 FAP在卵巢癌间质成纤维细胞中有表达,而在卵巢癌细胞和正常卵巢组织及卵巢交界性肿瘤中未见表达,且FAP表达与卵巢癌的分化程度和侵袭程度有关.间质中的MVD与卵巢癌的分化程度有关,且随着FAP表达水平的增加、MVD表达阳性率则逐渐上升,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 FAP的异常表达可能与卵巢癌(浆液性囊腺癌)的发生、发展有关,其可通过促进肿瘤微血管的生成,诱导癌组织产生反应性间质,加快肿瘤的演进.
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成纤维细胞与成纤维细胞激活蛋白在结肠癌中的研究进展
肿瘤发生、发展是一个错综复杂的生物学过程，不仅是实质细胞本身的恶性转变，还有赖于肿瘤微环境的作用。肿瘤微环境一般由间质细胞、细胞外基质(extracellular matrix, ECM)和血管构成，其中成纤维细胞(normal fibroblasts，NFs)是主要的间质细胞，在微环境中与癌细胞接触，相互作用，转化为癌相关成纤维细胞(carcinoma associated fibroblasts，CAFs)。近年来，肿瘤中CAFs的研究备受关注，这些细胞在上皮肿瘤的恶性转变中发挥着不可忽视的作用。成纤维细胞激活蛋白(Fibroblast activation proteih,FAP)是活化的成纤维细胞表面上的特异性表达分子，与肿瘤的生长及侵袭密切相关。现就NFs、FAP在结肠癌中的特点、具体作用及机制综述如下。
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FAP和整合素β1在皮肤鳞状细胞癌中的表达
目的 研究成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)和整合素β1(integrin β1)在皮肤鳞状细胞癌(SCC)中的表达及其与癌分化程度的关系.方法 应用免疫组织化学SP法检测46例皮肤鳞状细胞癌标本中FAP和整合素β1的表达水平.结果 46例皮肤鳞状细胞癌标本中,FAP和整合素β1的阳性表达率分别为87%和52%;随着FAP的过表达可伴有整合素β1表达的减弱.结论 FAP和整合素β1的异常表达在皮肤鳞状细胞癌的发生、发展中起着重要的作用,并与其恶性程度相关.
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FAP和TGF-β1在肺腺癌中的表达及临床意义
目的 研究成纤维细胞激活蛋白(FAP)和转化生长因子β1(TGF-β1)在肺腺癌中的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学S-P法检测40例肺腺癌组织中FAP和TGF-β1表达情况,结合临床分期和病理分级进行分析.结果 40例肺腺癌间质中FAP表达阳性率为90%,正常肺组织中无表达;FAP的表达与肺腺癌的临床分期有关,与病理分级无关.40例肺腺癌组织中TGF-β1表达阳性率87.5%,其表达与临床分期和病理分级有关.FAP与TGF-β1阳性表达呈正相关.结论 FAP和TGF-β1共同作用于肺腺癌,促进癌细胞的增殖和浸润,与其恶性程度、临床分期相关,联合检测有助于确定肺腺癌的恶性程度和估计预后及综合治疗方案的制定.
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成纤维细胞激活蛋白与肿瘤
肿瘤间质成纤维细胞在调节肿瘤的生物学行为方面可能有重要作用.作为一个增生性成纤维细胞的表面标志物一成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)在胚胎发育、组织修复和上皮性肿瘤的演进过程中可能起一定的作用.FAP属于膜表面丝氨酸蛋白酶类,具有明胶酶和二肽肽酶的活性.FAP可表达于多数上皮性肿瘤间质中的成纤维细胞上,FAP这种特异性的表达为各种癌的诊断和治疗提供了一个有前景的靶目标,以FAP为肿瘤间质标志物的病理诊断、预后判定和肿瘤基因治疗或免疫治疗是可能的.FAP在癌间质中表达的意义及作用机制尚有待进一步研究.
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FAP在胃癌间质中的表达及其与微血管密度的关系
目的 探讨FAP在胃癌间质中的表达及其与微血管密度(microvessel density,MVD)的关系.方法 收集162例胃癌组织,同时建立人胃癌细胞系SGC-7901裸鼠皮下移植瘤模型,采用免疫组织化学染色法检测FAP和CD34的表达.结果 在人胃癌组织中,FAP表达于问质成纤维细胞,表达阳性率为90.74%(147例),而胃癌细胞和正常胃组织中无表达,且FAP表达和MVD分别与胃癌的分化程度(χ2=51.882,P<0.01;χ2=46.383,P<0.01)、侵袭深度(χ2=40.193,P<0.01;χ2=21.617,P<0.01)及淋巴结转移(χ2=24.232,P<0.01;χ2=13.393,P<0.01)有关.在15例裸鼠皮下移植瘤中,所有肿瘤中FAP均不同程度在间质成纤维细胞呈阳性表达.在人胃癌组织(χ2=97.710,P<0.01)和裸鼠皮下移植瘤组织(χ2=11.100,P<0.01)中,不同强度的FAP表达组间肿瘤间质MVD的差异具有统计学意义,且随着FAP表达水平的增高,MVD也随之增加.结论 FAP的表达与胃癌的分化程度、侵袭深度及淋巴结转移有关.FAP可能通过促进肿瘤的微血管生成,加快肿瘤的生长、侵袭和转移.
关键词： 胃癌 成纤维细胞激活蛋白 肿瘤血管生成 SGC-7901细胞系 裸鼠 -
FAP和Rho家族蛋白在卵巢癌侵袭迁移中的作用
目的:明确FAP是否通过RhoA/ROCK、Rac 1-GTP通路发挥促增殖、侵袭和迁移作用.方法:用MTT实验,Transwell实验和迁移实验检测FAP、RhoA/ROCK、Rac 1-GTP对卵巢癌细胞系HO-8910PM的增殖,侵袭和迁移的影响.结果:1、MTT法,迁移和侵袭实验证实用Y-27632抑制RhoA/ROCK途径能够促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭,与FAP联合作用时促进作用增强.2、MTT法,迁移和侵袭实验证实NSC23766抑制Rac1途径能够抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭,与FAP联合作用使FAP的促进作用减弱.结论:1、RhoA/ROCK通路抑制HO-8910PM细胞增殖、迁移和侵袭;Rac 1-GTP促进HO-8910PM细胞增殖、迁移和侵袭.2、FAP不是通过RhoA/ROCK而是通过Rac 1-GTP信号通路在HO-8910PM细胞发挥促增殖、迁移和侵袭作用的.
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成纤维细胞激活蛋白载体的构建及表达
目的建立成纤维细胞激活蛋白(FAP)表达系统,以获得完整蛋白.方法采用RT-PCR方法,自人新鲜胃癌组织中扩增FAP-cDNA,同时将FAP-cDNA克隆到pMD18-T中,表达正确后,再定向插入真核表达载体pQE30中,转化大肠埃希菌JM109,经异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.结果测定FAP-cDNA序列与GeneBank(基因库)中的FAP序列相同;构建出重组表达载体pQE30-FAP;转化大肠埃希菌JM109,并获得完整蛋白,经验证为诱导后的表达蛋白.结论成功构建pQE30-FAP表达载体,Westem-Blotting验证为完整蛋白,为进一步获得抗FAP抗体奠定了基础.
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FAP和TGFB1在子宫内膜癌中的表达及相关性
目的 探讨成纤维细胞激活蛋白P(fibroblast activation protein,FAP)和转化生长因子(transforming growth factor beta 1,TGFβ1)在正常子宫内膜和子宫内膜癌组织中的表达及二者的相关性.方法 采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(streptavidin-biotin peroxidase,SP)法对40例正常子宫内膜组织和216例子宫内膜癌组织中FAP和TGFβ1的表达情况进行了检测,分析其在正常子宫内膜组织中的表达规律及其与子宫内膜癌临床病理特征的关系.结果 在216例子宫内膜癌组织的间质中FAP表达阳性率为88.89%(192例),而子宫内膜癌细胞少量表达,在正常子宫内膜组织中无表达.FAP表达与子宫内膜癌组织的侵袭程度有关,即与临床分期有关,与病理分级和淋巴结转移无关.在216例子宫内膜癌组织中TGFβ1表达阳性率为87.04%,TGFβ1表达与子宫内膜癌的临床分期和病理分级有关,与淋巴结转移无关.FAP表达阳性组中TGFβ1阳性表达率(91.67%)高于FAP表达阴性组(50.00%),两者的表达呈正相关.结论 FAP和TGFβ1的异常表达可能与子宫内膜癌的发生、发展有关.TGFβ1可诱导癌组织产生反应性间质,从而促进FAP的表达和肿瘤的演进.
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FAP、整合素α3β1和uPAR在上皮性卵巢癌中的表达及与肿瘤转移的关系
目的 检测整合素α3β1、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)和成纤维细胞激活蛋白(FAP)等因子在促进卵巢癌的转移过程中的作用及相互关系.方法 用免疫荧光方法检测FAP、整合素α3β1和uPAR在卵巢癌组织上的表达；Transwell小室法检测整合素α3β1与FAP对卵巢癌细胞系(HO-8910PM)迁移的影响；用免疫荧光与免疫共沉淀共同检测整合素α3β1、uPAR在HO-8910PM上是否为三聚体.结果 FAP、整合素α3β1和uPAR在卵巢癌组织中均有表达；抑制了整合素α3β1后,可以明显抑制FAP的促迁移作用.结论 FAP通过α3β1作用于uPAR促进卵巢癌细胞迁移,整合素α3β1、uPAR在HO-8910PM膜上及卵巢癌组织同一位置表达,是一个复合体.
关键词： 卵巢癌 成纤维细胞激活蛋白 整合素α3β1 尿激酶型纤溶酶原激活剂受体 -
FAP对体外内皮细胞增殖及其小管形成的影响
目的 探讨成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)在体外对内皮细胞的增殖和小管形成的影响.方法 应用不同浓度FAP(0、300、600、1 200pmol/L)处理人脐静脉内皮细胞EA.hy926,采用MTr检测内皮细胞增殖,划痕愈合实验分析细胞迁移并使用三维胶模型研究内皮细胞的小管形成.结果 与正常对照组相比,FAP可以诱导内皮细胞迁移和增殖(P＜0.05),并促进内皮细胞小管形成(P＜0.01),其中600pmol/L浓度的FAP处理组作用较其他组明显增强(P＜0.01).结论 FAP在体外可促进人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成.此发现为进一步研究FAP在血管生成中的机制提供了理论基础.
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成纤维细胞激活蛋白的表达与胃癌恶性生物学行为的关系
目的 探讨成纤维细胞激活蛋白(Fibroblast activation protein,FAP)在胃癌组织中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学方法检测 58 例胃癌组织中 FAP 的表达,分析其与胃癌恶性生物学行为之间的关系.结果 在 58 例胃癌组织中 FAP 表达阳性率为 79.3%,其在正常胃组织中无表达.FAP 表达与胃癌组织的分化程度、分期和分型有关(P＜0.01或P＜0.05),而与淋巴结转移无关.提示 FAP 的表达与胃癌恶性表型有关,即随着胃癌恶性程度的增强 FAP 表达有不同程度的增多.结论 FAP 的高表达与胃癌恶性表型有关,可作为反映胃癌恶性生物学行为的指标之一.
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成纤维细胞激活蛋白和转化生长因子-β1在小鼠肝纤维化组织中的表达及相关性
目的 探讨成纤维细胞激活蛋白(FAP)、α-SMA和TGF-β1在小鼠肝纤维化组织中的表达和三者之间的关系.方法 建立四氯化碳诱导的小鼠实验性肝纤维化模型,应用免疫组织化学技术榆测小鼠肝纤维化组织中FAP、α-SMA和TGF-β1的表达.结果 FAP、α-SMA和TGF-β1与小鼠肝纤维化程度呈止相关(rs分别为0.753,0.762,0.834,P<0.000 1);且FAP与α-SMA、FAP与TGF-β1的表达均呈正相关(rs为0.825和0.814,P<0.000 1).结论 FAP可作为判定肝纤维化程度的指标之一,且町能与TGF-β1共同促进肝纤维化进展.
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成纤维细胞激活蛋白与慢性肝脏病变
成纤维细胞激活蛋白(FAP)是存在于活化的成纤维细胞上的一种膜整合糖蛋白,属于丝氨酸蛋白酶家族,与二肽肽酶家族成员二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)具有52％的同源性,但同时具有二肽肽酶和胶原酶活性.研究发现FAP在肿瘤的生长、浸润、转移中发挥重要作用,并参与肝脏病变的发生和发展.
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成纤维细胞激活蛋白对卵巢癌细胞增殖、迁徙和侵袭的影响
背景与目的:肿瘤间质活化的成纤维细胞能表达成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP),本研究通过体外实验研究FAP在卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁徙过程中的作用.方法:人类卵巢癌细胞系H0-8910PM体外培养,加入不同浓度的FAP(30、100和300pmol/L)处理,用MTT法检测FAP对H0-8910PM增殖的影响；细胞划痕实验检测FAP对HO-8910PM迁徙能力的影响；Transwe11侵袭实验来研究FAP对H0-8910PM侵袭能力的影响.结果:MTT法及细胞生长曲线显示FAP对卵巢癌细胞有促增殖作用,并呈时间、剂量依赖性；细胞划痕试验结果显示,不同浓度的FAP对卵巢癌细胞系的迁徙均有促进作用,以100pmol/L组为明显(P＜0.01)；Transwe11侵袭实验显示FAP对卵巢癌细胞有促侵袭作用,以100pmol/L组为明显(P＜0.01).结论:FAP具有促进卵巢癌细胞的增殖、迁徙和侵袭的作用.
关键词： 成纤维细胞激活蛋白 肿瘤转移 卵巢癌细胞系HO-8910PM -
口腔癌相关成纤维细胞的体外生物学行为研究
目的 探讨口腔鳞癌中癌相关成纤维细胞(carcinoma associated fibroblasts, CAFs)的体外生物学行为.方法 组织块贴壁法培养CAFs及牙龈正常成纤维细胞(normal fibrolasts,NFs);通过形态观察,免疫组化染色,细胞增殖活性、贴壁率、迁移能力等测定,比较两种细胞的生物学行为差异.结果 与NFs相比,CAFs特征性表达成纤维激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease-2,MMP-2),具有更高的增殖活性、贴壁率及迁移能力(P<0.05).结论 口腔癌CAFs特征性表达相关蛋白,体外增殖、粘附、迁移能力均高于NFs.
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骨髓瘤细胞株对骨髓间充质干细胞FAP和APRIL表达的影响
目的 研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)与骨髓瘤细胞株共培养对成纤维细胞激活蛋白(FAP)、增殖诱导配体(APRIL)和B细胞激活因子(BAFF)表达的影响.方法 体外分离、培养BMSCs,并鉴定其成骨分化能力.实验分为BMSCs单独培养的阴性对照组(A组)、BMSCs与U266 细胞共培养组(B组)和BMSCs与RPMI8226细胞共培养组(C组).培养7d和12d后,采用RT-PCR方法检测BMSCs中FAP、APRIL和BAFF mRNA表达水平的变化.结果 三组BMSCs 形态相似,均具有成骨分化能力.与A组相比,B、C组培养7d后,APRIL、FAP mRNA表达降低(P＜0.05),而7d和12d后的BAFF mRNA表达无统计学差异(P＞0.05).结论 BMSCs与骨髓瘤细胞株U265或RPMI8226共培养后,改变FAP和APRIL表达,从而参与骨髓瘤的病理过程.
