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小睑裂综合征家系FOXL2基因的突变研究
目的 对一个常染色体显性遗传的小睑裂综合征家系4代12例患者,及家系中12例正常成员和80例正常对照的FOXL2基因进行研究.方法 设计合成FOXL2基因特异引物应用聚合酶链反应(PCR)扩增FOXL2基因,PCR产物直接测序.结果 该家系所有患者的FOXL2基因892C＞T,为无义突变.在正常人的FOXL2基因中未发现突变.结论 FOXL2基因的突变可能是该家系中小睑裂综合征重要的致病因素.
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先天性小睑裂综合征中p.Y225X突变对FOXL2功能的影响
目的 研究p.Y225X突变对FOXL2功能的影响,探讨先天性小睑裂综合征(BPES)的可能发病机制.设计 实验研究.研究对象正常和p.Y225X突变的FOXL2基因.方法 克隆正常和p.Y225X突变的FOXL2基因编码序列,连接入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1,构建融合绿色荧光蛋白的表达载体,转染COS7细胞,在共聚焦显微镜下比较正常和突变型FOXL2在细胞内定位的差异.将正常和突变基因的编码序列克隆入pcDNA3.1-myc-his(-)B真核表达载体,转染HEK-293T细胞和KGN细胞后提取蛋白,用蛋白印迹法验证其过表达；同时提取细胞RNA和蛋白,用RT-PCR和蛋白印迹法分别检测OSR2和StAR在RNA和蛋白水平的改变.主要指标荧光蛋白在细胞内的定位,目的RNA和蛋白的表达量.结果 成功构建了FOXL2及其突变体的绿色荧光蛋白融合表达质粒和融合myc/his标签的真核表达质粒,经蛋白印迹法验证了FOXL2及其突变体在HEK-293T和KGN细胞内的过表达.正常FOXL2均匀分布于细胞核内,而发生p.Y225X突变的FOXL2突变体蛋白则均匀分布于细胞质和细胞核中.正常FOXL2可降低KGN细胞内StAR的RNA和蛋白表达量,而p.Y225X突变使其对StAR转录表达的抑制作用明显减弱.正常FOXL2可提高HEK-293T细胞内OSR2的RNA和蛋白表达量,而突变型FOXL2对OSR2的促进作用明显减弱.结论 p.Y225X突变使FOXL2分子在细胞内异常定位于细胞质,对靶基因OSR2和StAR的调控作用减弱,可能是导致Ⅰ型BPES的重要因素.
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中国人睑裂狭小综合征Ⅰ型患者大家系FOXL2基因突变检测
目的 研究分析中国人睑裂狭小综合征(BPES)Ⅰ型患者的一个大家系共4代19例的FOXl2基因突变,以明确突变位点及突变类型,确定临床表型与基因型之间的对应关系.方法 采集一个中国人BPES Ⅰ型大家系19例样本外周静脉血EDTA抗凝血样5ml,提取基因组DNA,共设计7对引物,应用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序技术对FOXL2基因的外显子和启动子区进行突变筛查.结果 该家系中8例患者均检测到FOXL2基因突变,为1002C>G无义突变,11例家系健康人中均无此突变.结论 首次在中国人BPES Ⅰ型大家系患者中发现FOXL2基因1002C>G无义突变,提示该突变可能是BPES综合征I型的致病机制之一.
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人类FOXL2基因突变谱的系统性研究
目的：通过对人类FOXL2基因突变谱研究，确定FOXL2基因突变分型及其与小睑裂综合征的相关性。方法：收集所有的突变，并对这些突变进行统计学处理并分类，进行蛋白表达谱分析，各功能区分析以及患者的临床特征与突变相关性分析。结果：根据分析，将FOXL2基因突变分为10型，各分型与小睑裂综合征患者的临床特征关系各不相同。单纯性卵巢功能早衰患者及单纯性上睑下垂患者与FOXL2基因突变无密切相关性。结论：FOXL2的突变与BPES发病密切相关，多聚丙氨酸区域的丧失与Ⅰ型BPES密切相关。FOXL2的突变与单纯性POF及上睑下垂的发病关系并不密切。
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卵巢储备功能与辅助生殖技术治疗结局
卵巢储备功能与女性生育力息息相关.辅助生殖技术(ART)为越来越多不孕妇女解决了生育问题.影响ART成功的因素很多,其中卵巢储备能力起着重要作用.卵巢储备的评估不仅能预测辅助生殖治疗的预后,而且对有效控制超排卵用药具有指导作用.卵巢储备与许多因素有关,包括:年龄、生活习惯、激素水平、抗苗勒管激素、卵巢形态及刺激试验等.
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卵巢颗粒细胞瘤中Ki67和FOXL2的表达与临床病理参数的关系
目的 探讨卵巢颗粒细胞瘤中增殖细胞相关核抗原(Ki67)和FOXL2的表达及意义.方法 采用免疫组化EnVi-sion二步法检测Ki67和FOXL2在37例卵巢颗粒细胞瘤中的表达,并分析与临床病理参数的关系.结果 随临床分期升高卵巢颗粒细胞瘤组织中Ki67和FOXL2表达水平均升高(P<0.05),核分裂相≥3/HPF组中的表达明显高于核分裂相<3/HPF组(P<0.05);在复发组中Ki67表达高于原发组(P<0.05);在成年型卵巢颗粒细胞瘤中弥漫型组的Ki67和FOXL2表达高于滤泡型组(P<0.05).结论 Ki67和FOXL2可以作为卵巢颗粒细胞瘤的辅助诊断指标,测定它们的表达可为诊断及判断预后提供理论依据.
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冬凌草甲素联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞凋亡及FOXL2、Ki67表达的影响
目的 观察冬凌草甲素(ORI)联合顺铂(DDP)对宫颈癌细胞SiHa细胞凋亡的影响,并探究具体作用机制.方法 培养宫颈癌SiHa细胞,分别给予冬凌草甲素(4、8、16、32、64 μg/mL)、顺铂(1、2、4、8、16 μg/mL)单独作用12、24、36、48、60、72 h,采用偶氮唑蓝(MTT)法对细胞增殖情况进行检测,筛选合适作用浓度和作用时间.将宫颈癌SiHa细胞分为4组:对照组、冬凌草甲素组、顺铂组、冬凌草甲素联合顺铂组,药物作用48 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况;采用流式AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡情况;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测FOXL2、Ki67 mRNA水平;采用免疫印记(WB)法检测FOXL2、Ki67蛋白水平.结果 选定冬凌草甲素32 μg/mL、顺铂4μg/mL进行用药;与对照组比较,冬凌草甲素、顺铂单独及联合用药均可明显降低SiHa细胞增殖指数(P＜0.05),且联合用药效果显著优于单独用药(P＜0.05);与对照组比较,冬凌草甲素、顺铂单独及联合用药均可显著促进细胞凋亡(P＜0.05),且联合用药效果显著优于单独用药(P＜0.05);与对照组比较,单独及联合用药组SiHa细胞FOXL2 mRNA和蛋白水平均明显升高,且联合用药组显著高于单独用药组(P＜0.05);与对照组比较,单独及联合用药组Ki67 mRNA和蛋白水平均显著下降,且联合用药组显著低于单独用药组(P＜0.05).结论 冬凌草甲素、顺铂联合用药可有效促进SiHa细胞凋亡,推测冬凌草甲素可能通过上调FOXL2表达,下调Ki67表达,协同促进顺铂对宫颈癌细胞的促凋亡作用.
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成人卵巢颗粒细胞瘤和FOXL2C134W突变的研究进展
卵巢颗粒细胞瘤(GCTS)约占卵巢恶性肿瘤的2％～5％,是常见的恶性性索间质肿瘤(SCST)[1-3].根据组织学特征将GCTS分为两种不同的组织学亚型,成人型卵巢颗粒细胞瘤(AGCTS)和幼年型卵巢颗粒细胞瘤(JGCTS)[4].其相对罕见且需要长期随访,无法进行大规模的前瞻性研究,因此,有关患者的佳管理和治疗策略的资料尚有不足[5-6].研究[2-3,7]发现95％ ～ 97％的AGCTS患者存在FOXL2基因突变,FOXL2基因突变成为AGCTS研究的重要方向,本文即对AGCTS的临床处理现状及FOXI2基因突变的研究进展进行综述.
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来航鸡FOXL2蛋白单克隆抗体的制备
目的:制备来航鸡FOXL2蛋白的单克隆抗体.方法:利用生物信息学的方法分别预测来航鸡FOXL2蛋白有可能的线性表位,并人工合成多肽,高效液相色谱分析其纯度,与KLH偶联后免疫小鼠制备其单克隆抗体,用间接ELISA方法和免疫印迹进行筛选,然后对筛选出来的细胞株进行一般性质测定、亲和常数测定、IC50测定.结果:合成多肽纯度＞95%,细胞融合后,其平均融合率为75%,并用间接ELISA方法和Western blot筛选出1条可与FOXL2蛋白发生明显反应的细胞株C2;经测定,C2细胞株上清效价为1/128,腹水效价为1/256,其亚型属于IgG1,杂交瘤细胞染色体为102条,腹水单抗的蛋白含量为1.576 g/L,其亲和常数为2.12×106 L/mol,IC50值为0.082 47 μg/L.结论:成功制备了FOXL2蛋白单克隆抗体,为下一步深入研究FOXL2蛋白奠定基础.
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小睑裂综合征致病基因研究进展
小睑裂综合征是常染色体显性遗传疾病,迄今为止,用连锁分析及细胞遗传学分析方法对小睑裂综合征家系进行了基因定位和致病基因的突变分析.本文就近年来在小睑裂综合征基因研究方面作一综述.
关键词： 小睑裂综合征(BPES) 连锁分析 3q23 FOXL2 -
睑裂狭小、倒转型内眦赘皮和上睑下垂综合征基因的定位与克隆研究进展
睑裂狭小、倒转型内眦赘皮和上睑下垂综合征(BPES)是一种少见的常染色体显性遗传病,细胞遗传学及家系连锁分析均将BPES基因定位于3q23.近BPES候选基因(FOXL2)已被定位克隆,BPES Ⅰ型和Ⅱ型患者均有FOXL2突变.
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先天性小睑裂综合征的病因及临床诊疗进展
先天性小睑裂综合征是一种少见的常染色体显性遗传疾病,典型的临床表现为睑裂狭窄、上睑下垂、逆向性内眦赘皮和内眦间距增宽四联症.其致病基因为FOXL2,定位于3q23.由于多种畸形存在,小睑裂综合征的手术治疗比较复杂.本文就近年来该病在病因、临床表现和手术治疗等方面的研究进展做一综述.
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FOXL2是卵巢性索-间质肿瘤一种敏感和特异性标记物
卵巢性索-间质肿瘤(SCST)相对少见,约占所有卵巢原发性肿瘤的8%.根据细胞来源,SCST可分为5种主要类型.由于SCST形态学变异非常大,有时可有非典型性,且其发病率低,因而仅凭形态学难以对这类肿瘤进行明确诊断和分类.
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FOXL2对IVF周期卵巢反应性的影响
目的:探讨FOXL2在人卵巢黄素化颗粒细胞表达与IVF周期超促排卵过程中卵巢反应性的关系.方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定84例体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中卵巢黄素化颗粒细胞FOXL2 mRNA的表达.结果:卵巢低反应型(卵泡数≤3个)FOXL2 mRNA表达量显著低于中反应型(卵泡数4～13个)和高反应型(卵泡数≥14个)(P<0.05);FOXL2表达强度与血清基础FSH呈负相关(r=﹣0.46,P<0.05).结论:卵巢颗粒细胞上FOXL2水平影响体外受精-胚胎移植过程中卵巢对促性腺激素的反应.卵巢颗粒细胞上FOXL2表达水平与卵巢储备功能有关,卵巢功能下降可能与卵巢颗粒细胞上FOXL2表达水平降低有关.
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小睑裂患者眼睑和血液中FOXL2表达水平的研究
目的 探讨小睑裂综合征(BPES)患者眼睑和血液中FOXL2 mRNA的相对表达水平与BPES的相关性.方法 收集小睑裂综合征患者(A组)和正常人(B组)的眼睑组织和外周静脉血液.TRIzol提取总RNA,反转录为cDNA.应用荧光定量PCR技术检测FOXL2的相对表达量,方差分析和t检验分析数据差异,Livak(2-△△Ct)法分析表达差异.结果 FOXL2 mRNA的表达水平在A,B两组间的差异均具有统计学意义,P<0.05.无论是在眼睑还是在血液中A组FOXL2的△Ct值大于B组,可以认为FOXL2的表达水平为 A组低于B组,且两者具有一致性.结论 FOXL2与BPES具有一定相关性,FOXL2在眼睑和血液中的低表达可能与BPES的发病相关.
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FOXL2评估卵巢储备功能的临床应用
女性出生时约有100万个卵子,青春期初潮时减至30～50万,随着年龄的增长,"卵泡池"逐渐耗竭,但卵巢的储备功能却因人而异,血清抑制素B(inhibin B,INHB)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradial,E2)、抗苗勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)测定及超声评估窦状卵泡数目(antral follicle count,AFC)等都是目前评估卵巢储备功能的常用方法.
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卵泡液FOXL2与卵巢反应的相关性
目的 探讨卵泡液FOXL2在超促排卵周期中与卵巢对外源性促性腺激素(Gn)反应的相关性.方法 将231例长方案超促排卵周期治疗的不孕患者按照Gn用量分为4组,A组(<2000 IU)、B组(2000~2999 IU)、C组(3001~3999 IU)、D组(≥4000 IU).收集患者卵泡液采用ELISA双抗体夹心法检测FOXL2的浓度.结果 随着Gn用量的增加,卵泡液FOXL2表达逐渐降低,组间差异有统计学意义(P<0.05).各组间Gn用量越高,患者优质胚胎率越低,差异有统计学意义(P<0.05).临床妊娠率随Gn用量增加呈下降趋势,由于样本量限制,差异无统计学意义.结论 超促排卵周期卵泡液FOXL2水平与卵巢反应性呈正相关.高水平的FOXL2可能预示着更好的临床结局.
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microRNA-133b调节FOXL2基因的表达促进Hela细胞的增殖
目的:探讨microRNA-133b(miR-133b)是否调控FOXL2基因的表达,阐明miR-133b及FOXL2在Hela细胞(宫颈癌细胞)中的具体作用机制.方法:生物信息学方法分析miR-133b是否靶向作用于FOXL2基因.体外培养Hela细胞,分实验组(miR-133b组)和对照组(negative control组,NC组),分别瞬时转染miR-133b及NC mimics,48 h后用Trizol及RIPA法分别提取细胞总RNA及总蛋白,RT-PCR技术检测两组FOXL2 mRNA的表达水平,Western Blot技术检测两组FOXL2蛋白的表达水平,MTT法连续7d分别测两组Hela细胞的增殖活力.结果:miR-133b可能作用于FOXL2 mRNA 3'UTR区域.实验组FOXL2mRNA和FOXL2蛋白表达水平较对照组均明显降低(P＜0.01),实验组Hela细胞的增殖活力较对照组明显增强(P＜0.01).结论:过表达的miR-133b通过结合并影响Hela细胞中FOXL2 mRNA靶向抑制FOXL2蛋白的表达促进Hela细胞的增殖,这可能为宫颈癌的诊疗提供作用靶点.
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FOXL2在正常宫颈及宫颈癌组织中的表达及临床意义
目的：研究转录因子FOXL2在正常宫颈组织及宫颈癌组织中的表达,探讨其在宫颈癌中的临床意义。方法免疫组化法检测10例正常宫颈和18例宫颈癌组织(10例Ⅰ期,8例Ⅱ+Ⅲ期)中FOXL2的表达情况,分析比较其表达与临床特征的关系。结果 FOXL2在正常宫颈组织中表达为0,在18例宫颈癌组织FOXL2阳性表达率为72．2%(13/18),其中宫颈癌I期阳性表达率50%,Ⅱ期及Ⅲ期阳性表达率为100%。 FOXL2表达与宫颈癌临床分期、病理分级相关( P<0．05),而与宫颈癌患者的年龄无明显相关( P>0．05)。结论 FOXL2表达水平与宫颈癌恶性度呈正相关,且随着宫颈病变进展,FOXL2的阳性表达率呈递增趋势。
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microRNA-130a抑制KGN细胞FOXL2基因的表达及对细胞增殖的影响
目的：研究外源性microRNA-130a在卵巢颗粒细胞KGN中过表达对FOXL2基因表达的影响，探索microRNA-130a对KGN细胞增殖的影响。方法：人工设计合成靶向FOXL2基因的microRNA-130a模拟物，脂质体法将microRNA-130a模拟物转染入KGN细胞中，Trizol法和RIPA蛋白裂解法分别获取高纯度的细胞总RNA和总蛋白，实时荧光定量聚合酶联反应（FQ-PCR）检测microRNA 模拟物转染后细胞中FOXL2基因mRNA 表达水平，Western Blot 检测FOXL2蛋白表达水平，四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测microRNA-130a转染后KGN细胞的增殖情况。结果：成功转染KGN细胞后，阴性对照组FOXL2基因mRNA和蛋白的表达水平与空白对照组相比无明显的差异(P>0.05)，miR-130a转染组能显著抑制FOXL2 mRNA和蛋白的表达，与空白对照组和阴性对照组相比均有统计学差异（P<0.05）。MTT法检测各组KGN细胞的OD值及细胞增值率，microRNA-130a转染后能明显促进KGN细胞的增殖，与与空白对照组和阴性对照组相比均有统计学差异（P<0.05）。结论：外源性的miR-130a对FOXL2基因mRNA和蛋白表达有明显的抑制作用，且能明显促进KGN细胞的增殖。
