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T细胞疫苗对肝脏移植物内浸润细胞凋亡的影响
目的探讨T细胞疫苗对肝脏移植物内浸润细胞凋亡的影响.方法应用近交系DA大鼠和近交系Lewis大鼠作为实验动物,制备DA大鼠针对Lewis大鼠的特异性T细胞疫苗(TCV).第一组(n=8):以Lewis大鼠作为供者,以DA大鼠作为受者.第二组(n=8):用Flt3-L(fms-like tyrosine kinase 3 ligand)治疗供者Lewis大鼠,以DA大鼠作为受者.第三组(n=8):用Flt3-L治疗Lewis大鼠,用TCV免疫受者DA大鼠.应用三袖套法进行大鼠原位肝移植,观察肝移植物平均存活时间(MST);于移植后第5天获取肝移植物制作组织切片,HE染色,光镜观察排斥反应情况.同时分离肝脏移植物非实质细胞(NPC),应用流式细胞仪对移植物浸润细胞(GICs)的凋亡和CD4+T细胞和CD8+T细胞进行检测.结果第一组进行单纯移植,平均存活时间(MST)为(17±2.6)d、第二组用Flt3-L治疗供者后MST下降为(5.7±1.4)d(P＜0.01)、第三组是在第二组的基础上用TCV免疫受体诱导耐受,使MST显著延长(15.7±4.2)d(P＜0.01);移植物组织切片HE染色光镜观察所见:第二组可见明显的排斥病理损伤征象,在第一组和第三组未发现明显的排斥性病理改变;GICs凋亡率第一组为(11.94±3.12)%、第二组为(7.92±2.25)%,和第一批比较显著降低(P＜0.05),应用TCV免疫的第三组GICs凋亡率比第二组显著上升,为(25.99±2.49)%(P＜0.01);应用T细胞疫苗的第三组和单纯移植的第一组其CD4/CD8显著低于第二组(P＜0.01).结论异品系大鼠肝移植物在没有任何免疫抑制治疗的情况下可以被完全接受,供体抗原特异性TCV通过诱导肝脏GICs凋亡抑制Flt3-L诱导的肝移植急性排斥反应,GICs凋亡在同种移植耐受过程中发挥关键作用.
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T细胞疫苗接种对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠免疫机制的调节作用
目的探讨T细胞疫苗(TCV)接种对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)免疫机制的调节作用.方法取正常及EAE大鼠腹股沟淋巴结细胞,经MBP抗原诱导,制备MBP特异的TCV用于接种,以HE染色观察髓鞘病变,MTT法检测细胞毒反应,FACS方法检测T细胞亚群,ELISA方法检测血清中细胞因子含量.结果接种TCV后,CD8+细胞百分率上升,T细胞对脑细胞的杀伤率下降,血清中IFN-γ与TNF-α含量下降以及脑髓质炎症反应减弱,EAE发病率下降.结论特异性TCV接种可降低自身免疫反应性.TCV通过淋巴细胞亚群的变化及细胞因子的调节,发挥对EAE的免疫预防和治疗效应.
关键词： T细胞疫苗 Lewis大鼠 实验性自身免疫性脑脊髓炎 -
体外途径制备T细胞疫苗抑制异种免疫应答的作用
目的 探讨体外途径制备T细胞疫苗抑制异种免疫应答的作用. 方法 分别用体内抗原刺激法和体外抗原刺激法制备Balb/c小鼠针对Wistar大鼠的特异性T细胞疫苗,再分别用T细胞疫苗免疫Balb/c小鼠(1×105/次,腹腔注射),于免疫前和免疫后3 d,7 d,14 d获取小鼠的脾脏,分离小鼠脾淋巴细胞作为反应细胞,以Wistar大鼠脾细胞作为刺激细胞(体外灭活后)进行单向混合淋巴细胞反应(MLR),通过混合淋巴细胞反应比较体内抗原刺激法和体外抗原刺激法制备T细胞疫苗对异种免疫应答的抑制作用. 结果 经体外途径和体内途径制备的T细胞疫苗免疫小鼠,均可以显著抑制免疫小鼠脾淋巴细胞针对Wistar大鼠脾细胞的免疫应答,通过分析MLR的OD值可知,其作用效果与体内途径制备的TCV无显著差异(P＞0.05),TCV抑制效果于免疫后14 d达到强. 结论体外方法制备的T细胞疫苗可以对异种免疫应答发挥显著抑制作用,体外方法制备的T细胞疫苗能达到体内抗原刺激途径制备的T细胞疫苗的免疫效果.
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T细胞疫苗诱导异种特异性免疫耐受的作用探讨
目的:探讨T细胞疫苗诱导异种特异性免疫耐受的作用.方法:制备SD大鼠针对豚鼠的T细胞疫苗(TCV),然后用T细胞疫苗免疫正常SD大鼠,连续3周,每周1次,同时设空白对照组.以被免疫SD大鼠的脾细胞作为反应细胞,以豚鼠的脾细胞作为刺激细胞(经丝裂霉素处理),于接种前和每次接种后第5天进行单向混合淋巴细胞反应(MLR),同时对外周血T细胞凋亡和CD4+、CD8+T细胞亚群进行检测.结果:MLR结果显示,在TCV组,SD大鼠的脾细胞反应程度比接种前显著减弱(P＜0.01),接种后相同时点组间比较,TCV组显著低于对照组(P＜0.01);接种T细胞疫苗后,外周血T细胞凋亡率比接种前显著增加(P＜0.01),并随着接种次数的增加而升高;随着接种T细胞疫苗次数的增加,CD4/CD8逐渐减小,与MLR的cpm值的递减趋势一致.结论:T细胞疫苗成功地诱导出异种特异性免疫耐受.T细胞疫苗可能通过诱导抗原特异性的反应性T细胞凋亡去除独特型T细胞克隆,进而诱导出抗原特异性免疫耐受;CD4/CD8与免疫耐受的产生有关,CD4/CD8降低有利于特异性免疫耐受的形成.
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T细胞疫苗抑制了Flt3－L介导的小鼠肝移植急性排斥反应
目的：探讨供体抗原特异性T细胞疫苗诱导肝移植免疫耐受的作用及其机理，同时对肝移植“自动耐受”机制进行探讨。方法：以CBA小鼠作为受体，以B6小鼠作为供体，建立小鼠原位肝移植模型；制备T细胞疫苗：用B6小鼠的脾细胞免疫CBA小鼠，取CBA小鼠的脾淋巴细胞加以灭活，制备成T细胞疫苗（TCV）备用；实验分为3组：组1：单纯移植组，以CBA小鼠作为受体，以B6小鼠作为供体，做原位肝移植。组2：用Flt3－L治疗的B6小鼠作为供体，以CBA小鼠作为受体，做原位肝移植。组3：用Flt3－L治疗的B6小鼠作为供体，以TCV免疫过的CBA小鼠作为受体，进行原位肝移植。组间比较移植物存活时间（MST）；测定肝移植小鼠血清中的IL－10、IL－4和IFN－γ水平；组内比较移植前后单向混合淋巴细胞反应（MLR）；分离移植物浸润细胞（ GICs）组间比较GICs凋亡率。结果：Flt3－L诱导了同种移植急性排斥反应，应用TCV于移植前和移植后可以显著抑制Flt3－L诱导的同种肝移植排斥反应。在没有Flt3－L刺激作用的情况下移植排斥反应非常轻微。肝移植小鼠血清中的IL－10、IL－4和IFN－γ水平检测发现，Flt3－L治疗组IFN－γ水平显著升高，IL－10、IL－4水平降低；TCV免疫组IL－10、IL－4水平显著升高，IFN－γ水平显著下降；单纯移植自动耐受组与TCV免疫组变化趋势一致。单向混合淋巴细胞反应（ MLR）显示：在单纯移植组，淋巴细胞增殖效应不明显，CPM为3318±1190；在Flt3－L治疗组，效应细胞增殖显著增强，CPM 为9790±1369，在TCV免疫组，TCV免疫加Flt3－L治疗，淋巴细胞增殖效应被显著抑制，CPM为4017±880。分离肝脏移植物内浸润细胞凋亡，TCV免疫组引起TIL凋亡率为（54．20±3．12）％，有效抑制了TIL引起的免疫排斥反应，诱导了免疫耐受。而在Flt3－L治疗组，TIL凋亡率为（3．34±2．49）％。结论：小鼠同种肝移植存在“自动耐受”现象；这种“自动耐受”现象的免疫平衡可以被Flt3－L打破，从而诱发急性排斥反应。针对排斥效应T细胞的特异性T细胞疫苗可以显著抑制Flt3－L诱导的同种肝移植排斥反应。
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T细胞疫苗免疫原性蛋白的免疫蛋白组学鉴定
为建立T细胞疫苗作用机制的免疫蛋白组学研究方法.以γ射线照射的活化小鼠卵清蛋白(ovaltmmin,OVA)特异性细胞系作为疫苗免疫同系BALB/c小鼠诱导抗活化态T细胞的体液免疫应答,加强免疫后,收集抗活化态T细胞抗血清.提取活化态T细胞蛋白进行双向电泳,结合二维western blot技术寻找能与抗活化态T细胞抗血清发生免疫反应的蛋白质.蛋白经胶内酶切后使用四极杆-飞行时间串联质谱(Q-TOF)鉴定了5个免疫反应蛋白点,对应于5种蛋白质.成功建立了T细胞疫苗的免疫蛋白组学研究方法,为寻找保护性抗原及研究T细胞活化调控机制的工作打下了基础.
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供者特异性T细胞疫苗延长同种肝移植存活及其机制的初步分析
为检测细胞因子(CK)在肝移植物中的表达,探讨供者特异性T细胞疫苗(TCV)延长同种肝移植存活的机制.术前分别用特异和非特异TCV免疫受者,另设单纯移植对照.大鼠原位肝移植后观察肝移植物的存活时间(MST);术后第7天获取移植物,作组织切片观察;通过RT-PCR检测肝移植物内IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达水平;进行混合淋巴细胞反应.结果发现供者特异性 LCTCV组MST(15.7±4.2)d比非特异性 LTCV组(11.3±2.7) d显著延长(P<0.01),而单纯移植组MST为(5.7±1.4) d(P<0.05);组织切片观察特异性 LCTCV组未发现明显排斥改变;与其他两组比较,特异性 LCTCV组MLR受到显著抑制(P<0.01); RT-PCR显示: 特异性 LCTCV组IL-4、IL-10 的表达水平显著高于其他两组, IL-2和IFN-γ在单纯移植组呈高表达,同时IFN-γ在非特异LTCV组有表达.实验表明:细胞因子网络调控在免疫耐受形成中发挥重要作用, IFN-γ和IL-2主要参与急性排斥反应, IL-4和IL-10促进同种耐受的形成,不同的微环境下同一种细胞因子所发挥的主要作用会有所变化.
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以T细胞应答过程为靶治疗自身免疫性疾病的策略进展
1 自身免疫性疾病(AID)1.1 自身免疫性疾病与免疫耐受免疫的一个重要功能就是对外界一切抗原以及机体内部正常组分作出识别和反应,真正区分外来抗原和自身组分(即对"非己"和"自己"的识别),以及在消除"非己"时对"自己"的保护(即免疫耐受).
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供体抗原特异性T细胞疫苗诱导大鼠移植心存活延长
采用大鼠异位(腹腔)心脏移植模型,使T细胞疫苗的提供者和接受者成为同一个体,探讨供体抗原致敏的T细胞疫苗接种对移植物存活期的影响,为其应用于临床防治排斥反应提供可行性依据.结果显示,T细胞疫苗可明显延长同种移植物的存活.注射T细胞疫苗后,虽然也使第三供体的移植心存活期明显延长(21.57±8.02天),但与特异供体移植心的存活期(40.75±25.15天)相比,有明显差异,证明其作用具有供体抗原特异性.本实验结果也表明使疫苗的提供者和接受者成为同一个体是可行的.
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T细胞疫苗在临床肾移植中的应用
目的探讨T细胞疫苗(TCV)的抗排斥作用及其在临床肾移植中应用的可行性.方法采取经供者抗原(外周血白细胞)致敏的肾移植受者的淋巴细胞在体外经过活化、扩增和灭活,制备T淋巴细胞疫苗,然后将其回注于自身,观察排斥反应发生情况.结果6例患者中,1例患者在输注TCV时出现发热反应.6例患者均未观察到急性排斥反应的发生.淋巴细胞毒及混合淋巴细胞反应在注射TCV前后无明显变化,PHA刺激的淋巴细胞增殖反应在注射TCV后得到增强.结论T细胞疫苗应用于临床器官移植防治排斥反应,无明显副作用,在技术路线上是可行的.
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T细胞疫苗联合FK506抑制异种神经移植排斥的实验研究
目的 研究T细胞疫苗接种联合应用FK506对大鼠异种神经移植排斥反应的抑制作用. 方法 利用BABL/c小鼠的脾细胞免疫SD大鼠,取后者脾细胞活化所制备的T细胞疫苗对异种神经移植受体的SD大鼠进行免疫,移植后联合应用FK506.以异种神经移植后混合淋巴细胞培养、微量细胞毒测定、移植神经的组织学观察和胫前肌湿重测定等,对该方法抗大鼠异种神经移植排斥反应的作用加以分析. 结果 和对照组相比较,T细胞疫苗接种联合FK506使神经移植大鼠胫前肌湿重明显增加(P＜0.05),淋巴细胞转化率等排斥反应指标差异也具有统计学意义(P＜0.05). 结论 T细胞疫苗接种联合应用FK506能显著抑制大鼠异种神经移植的免疫排斥反应.
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T细胞疫苗治疗肾移植急性排斥反应1例报告并文献复习
目的探讨T细胞疫苗(TCV)在临床肾移植中抗排斥反应作用的可行性.方法采取经供者抗原(外周血白细胞)致敏的肾移植受者的淋巴细胞在体外经过活化、扩增和灭活,制备T淋巴细胞疫苗,将其注射回自身,观察排斥反应的变化.结果患者肾移植术后一个月未出现排斥反应,淋巴细胞毒检测在注射T细胞疫苗前后无明显变化.结论T细胞疫苗应用于临床器官移植防治排斥反应,无明显副作用,在技术路线上是可行的.
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T细胞疫苗治疗小鼠H22肝癌的实验观察
目的:探讨T细胞疫苗(T cell Vaccine,TCV)治疗实验动物肿瘤的效应.方法:建立荷肝癌(H22)小鼠模型.14 d后,对实验组和对照组的荷瘤小鼠分别按1、3、10、17 d,4次行TCV或生理盐水治疗.观察小鼠的生存情况及病理组织学变化.结果:实验组小鼠于第4次TCV治疗后,肿瘤生长稳定,随后肿瘤出现缓慢缩小,其中7/8的小鼠在实施TCV治疗结束后35 d内,皮下肿瘤全部消退.生存天数均>100 d;对照组小鼠皮下肿瘤呈进行性增大,全部小鼠于接种活肿瘤细胞后45 d内死亡.病理组织学观察,实验组肿瘤组织大片坏死,癌巢周边炎细胞明显增多;对照组肿瘤组织中瘤细胞增生活跃,周边有少量炎细胞浸润.结论:TCV治疗小鼠H22肝癌能激发宿主抗肿瘤免疫反应,引起肿瘤坏死,消退,值得进一步研究.
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T细胞疫苗治疗晚期恶性肿瘤的临床观察
目的 探讨T细胞疫苗(TCV)治疗晚期恶性肿瘤的有效性和安全性.方法 用正常人外周血在体外常规分离出单个核细胞并培养诱导制成TCV.取这些TCV分别在21例无手术、放疗、化疗指征的晚期恶性肿瘤病人的双上肢前臂皮内分4点注射[左右各2点,每点0.25ml(108/ml)],每周1次,连用4周.结果 全组21例中,未见CR、PR病例;10例SD,11例PD;疾病控制率为47.62%(10/21).未见有明显的毒副作用.结论 TCV治疗晚期恶性肿瘤安全有效,值得进一步研究.
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小鼠CD25分子胞外段的原核表达载体的构建及表达鉴定
目的 构建小鼠CD25分子胞外段的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法 从BALB/c小鼠脾细胞中提取总RNA,利用RT-PCR方法获得CD25分子胞外段序列;将其亚克隆入原核表达载体PET-32a,构建好PET-32a-CD25胞外段,并进行酶切及测序鉴定;将PET-32a-CD25胞外段转染大肠杆菌BL21进行表达,并对表达产物进行纯化和鉴定.结果 RT-PCR扩增出708 bp的CD25胞外段的基因片段;pET32a-CD25胞外段/BL21经IPTG诱导后, SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带, 相对分子质量约为47×10~3,重组蛋白用镍树脂纯化后经Western blot检测显示具有良好的免疫反应性,并且可以在体外有效刺激自体T细胞疫苗免疫小鼠脾细胞的增殖并高分泌IL-4.结论 CD25胞外段蛋白在原核细胞中成功表达, 纯化后的蛋白保持良好的免疫反应性.
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T细胞疫苗对HCV的清除作用
1 材料和方法1.1 材料 雌性BALB/c小鼠(H-2d) 5～6 wk龄; P815细胞(H-2d,仅表达MHC Ⅰ类抗原,不表达MHCⅡ类抗原);SP2/0(H-2d)细胞;表达丙型肝炎病毒(HCV)结构蛋白的质粒载体pcDNA-C、pcDNA-CE1、pcDNA-CE1E2[1];腺病毒表达载体pAd.HCV-C、pAd.HCV-CE1、pAd.HCV-CE1E2[2];Na51CrO4;抗CD8+单克隆抗体;小鼠抗HCV C单克隆抗体;重组鼠源性IL-2;2-巯基乙醇等.
