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抑制自噬对艾塞那肽诱导的AR42J细胞凋亡的影响
目的 探讨艾塞那肽对AR42J细胞株的损伤及其可能机制.方法 1、5、10 pmol/L艾塞那肽处理AR42J细胞株24、48、72、96、120 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,筛选佳浓度和时间作为后续实验条件.设置空白对照组(NC)、艾塞那肽组(Ex-4)和Ex-4+z-VAD-fmk组,检测艾塞那肽是否可直接导致AR42J细胞凋亡;设置NC组、Ex-4组、3-MA组和Ex-4+ 3-MA组,探究3-MA能否抑制艾塞那肽诱导的AR42J细胞凋亡.3-MA为自噬抑制剂,z-VAD-fmk为凋亡抑制剂.细胞活力检测采用MTT法.流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3等凋亡相关蛋白以及微管相关蛋白轻链3(LC3)自噬相关蛋白表达.结果 以10 pmol/L艾塞那肽作用72 h为后续实验条件.z-VAD-fmk预处理可明显抑制艾塞那肽的细胞毒性,两组细胞活力为(49.4±3.0)％比(81.2±3.3)％,差异有统计学意义(P＜0.05).Ex-4组细胞凋亡率(28.2±1.4)％,高于NC组的(3.6±0.8)％,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot也显示caspase-3表达明显上调,而z-VAD-fmk预处理则可明显抑制艾塞那肽引起的细胞凋亡和caspase-3表达增加.3-MA预处理可明显抑制艾塞那肽的细胞毒性,处理72 h两组细胞活力为(49.8±2.5)％比(79.1±2.3)％,差异有统计学意义(P＜0.05).Ex-4组细胞凋亡率为(29.2±3.2)％,高于Ex-4+3-MA组的(14.5±2.1)％,差异有统计学意义(P＜0.05).Westernblot结果表明艾塞那肽可上调LC3B-Ⅱ、p62和caspase-3的表达,而3-MA预处理则可明显抑制艾塞那肽引起的LC3B-Ⅱ和caspase-3上调,但p62的表达却进一步上调.结论 艾塞那肽可诱导AR42J细胞凋亡,3-MA可通过抑制自噬而抑制艾塞那肽诱导的凋亡.使用3-MA可作为减轻艾塞那肽对胰腺腺泡细胞毒性的一种潜在方法.
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自噬抑制剂可增强三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468和MDA-MB-231对吉非替尼的敏感性
目的：观察自噬抑制剂能否增强三阴性乳腺癌（ TNBC）细胞系MDA?MB?468和MDA?MB?231对表皮生长因子受体（ EGFR）抑制剂吉非替尼的敏感性。方法以吉非替尼单药或联合自噬抑制剂3?甲基腺嘌呤（3?MA）或巴弗洛霉素A1（BAF）处理MDA?MB?468和MDA?MB?231细胞，以及雌激素受体阳性的MCF?7细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot法检测自噬标记蛋白以及凋亡通路相关蛋白的表达。结果吉非替尼对吉非替尼＋3?MA组和吉非替尼＋BAF组MDA?MB?468细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为（4．1±0．2）μmol／L和（3．8±0．3）μmol／L，均明显低于吉非替尼组MDA?MB?468细胞[（7．0±0．2）μmol／L，均P＜0．05]。吉非替尼对吉非替尼＋3?MA组和吉非替尼＋BAF组MDA?MB?231细胞的IC50分别为（9．7±0．1）μmol／L和（7．7±0．2）μmol／L，均明显低于吉非替尼组MDA?MB?231细胞[（14．7±0．1）μmol／L，均P＜0．05]。吉非替尼组、吉非替尼＋3?MA组、吉非替尼＋BAF组MDA?MB?468细胞的凋亡率分别（12．43±3．18）％、（23．37±2．71）％和（18．71±2．81）％，吉非替尼联合自噬抑制剂3?MA或BAF时，MDA?MB?468细胞的凋亡率均明显高于单用吉非替尼时的凋亡率（均P＜0．05）。吉非替尼组、吉非替尼＋3?MA组、吉非替尼＋BAF组MDA?MB?231细胞的凋亡率分别为（12．15±1．82）％、（16．94±2．19）％和（33．83±5．92）％，吉非替尼联合自噬抑制剂3?MA 或 BAF 时， MDA?MB?231细胞的凋亡率均明显高于单用吉非替尼时的凋亡率（均P＜0．05）。吉非替尼联合3?MA或BAF对MCF?7细胞的凋亡无明显影响（ P＞0．05）。吉非替尼联合3?MA或BAF后，MDA?MB?468和MDA?MB?231细胞中p?PTEN的表达明显增加，LC3和p?Akt蛋白表达明显下调，cleaved caspase?9和cleaved caspase?3蛋白的活性增加。结论自噬抑制剂可能通过激活PTEN／PI3K／Akt 通路相关蛋白的表达增强MDA?MB?468和MDA?MB?231细胞对吉非替尼的敏感性；自噬抑制剂联合吉非替尼可能通过启动caspase级联反应促进MDA?MB?468和MDA?MB?231细胞凋亡。
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自噬与肿瘤防治新策略
自噬是细胞清除并回收利用错误折叠的蛋白及受损细胞器而维持细胞稳态的分解代谢过程。这一过程与包括肿瘤在内的许多疾病有密切的关联，现已成为癌症研究的热点。自噬既具有肿瘤抑制功能，在化疗中又能保护肿瘤细胞。近年来，在自噬相关蛋白中，对自噬形成起到关键作用的液泡分选蛋白34（VPS34）受到了广泛关注，已和自噬一起成为肿瘤防治和抗肿瘤药物筛选靶标。近，3个 VPS34的特异性抑制剂 PlK-Ⅲ，VPS34-lN1和 SAR405相继面世，它们可能对自噬的抑制及肿瘤干预具有独特的影响。本文介绍了自噬在肿瘤中扮演的不同角色和 VPS34在自噬中的功能调控，还讨论了以自噬及 VPS34为靶标的抑制剂研究新进展及其在肿瘤防治中的应用前景。
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自噬在肝脏疾病中的作用研究进展
自噬是将细胞内受损、变性或衰老的蛋白质以及细胞器运输到溶酶体进行消化降解的细胞自我消化过程。自噬普遍存在于机体细胞中，往往在营养缺乏、低氧等特定环境以及细胞内应激(损伤的细胞器、细胞内突变的蛋白、微生物入侵等)状态下发生。近年来研究发现，自噬在许多肝脏疾病的发生、发展中起重要作用，该文就相关研究进展予以综述。
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自噬机制在肿瘤化疗中的研究进展
自噬是一把双刃剑:一方面过度的自噬可诱导自噬性细胞死亡,另一方面自噬对肿瘤细胞有保护作用,通过将自身坏死的细胞器和错误折叠的蛋白质降解,重新利用养分维持癌细胞生存,造成了对化疗药物的耐受,自噬抑制剂可增加肿瘤对化疗药物的敏感性,因此,抑制自噬联合化疗药物治疗将在肿瘤的治疗方面有很大的前景.
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自噬在血管性痴呆发病中的作用研究
目的 研究自噬在血管性痴呆(VD)发病中的作用及自噬抑制剂对其的影响.方法 180只SD大鼠随机分为假手术组、VD组和自噬抑制剂干预组(自噬抑制剂组),每组又分为术后1、2、4、8、12周亚组.采用四血管阻断法制作VD大鼠模型,自噬抑制剂组大鼠在术前1h给予渥曼青霉素0.5 mg/kg腹腔注射.用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力;免疫组化SP法检测大鼠海马CA1区自噬相关蛋白Bec-lin-1、Cathepsin B的表达,Western-blotting法检测自噬活性微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ与Ⅰ的比值.结果 与假手术组比较,VD组和自噬抑制剂组各亚组大鼠的学习、记忆能力明显降低;海马CA1区Beclin-1、Cathepsin B蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值明显升高(P ＜0.05 ～0.01),并均以术后第4周为高.而自噬抑制剂组各亚组大鼠的学习、记忆能力明显好于,海马CA1区Beclin-1、Cathepsin B蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值明显低于VD组(P ＜0.05～0.01).结论 VD大鼠的认知功能减退,海马自噬相关蛋白表达及自噬活性明显增高;自噬抑制剂对其有改善及抑制的效果.自噬在VD发病中起了重要的作用.
关键词： 血管性痴呆 自噬 自噬相关蛋白 微管相关蛋白1轻链3 自噬抑制剂 -
多种细胞自噬调节剂对自噬标记物LC3Ⅱ及p62表达的影响
利用Western杂交检测自噬标记物LC3Ⅱ和p62的表达是评价细胞自噬活性的常用方法.为了比较作用于不同靶点的细胞自噬调节剂对LC3Ⅱ和p62表达的影响,分别利用以mTOR依赖或非依赖方式活化细胞自噬的雷帕霉素或海藻糖、抑制自噬起始的3-甲基腺嘌呤、抑制自噬小体与溶酶体融合的巴弗洛霉素A1 以及抑制溶酶体酶活性的E64d和pepstatin A处理HEK293细胞,通过Western杂交检测LC3Ⅱ和p62的表达.结果显示,雷帕霉素增强LC3I向LC3Ⅱ转化,促进p62 降解,而海藻糖仅引起LC3Ⅱ表达的上调;阻断细胞自噬过程各个阶段均导致LC3Ⅱ和p62 堆积,并呈现出剂量和时间依赖性.这些结果提示尽管LC3Ⅱ和p62均为自噬标记物,但不同的调节剂对其表达的调控存在差异.
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低剂量阿司匹林诱导产生的自噬减弱其对人肝癌HepG2细胞系的抑制作用
目的 研究一定浓度的阿司匹林对人肝癌HepG2细胞系的增殖抑制作用及产生抑制作用可能的原因.方法 采用MTT法和平板克隆实验研究阿司匹林对人肝癌HepG2细胞增殖活力的影响.吖啶橙荧光染色法观察阿司匹林对人肝癌HepG2细胞内自噬小体的影响.Western blot法检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在人肝癌HepG2细胞中的表达.结果 10 mmol/L浓度的阿司匹林能抑制人肝癌HepG2细胞的增殖活力,但增加HepG2细胞中自噬小体的数量,增加AMPK表达,降低 mTOR的表达,且和40 μm自噬抑制剂氯喹(CQ)联合使用时,CQ能够增强10 mmol/L浓度阿司匹林对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用.结论 联合自噬抑制剂CQ减弱浓度为10 mmol/L的阿司匹林诱导产生的自噬从而明显增强其抗HepG2作用.
关键词： 阿司匹林 人肝癌HepG2细胞 自噬 自噬抑制剂 -
自噬抑制剂在内质网应激状态下对肝癌HepG2细胞和正常肝细胞L-02作用的差异
目的：研究自噬在内质网应激( ERS)状态下对肝癌HepG2细胞和正常肝细胞L-02作用的差异。方法体外常规培养的人肝癌HepG2细胞和正常肝细胞L-02,分别给予衣霉素( TM)单药和TM联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤( TM+3-MA)或氯喹( TM+CQ)作用12、24、48 h后,采用噻唑蓝( MTT)法检测细胞活力变化,流式细胞术检测细胞凋亡率, Western blot法检测自噬蛋白LC3的变化。结果 TM可引起HepG2细胞和L-02细胞死亡并呈时间依赖关系,3-MA或CQ均可增加TM对HepG2细胞的生长抑制作用,24 h细胞存活率分别为TM+3-MA组(60%)、TM+CQ组(72%)、TM组(86%),差异有统计学意义(P<0．01)；但对于L-02细胞,其存活率分别为83%、84%、83%,活力没有明显差异；流式细胞术显示TM+3-MA、TM+CQ和TM组对HepG2细胞的凋亡率分别为15%、11%、7%,差异有统计学意义( P<0．01),但对L-02细胞,凋亡率分别为16%、17%、16%,未见明显差异；Western blot法结果显示TM作用引起两种细胞自噬增加,自噬抑制剂3-MA与CQ可引起两种细胞自噬作用减弱。结论自噬抑制剂(3-MA 或 CQ)均可显著增加TM对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,但对正常肝细胞L-02的生长抑制作用差异无统计学意义。自噬在ERS状态下可对肝癌细胞的生存提供保护,但对正常肝细胞无保护作用。
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自噬在肿瘤治疗中的研究进展
虽然尚难定论自噬究竟引起细胞死亡还是维持生存，但是越来越多的报道表明，在接受放射性治疗或化学药物治疗后，自噬能促进肿瘤细胞生长［1－4］。而给予自噬抑制剂如3－甲基腺嘌呤（3－methyladenine）、氯喹（chloroquine），或者敲降自噬相关基因如 Atg －7、Beclin1，可以使在化疗或放疗中产生抵抗的数种肿瘤重获敏感性。因此，自噬有可能是下一种极具开发潜力的抗肿瘤药物靶点。
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饥饿诱导的细胞自噬可以引起 UVRAG 的降解
目的：观察细胞发生自噬后 UVRAG 水平的改变及其与自噬发生的关系。方法用 Western 印迹检测饥饿诱导细胞自噬后 UVRAG 分子的水平改变，然后分别应用自噬起始阶段与效应阶段的抑制剂抑制自噬，检测自噬不同阶段 UVRAG 分子的水平变化；结果饥饿促进了细胞 LC3的型别转换和 P62的降解，诱导细胞发生自噬；3-MA 抑制细胞自噬及 E64d 和 pepstatin 抑制自噬溶酶体活性后， UVRAG 的降解减少；结论饥饿诱导细胞自噬在形成自噬溶酶体后引起了 UVRAG 的降解。
关键词： 饥饿 自噬 紫外辐射抗性相关蛋白 自噬抑制剂 -
自噬抑制剂与乳腺癌治疗的研究现状
自噬是存在于真核生物体内高度保守的过程,能够降解受损蛋白质及细胞器,并回收利用降解产物帮助细胞度过应激状态.自噬在肿瘤的发生发展中具有双重作用.一方面,在肿瘤的起始阶段,自噬通过抑制基因突变及活性氧的产生抑制肿瘤的发生.另一方面,自噬通过促进肿瘤血管生成,清除和循环利用细胞内损伤的蛋白质和细胞器,为肿瘤细胞提供有利的生存条件,而促进肿瘤的发生发展.同时,自噬可能促进肿瘤细胞对放化疗等传统治疗方法的抵抗,导致肿瘤耐药性的产生.近有研究显示,自噬抑制剂氯喹联合放化疗或内分泌治疗能够有效增强抗癌疗效,这种联合方案有望成为一种新的更有效的治疗乳腺癌的方法.因此,本文就自噬抑制剂氯喹运用于乳腺癌治疗的研究现状进行综述.
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保护性自噬对吉祥草皂苷RCE-4诱导的人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的抑制作用
目的:明确甾体皂苷RCE-4处理Ca Ski细胞后诱导细胞发生自噬,并探讨自噬对RCE-4诱导的细胞凋亡的影响.方法:光学显微镜观查自噬抑制前后细胞形态的变化,透射电镜观察RCE-4诱导Ca Ski细胞自噬以及凋亡之后细胞形态的变化;MTT法检测自噬活性抑制之后RCE-4细胞毒活性变化;流式细胞仪检测自噬抑制之后细胞凋亡率的变化.结果:MTT结果表明,自噬抑制剂3-MA存在的情况下,RCE-4的细胞毒活性明显增强,RCE-4浓度为5μM时,自噬抑制之后,抑制率由93％降低至66％,CaSki细胞的IC50由5.1μM下降至2.6μM,流式细胞仪检测自噬抑制之后细胞凋亡率的变化发现,细胞凋亡率由12.1％增加到23.0％.结论:RCE-4诱导的Ca Ski细胞保护性自噬对其诱导的细胞凋亡具有抑制作用.
关键词： 吉祥草皂苷RCE-4 自噬 凋亡 自噬抑制剂 -
抑制自噬起始阶段增强喜树碱诱导的NCI-H1975人肺腺癌细胞凋亡
目的 研究自噬抑制剂氯喹(CQ)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)对喜树碱(CPT)诱导非小细胞肺腺癌NCI-H1975细胞凋亡的影响.方法 通过CPT处理肺腺癌NCI-H1975细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性,碘化丙啶(PI)染色观察细胞形态学的变化,流式细胞术检测CPT作用于NCI-H1975细胞后细胞的凋亡情况,Western blot法检测自噬及凋亡相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3 Ⅰ)和LC3Ⅱ、P62、胱天蛋白酶3(caspase-3)和多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白水平.结果 CPT处理后,LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ的比例增加;caspase-3和PARP发生明显降解;且这种降解作用能被3-MA增强而被CQ抑制.而且发现CPT处理后,引起细胞内TGF-β1降低.结论 抑制NCI-H1975细胞自噬起始阶段后,增强CPT诱导细胞凋亡的敏感性.
关键词： 喜树碱 NCI-H1975细胞 细胞凋亡 自噬 自噬抑制剂 -
天然草药—癌症治疗中的潜在自噬诱导剂
自噬是一种维持细胞内稳态的重要代谢过程.近年来研究发现,自噬与肿瘤的发生发展密切相关,参与调控肿瘤的形成、增殖、转移以及能量代谢等过程.并且自噬在肿瘤的发生发展中发挥着不同的作用,它能抑制早期肿瘤的生成,促进晚期肿瘤的发展.目前,自噬已成为肿瘤药物靶向研究中的一个新热点.许多草药,包括中草药,已作为现行药物的补充和替代药物、保健品和营养品,以减轻癌症治疗中化疗药物的毒副反应.此外,许多草药及天然产物均可通过诱导自噬,进而导致细胞衰老、凋亡非依赖性细胞死亡途径或补体介导的细胞凋亡途径的激活,终发挥着抗肿瘤作用.据此,本文将回顾分析天然自噬诱导剂在癌症治疗中的潜在作用机制.同时,我们着重探讨白藜芦醇、姜黄素和16-羟基克罗烷-3,13-二烯-15,16-内酯这三种天然化合物作为候选自噬诱导剂在癌症治疗中的研究进展,旨在为研发靶向自噬的新型抗肿瘤药物提供方向.
