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氯化锂-匹鲁卡品慢性点燃模型脑中腺苷受体表达失衡的动态研究
目的 探讨慢性点燃癫癎大鼠脑内腺苷受体A1(AIR)及A2a(A2aR)表达的动态演变,评价腺苷受体表达改变在癫癎发病机制中的作用.方法 选用氯化锂-匹鲁卡品慢性点燃小鼠模型,分为模型组、对照组和正常组.采用逆转录PCR(RT-PCR)、免疫荧光及Western blot监测发作后24 h,1、6个月时,脑内AlR、A2aR表达的动态改变.结果 点燃后24 h,小鼠脑内A1R表达增高[受体mRNA(1.1483±0.1182);Western blot(0.7872±0.0621);免疫荧光阳性细胞(76.17±4.62)个/高倍镜视野],A2aR表达降低[受体mRNA(0.8338±0.0572);Western blot(0.2098±0.0257);免疫荧光阳性细胞(43.83.4-5.12)个/高倍镜视野],与正常组及对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).在点燃后1个月、6个月时,A1R表达较点燃前下降,A2aR则明显增高,差异亦具有统计学意义(P<0.01);Jg与1个月时比较,6个月时A1R表达更低[受体mRNA(0.5682±0.0443);Western blot(0.7749±0.0262);免疫荧光阳性细胞(38.50±4.81)个/高倍镜视野],A2aR表达更高[受体mRNA(1.2169 ±0.0332);Western blot(0.7080±0.0371);免疫荧光阳性细胞(114.50 ±4.04)个/高倍镜视野],即慢性期A1R表达降低,A2aR表达增高,且随时间延长越来越明显(t=-19.02-13.28,P<0.05).结论 腺苷受体表达失衡在点燃过程中呈现双向改变特征,急性期适应性调整以大限度抑制癫癎发作,慢性反复发作则导致A1R及A2aR的表达失衡,可能是导致癫癎发作无法控制的重要因素.
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腺苷A1受体拮抗剂DPCPX对脑神经元低氧复氧损伤的影响
目的 观察腺苷A1受体拮抗剂DPCPX对脑神经元低氧复氧(H/R)损伤的影响及其机制.方法 通过建立体外培养大鼠大脑皮质神经元H/R损伤模型,观察终浓度分别为0(对照组)、25、50、100nmol/L的DPCPX对常氧(低氧0h)和低氧暴露8、12、24h后复氧24h的H/R神经元乳酸脱氢酶(LDH)释放量的影响,并检测了100nmol/L DPCPX对低氧暴露12h的H/R神经元丙二醛(MDA)含量及黄嘌呤氧化酶(XO)、Ca2+-ATP酶活性的影响.结果 与对照组比较,100nmol/L DPCPX显著增加低氧暴露12h的H/R神经元LDH释放量(P<0.05),明显升高其MDA含量(P<0.01)和XO活性(P<0.05),明显降低其Ca2+-ATP酶活性(P<0.05).结论 DPCPX可加重培养神经元H/R损伤,其机制可能包括降低神经元抗氧化能力及Ca+-ATP酶活性.
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腺苷A1受体参与兔脊髓缺血预适应的保护作用
目的探讨腺苷A1受体是否参与兔脊髓缺血预适应(IPC)的保护作用.方法采用腹主动脉肾下段夹闭法建立兔脊髓缺血模型.动物分为7组,即缺血损伤组:使脊髓缺血20 min;IPC组:脊髓预缺血6 min,再灌注30 min后再次使脊髓缺血20 min;8-环戊基-1,3-二丙黄嘌呤(DPCPX,腺苷A1受体阻断剂)+IPC组及DMSO溶剂+IPC组:在IPC前分别ip DPCPX及DMSO,其余步骤同IPC组;DPCPX+缺血损伤组:在脊髓20 min缺血前ip DPCPX,其余步骤同缺血损伤组;预缺血组:使脊髓缺血6 min;DPCPX+预缺血组:在脊髓6 min缺血前ip DPCPX,其余步骤同预缺血组.所有组再灌注48 h后,进行后肢神经功能评分,然后取脊髓进行组织病理学观察.结果与缺血损伤组相比,IPC明显改善脊髓缺血后兔后肢神经功能和减轻脊髓病理学损伤;DPCPX完全取消IPC对脊髓缺血的保护作用,而DMSO不能取消IPC的保护作用;单给DPCPX并不能进一步加重缺血损伤.缺血6 min及DPCPX+缺血6 min均不能引起脊髓缺血损伤.结论腺苷A1受体参与兔脊髓IPC的保护作用.
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乳化异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时海马腺苷A1受体表达的影响
目的 探讨乳化异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时海马腺苷A1(AA1)受体表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠88只,体重280～320 g,采用随机数字表法,将其随机分为7组:假手术组(S组,n=16)、缺血再灌注组(I/R组,n=16)、乳化异氟醚预处理组(EI组,n=16)、乳化异氟醚溶剂组(LE组,n=16)、乳化异氟醚+AA1受体拮抗剂8-环戊基-1,3-二丙基黄嘌呤(DPCPX)组(ED组,n=8)、DPCPX组(DP组,n=8)和DPCPX溶剂二甲基亚砜组(DM组,n=8).采用大脑中动脉阻塞法制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型.于缺血前24h,I/R组、EI组和LE组分别腹腔注射生理盐水、8％乳化异氟醚和脂肪乳剂10.5 ml/kg,DP组和DM组分别腹腔注射DPCPX 1 mg/kg和二甲基亚砜2.5mg/kg,S组于相应时点腹腔注射生理盐水10.5 ml/kg; ED组于腹腔注射8％乳化异氟醚前30 min腹腔注射DPCPX 1 mg/kg.各组于再灌注24h时取8只大鼠,进行神经功能缺陷评分,然后处死,取脑组织,测定脑梗死体积；S组、I/R组、EI组和LE组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取脑组织,采用Western blot法检测海马AA1受体的表达水平.结果 与S组比较,其余各组神经功能缺陷评分和脑梗死体积百分比升高,I/R组和LE组海马AA1受体表达下调,EI组海马AA1受体表达上调(P＜0.01)；与I/R组比较,EI组神经功能缺陷评分和脑梗死体积百分比降低,海马AA1受体表达上调(P＜0.05或0.01)；与EI组比较,LE组、ED组、DP组和DM组神经功能缺陷评分和脑梗死体积百分比升高(P＜0.05或0.01).结论 乳化异氟醚预处理减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的机制可能与上调海马AA1受体表达有关.
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缺血预处理介导神经保护的分子机制
大量动物实验证实,缺血预处理可产生强大的器官保护作用,但动物实验向临床试验转化的进展和结果不尽如人意.对缺血预处理介导的神经保护的分子机制进行研究,寻找可转化到临床的安全且有效的预处理诱导方式,对于提高卒中和手术患者神经组织对缺血缺氧的耐受力,实现安全和有效的神经保护具有重要意义.文章从预处理活化受体、线粒体、转录因子和蛋白激酶等方面对缺血预处理介导神经保护的分子机制进行了综述.
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骨髓间充质干细胞移植对大鼠慢性癫痫模型腺苷系统的重建作用
目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSC)移植对大鼠慢性癫痫模型腺苷系统的重建作用.方法 Wistar大鼠腹腔注射氯化锂及硝酸毛果芸香碱制作癫痫模型.将取自正常Wistar大鼠的MSC在培养后移植入癫痫模型大鼠的海马CA3区(MSC组).以腹腔注射生理盐水及海马区注射磷酸盐缓冲液的正常Wistar大鼠为对照(对照组).移植前和移植后3个月时进行大鼠脑电图检测,移植后3个月检测大鼠脑内腺苷A1及A2a受体的表达情况.结果 移植后3个月时,MSC组大鼠腺苷A1受体表达水平高于对照组.A2a受体表达水平低于对照组.MSC组A1受体升高在颞叶及海马尤为明显,A2a受体降低在丘脑尤为明显.MSC组中,移植前(慢性癫痫大鼠模型)的棘波频率为(19.65±2.18)次/页,波幅为(297.43±25.37)mV,移植后大鼠棘波发放的频率明显减少,为(7.48±0.91)次/页,且波幅明显降低,为(86.27±7.72)mV.结论 骨髓间充质干细胞移植可改善大鼠脑内腺苷受体的表达,重建功能异常的腺苷系统,并使大鼠脑内海马和顶叶皮层的痫样放电得到显著改善.
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腺苷1型受体在糖尿病小鼠肾病早期megalin表达下调中的作用
目的 观察腺苷1型受体(adenosine Al receptor,A1AR)在1型糖尿病(diabetes mellitus,DM)小鼠模型早期肾小管megalin表达下调中的作用.方法 选取周龄、基线体重及空腹血糖匹配的野生型C57BL/6J小鼠,实验前适应性饲养1周后随机分2组,对照组(n=6)和野生型DM组(n=6),另外同样方法选取雄性A1AR基因敲除C57BL/6J小鼠作为A1AR-/-DM组(n=6),通过腹腔注射链脲菌素建立1型DM模型,测定4周时血糖、体重及肾重量;代谢笼收集24h尿液测定尿总蛋白及尿白蛋白肌酐比;观察肾脏病理改变;免疫组化检测肾脏megalin表达;Western印迹法检测肾脏组织caspase-l、IL-18及A1AR的蛋白表达.结果 4周时野生型DM组小鼠的血糖、体重、肾质量及尿白蛋肌酐比均显著高于对照组(P＜0.01);肾脏病理表现为肾小球体积增大、系膜细胞增生、细胞外基质增多和肾小管肥大;位于近端小管刷状缘上的大分子多配体糖蛋白megalin表达显著降低并与24 h尿蛋白量呈负相关(r=-0.645,P＜0.01);野生型DM组小鼠caspase-1 、IL-18及A1AR表达显著高于对照组(P＜0.05).A1AR-/-DM组小鼠蛋白尿更重,肾脏病理损害更重,megalin降低更为显著,并伴有caspase-1更显著的增加.结论 A1AR在糖尿病小鼠肾病早期megalin表达中具有一定保护作用,机制可能与caspase-1焦亡信号通路相关,具体机制尚需进一步探索.
关键词： 糖尿病肾病 LDL受体相关蛋白质2 受体 腺苷A1 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1
