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肝移植受者外周血调节性T细胞中CD39的表达及意义
目的 检测肝移植患者急性排斥时外周血CD39在CD4+CD25+调节性T细胞中的表达与免疫抑制功能的变化.方法检测76例肝移植患者外周血CD39占CD4+CD25+T细胞百分比.对发生急性排斥反应的患者在检测CD39+T细胞水平的同时行肝穿活检,另选取20例健康人为对照.分别选取急性排斥反应和无排斥反应患者各10例,检测CD4+CD25+CD39+T细胞的免疫抑制功能.结果 发生急性排斥反应的患者CD39占CD4+CD25+T细胞的百分比较无排斥反应患者明显降低(P＜0.05),且与排斥活动指数呈负相关(r=-0.86,P＜0.05);外周血CD39+调节性T细胞抑制率较无排斥反应患者明显降低(P＜0.05).结论 外周血CD4+CD25+CD39+调节性T细胞在肝移植急性排斥过程中明显降低且与排斥程度呈负相关.发生急性排斥的患者外周血CD4+CD25+CD39+调节性T细胞的免疫抑制功能也明显降低.
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2Gy60Coγ射线照射诱导调节性T细胞的辐射凋亡机制
目的 分析2Gy60Coγ射线照射对小鼠调节性T细胞存活率的影响,并初步探讨Treg细胞凋亡相关因子Bel-2、Bax与CD39表达之间的关系.方法 用2Gy60Coγ射线全身照射小鼠,分离胸腺、脾脏中的淋巴细胞,计数细胞数后利用流式细胞仪对Treg细胞亚群的凋亡率、CD39及凋亡相关因子的表达进行分析.结果 受照后Treg细胞较CD4+ FOXP3-T细胞的存活率高,胸腺和脾脏中Treg细胞存活率的时间效应关系不同；受照后Treg细胞凋亡率增加,以照后4d增幅为显著(t=-3.6、-7.4,P＜0.05)；受照后胸腺与脾脏中Bax/Bcl-2的比值变化规律不同,前者中该比值增加,以照后4d增加为显著(t-3.4,P＜0.05),而脾脏中该比值于照后4d减小(t=2.4,P＜0.05)；受照后4d胸腺Treg细胞中CD39表达上调(t=-6.6,P＜0.05),而脾脏中表达下调(t=2.6,P ＜0.05).结论 受照后Treg细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比值的变化规律与CD39的表达规律基本一致.
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结直肠癌肿瘤微环境中调节性T细胞CD39、CD73亚群及二者双阳性亚群的临床意义
目的 观察结直肠癌肿瘤组织微环境中浸润的调节性T细胞的临床意义,并探究其CD39、CD73及CD39,CD73双阳性亚群与肿瘤微环境中其他淋巴细胞及临床病理参数之间的关系.方法 收集24例结直肠癌患者根治术后组织标本,剪碎并分离培养组织内肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor infiltrating lymphocyte,TIL),以流式细胞术观察调节性T细胞CD39+、CD73+及CD39+CD73+亚群与患者临床病理参数之间的关联.结果 结直肠癌肿瘤组织微环境中浸润的调节性T细胞CD73+亚群,CD39+CD73+亚群与淋巴结转移及分化程度不良具有相关性,并且其机制与肿瘤相关性炎症密切相关.结论 相比Treg中的其他亚群,CD39+CD73+阳性的结直肠肿瘤浸润Treg具有更为独特的生物学活性,本研究为预测结直肠癌预后提供了新思路与理论依据.
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CD39和CD73在CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞发挥免疫抑制功能中的作用研究
本研究旨在检测正常人CD4+ CD25 high Foxp3+ Treg表面腺苷代谢分子的表达,并探索该分子在CD4+ CD25 high Foxp3+Treg发挥抑制功能中的作用.采用流式细胞术检测10例健康献血者外周CD4+ CD25high Foxp3+ Treg表面腺苷代谢分子CD39、CD73的表达,免疫组化染色检测了5例健康人皮肤中腺苷代谢分子CD39、CD73及Foxp3的表达.对5例健康献血者,流式细胞仪分选得到CD4+ CD25high、CD4+ CD25high CD39+、CD4+ CD25high CD39+ CD73+共3部分细胞,采用3H-TdR掺入方法检测这3部分T细胞对CD4+ CD25 T细胞增殖的抑制作用.同样采用流式细胞术对10例斑块型银屑病患者外周CD4+ CD25hishFoxp3+ Treg表面CD39和CD73分子的表达进行分析.结果显示,正常人外周血CD4+ CD25high Foxp3+ Treg与CD4+ CD25mid和CD4+ CD25-T细胞相比,CD39明显高表达(P＜0.01),CD73低表达(P＜0.05).正常人皮肤中,CD39主要表达在表皮角质形成细胞,而CD73则主要分布于真皮中.CD39+ CD73+ Treg对CD4+ CD25-T细胞增殖的抑制强(P＜0.01).银屑病患者外周血CD73+ CD4+ CD25highhFoxp3+ Treg比例较正常人明显降低(P＜0.01).由此推测腺苷代谢分子是CD4+ CD25 high Foxp3+ Treg发挥抑制功能的重要物质,并可能参与银屑病的发生.
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CD39的研究进展
CD39,即二三磷酸核苷酸水解酶-1(ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolase,NTPDase 1),是一种表达于多种细胞膜外表面、能使细胞外NTP分解为NDP、NMP的糖蛋白酶.它分布广泛,可通过其水解酶活性调节细胞外核苷酸代谢产物,目前研究发现CD39在凝血、血管发生、炎症、免疫、细胞增殖及凋亡等生理病理过程及自身免疫性疾病、炎症等疾病中发挥重要作用.但其作用机制仍未明确,目前越来越多的研究致力于探究CD39及其家族各成员的作用及其机制.
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调节性T细胞表达CD39和CD73在小鼠哮喘模型发病中的作用
目的：探讨CD39和CD73阳性的CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞（Treg细胞）对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道炎症的影响。方法：将16只BALB/c成年雌性小鼠随机分为哮喘组（n=8）和对照组（n=8）。用卵清蛋白进行哮喘造模后，取小鼠血清检测总IgE，采用高效液相色谱法行支气管肺泡灌洗液上清液三磷酸腺苷（adenosine-triphos-phate，ATP）检测，取左肺组织行苏木精-伊红（hematoxylin eosin，HE）染色，观察小鼠肺组织的炎症改变；右肺上叶行CD39 mRNA、CD73 mRNA、Foxp3 mRNA检测；余右肺制成单细胞悬液，采用流式细胞术检测CD39+Treg和CD73+Treg细胞数量，计算其占Treg细胞百分比。结果：哮喘组小鼠的血清总IgE较对照组显著上升（P<0.01），支气管肺泡灌洗液中ATP较对照组升高（P<0.05），病理组织切片检查发现肺部炎症改变明显。哮喘组小鼠肺组织中CD39 mRNA、CD73 mRNA、Foxp3 mRNA表达量分别为（0.54±0.11）×10-3、（1.11±0.36）×10-3、（0.08±0.03）×10-3，对照组则分别为（0.88±0.25）×10-3、（1.88±0.37）×10-3、（0.11±0.02）×10-3，2组间差异有统计学意义（P均<0.05）。流式细胞术检测发现，哮喘组小鼠肺组织的CD39+Treg、CD73+Treg细胞百分比较对照组略有下降趋势，但差异尚无统计学意义。结论：肺局部CD39+Treg和CD73+Treg细胞数量减少和（或）功能障碍导致的细胞外ATP清除率降低，可能是哮喘气道炎症发生的重要机制之一。
关键词： 哮喘 CD39 CD73 CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞 气道炎症 -
CD39/ATP轴调控哮喘小鼠肺泡巨噬细胞炎症小体活化的研究
目的 探讨CD39/ATP轴与哮喘肺泡巨噬细胞炎症小体活化之间的关系.方法 采用OVA致敏和激发模式建立Th2优势哮喘小鼠模型;采用LPS联合OVA致敏和OVA激发模式建立Thl7优势哮喘小鼠模型;将CD39抗体经鼻滴入至Th2优势哮喘小鼠,建立CD39阻断的哮喘小鼠模型.实验设立正常对照组、Th2优势哮喘组、Th17优势哮喘组以及CD39阻断组,每组小鼠各10只,共40只.分离各组小鼠肺泡巨噬细胞,采用流式细胞仪检测各组肺泡巨噬细胞CD39的表达,Western Blot检测巨噬细胞炎症小体分子NLRP3和caspase-1的表达,ELISA方法检测肺泡灌洗液中ATP、IL-1β的含量.结果 Th17优势哮喘组以及CD39阻断组小鼠肺泡巨噬细胞CD39表达明显下调,与之对应的是:炎症小体中NLRP3和caspase-1的蛋白表达上调和肺泡灌洗液中ATP、IL-1β含量显著增加.结论 哮喘小鼠肺泡巨噬细胞CD39表达与炎症小体活化之间存在着相关性,推测CD39/ATP轴在调控哮喘小鼠肺泡巨噬细胞炎症小体活化之中发挥重要作用.
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过敏性哮喘患者外周血CD4+T细胞表达CD39和CD73水平变化及其临床意义
目的:初步探讨CD4+T细胞表达的腺苷CD39和CD73在过敏性哮喘患者外周血中的水平变化及与叉头蛋白3 (FoxP3) 、GATA结合蛋白3(GATA3)和维A酸相关孤儿受体(ROR)-γt mRNA相关性.方法:选择54例对屋尘螨过敏的慢性持续期哮喘患者[间歇状态和轻度持续哮喘组(间歇-轻度组)29例,中重度组25例]和45名健康志愿者,通过荧光实时定量PCR方法检测并比较研究对象外周血CD4+T细胞中CD39 、CD73 、FoxP3 、GATA3和ROR-γtmRNA水平.结果:CD39 mRNA水平正常对照组明显高于间歇-轻度组(P=0.000),间歇-轻度组明显高于中重度组(P=0.001).CD73 mRNA水平正常对照组明显高于间歇-轻度组(P=0.001),哮喘亚组间差异无统计学意义(P=0.126).哮喘组CD4+T细胞表达的CD39 mRNA与FoxP3 mRNA水平呈显著正相关性(r=0.607,P=0.000),与GATA3 mRNA水平呈显著负相关性(r=-0.505,P=0.000),与ROR-γtmRNA无显著相关性(r=-0.287,P=0.054).哮喘组CD4+T细胞表达的CD73 mRNA与FoxP3和ROR-γtmRNA水平无显著相关性(r=0.110,P=0.450;r=-0.227,P=0.138),与GATA3mRNA水平呈显著负相关性(r=-0.286,P=0.040).结论:CD4+T细胞表达的CD39和CD73在过敏性哮喘免疫反应过程中起到重要作用.
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小剂量左旋多巴上调pCREB及CD39蛋白表达发挥抗氧化应激损伤作用的研究
目的 明确左旋多巴对PC12细胞生长及应激状态下存活的影响,探讨其抗氧化应激损伤的机制.方法 不同浓度左旋多巴处理PC12细胞,用MTT法检测PC12细胞增长率及加入过氧化氢后细胞存活率;免疫荧光、Western blot方法测定磷酸化环单磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)及CD39蛋白表达.结果 低浓度左旋多巴(＜20μmol·L-1)促进PC12细胞生长,且可抗氧化应激损伤,而蛋白激酶抑制剂减弱此保护作用.免疫荧光及Western blot结果显示CD39及pCREB表达升高.结论 低浓度左旋多巴可通过上调CD39及pCREB表达发挥抗氧化应激神经保护作用.
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cAMP对缺血神经元保护作用的机制研究
目前对于缺血性脑卒中后神经元的保护仍缺乏明确有效的药物治疗.磷酸二酯酶抑制剂可通过增加细胞内cAMP的含量对缺血性神经元发挥保护作用.本文从cAMP对缺血性神经元胞内和胞外的作用,阐述cAMP对缺血神经元发挥保护作用的机制,并试图为磷酸二酯酶抑制剂等cAMP增效药物的临床应用提供理论基础.
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CD39+和CD73+调节性T细胞与原发性胆汁性胆管炎肝脏损伤的相关性研究
目的 分析原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis,PBC)患者腺苷代谢通路相关分子的变化及其与PBC炎性损伤的关系.方法 连续选择2016年10月-2017年10月在太仓市第一人民医院和常熟市第二人民医院就诊的PBC患者49例和体检健康者36例.流式细胞术分析外周血腺苷代谢通路关键分子CD39和CD73在CD4+T细胞和Foxp3+调节性T细胞(Treg)中的表达情况,高效液相色谱串联质谱(UHPLC-Q-TOF/MS)分析患者血清三磷酸腺苷(ATP)水平.分析以上指标的统计学差异及其与肝脏炎性损伤指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)和Mayo评分之间的相关性.结果 PBC组CD4+ CD39+T细胞占CD4+T细胞比例[(5.28±1.92)％]较对照组[(11.01±3.19)％]显著降低(t=10.25,P＜0.01),CD4+ CD25+ Foxp3+ CD39+T细胞(CD39+ Treg)在Foxp3+ Treg中所占比例[(23.75±9.48)％]同样显著低于对照组[(54.68±5.18)％],差异有统计学意义(t=13.79,P＜0.01).PBC组和对照组CD4+CD73+T细胞在CD4+T细胞中的占比和CD4+ CD25+ Foxp3+ CD73+T细胞在Foxp3+ Treg中的占比差异无统计学意义(t值分别为2.235和1.083,P＞0.05).PBC组血清ATP水平[(200.28±79.41) μg/L]明显高于对照组[(89.20±33.76)μg/L],差异有统计学意义(t=8.367,P＜0.01).PBC组CD39+ Treg占Treg比例与ATP、GGT和Mayo评分水平呈负相关关系(r值分别为-0.413、-0.378和-0.382,P值分别为0.003、0.007和0.007).结论 CD39+ Treg在PBC患者中比例显著降低,可能通过降低ATP的分解导致炎性损伤加剧.CD73+ Treg在PBC患者中未见明显变化.
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CD39在肿瘤免疫中的研究进展
CD39是胞外二三磷酸核苷酸水解酶1(NTPDase 1),是一种广泛表达于人体组织细胞表面的核苷酸水解酶,是参与产生免疫抑制性的腺苷过程中的限速酶.CD39与肿瘤的发生发展密切相关.CD39的免疫抑制作用是通过其产生的腺苷介导的,腺苷作用于肿瘤中浸润的免疫细胞从而发挥免疫抑制效应.近年来,利用CD39化学抑制剂、单克隆抗体在体内外实验的抗肿瘤治疗中取得了显著疗效,为抗肿瘤治疗提供了新途径.
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结核患者的CD+39调节性T细胞的免疫研究
目的 研究外周血中CD+4CD+25 CDlow127细胞与CD+39 CD+4CD+25 CDlow127细胞在健康人、隐性结核感染者和活动性结核患者中表达水平的差异. 方法 检测10例健康对照者、26例隐性感染结核者及35例活动性结核感染者外周血的CD+4CD+25 CDlow127细胞与CD+39 CD+4CD+25 CDlow127细胞的表达水平. 结果 外周血的CD+4CD+25 CDlow127细胞在健康对照组、隐性感染组及活动性结核组的表达分别为(4. 84 ± 0. 85)%、(6. 95 ± 0. 64)%、(9. 49 ±1. 14)%. 三组之间比较有显著性差异(P均<0. 01). 外周血的CD+39CD+4CD+25CDlow127细胞在健康对照组、隐性感染组及活动性结核组的表达分别为( 3. 24 ± 0. 60 )%、( 4. 88 ± 0. 54 )%、( 7. 48 ± 0. 83 )%,组别之间比较有显著性差异(P均<0. 01). 结论 CD+4CD+25CDlow127细胞与CD+39CD+4CD+25CDlow127细胞在活动性结核与隐匿性结核中的表达上差异或与免疫抑制和免疫耐受的强度有关,是区分两者的优选指标.
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肾移植后受者外周血中CD39+调节性T淋巴细胞的表达及其免疫调节作用
目的 探讨肾移植受者外周血中CD39+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)的表达及其免疫调节作用.方法 接受首次肾移植的受者30例,术后28 d内14例发生急性排斥反应(AR组),16例未发生急性排斥反应(NR组).所有受者术后采用他克莫司+吗替麦考酚酯+泼尼松的三联免疫抑制方案.以健康志愿者12例为对照组.采集受者和志愿者外周血,经密度离心法分离单个核细胞.采用流式细胞术分选CD4+CD25-反应性T淋巴细胞(Tresp细胞)、CD39-Treg细胞和CD39+Treg细胞.检测CD39+ Treg与CD4+T淋巴细胞的比值,采用酶联免疫吸附试验法检测CD39+Treg细胞对Tresp细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素17(IL-17)的抑制作用.结果 AR组CD39+ Treg细胞与CD4+T淋巴细胞的比值为(1.1±0.5)％,明显低于对照组的(1.8±0.6)％和NR组的(2.1±0.7)％(P＜0.05).对照组和NR组CD39+ Treg细胞可显著抑制Tresp细胞分泌IFN-γ和IL-17(P＜0.05),CD39-Treg可抑制IFN-γ的分泌(P＜0.05),但对IL-17的分泌无抑制作用.NR组CD39+ Treg可抑制IFN-γ的分泌(P＜0.05),但对IL-17的分泌无抑制作用.结论 CD39+ Treg细胞具有重要的免疫调节功能;肾移植后急性排斥反应发生时,外周血CD39+ Treg数量减少,且部分抑制功能受损.
