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大鼠螺旋神经节细胞的电压依赖型钠离子通道的研究
目的认识大鼠螺旋神经节细胞膜上电压依赖型钠离子通道的电生理特征.方法采用全细胞电压钳记录模式,观察分离出的大鼠螺旋神经节细胞在不同的钳制电压下胞膜上钠离子通道电流的幅度、激活和失活等电生理特性.结果在全细胞电压钳制下共在17个螺旋神经节细胞膜上成功记录到钠离子通道电流,钠离子通道电活动有着电压依赖特性,在-40 mV激活,-20 mV大,+20 mV失活,但钠离子通道电流与电压为非直线性关系,同样,该通道对0.05μmol/L河鲀毒素阻滞剂敏感,且大鼠螺旋神经节细胞膜上的电流密度都基本相同.结论大鼠螺旋神经节细胞存在着电压依赖型钠离子通道,其电生理学特性适合作初级听神经元离子通道的实验研究.
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稳定表达NT-3的NIH3T3细胞对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响
目的通过体外共培养观察NT-3对耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响.方法建立能够稳定表达、分泌NT-3蛋白的NIH3T3细胞系;选择出生2～4 d的BALA/CA小鼠,进行耳蜗螺旋神经节细胞原代培养并分为3组,其中Ⅰ组与稳定分泌NT-3的NIH3T3细胞共培养,Ⅱ组与传染空载体NIH3T3细胞共培养,Ⅲ组与NIH3T3细胞共培养,共培养2周后,观察各组螺旋神经节细胞的数量及轴突长度的变化.结果共培养2周后,与对照组相比,NIH3T3-NT-3共培养组SGC的数量以及突起的长度均显著高于对照组.结论NT-3可显著减轻耳蜗螺旋神经节神经的退行性改变.
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强噪声对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及凋亡蛋白酶的作用
目的 探讨强噪声是否能诱导大鼠的耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)的凋亡,噪声对于凋亡蛋白酶的诱发作用以及SGC的凋亡与凋亡蛋白酶半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)信号转导之间的关系.方法 选用健康雄性白色大鼠40只,随机分成4组,每组10只,将实验组动物暴露于120 dB SPL4 kHz窄带噪声中4h后,分别测试在噪声刺激停止后1d、4d、14 d及对照组大鼠的听性脑干反应(ABR).通过透射电镜下观察以及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL),检测SGC的凋亡,免疫组化法检测Caspase-3的表达水平.结果 本实验的噪声条件,可以引起大鼠暂时或永久性的听阈位移,通过透射电镜的观察,发现实验组中SGC出现了凋亡细胞的特征性相关改变.实验组SGC中的TUNEL染色有明显增强,Caspase-3的表达明显增高,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 强噪声能够诱导发生SGC的凋亡,并且对Caspase-3有诱发作用,SGC凋亡与Caspase-3的激活有着密切的相关性.
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冲击波作用下豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞PARP的表达
目的观察气体冲击致豚鼠耳蜗损伤后耳蜗螺旋神经节细胞PARP的表达.方法20只豚鼠随机分为2组,实验组用YBD-2000型冲击波发生器对豚鼠耳蜗致伤,实验前后测试听力,12h后处死动物制作耳蜗标本,免疫组化法测定耳蜗螺旋神经节细胞PARP的表达.结果ABR:实验组听性脑干反应阈值(ABR阈值为50.94±5.98)较正常对照组(ABR阅值为5.60±1.78)明显上升(P＜0.01),听力下降明显.免疫组化显示:实验组耳蜗螺旋神经节细胞PARP表达阳性,对照组无阳性表达,愈近底回愈多,愈近顶回则愈少.结论PARP在气体冲击致豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤后呈阳性表达,提示耳蜗螺旋神经节细胞凋亡在冲击波致聋的发病机制中起重要作用.
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庆大霉素作用下豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞bcl-2及Bax的表达
目的探讨bcl-2蛋白家族与庆大霉素诱导耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的关系.方法对豚鼠进行庆大霉素连续肌肉注射,150mg/kg×10d,分别于停药后1、3、7、14d各处死豚鼠8只,取耳蜗,做平行蜗轴的石蜡切片,用免疫组织化学方法检测连续用药后不同时间耳蜗螺旋神经节细胞bcl-2及Bax的表达变化情况.结果耳蜗螺旋神经节细胞bcl-2表达增强,3d时表达达到高峰,7d时有所下降,14d时bcl-2表达明显减弱;Bax的表达在3d时达到高峰,7d时表达较3d时下降,14d时Bax表达减弱.结论庆大霉素作用下,bcl-2和Bax表达发生变化,bcl-2蛋白家族参与了庆大霉素诱导的耳蜗螺旋神经节细胞凋亡.
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NT3基因转染对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响
目的通过神经营养素-3(NT3)基因转染的方法,了解NT3对耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)生长的影响.方法建立体外培养小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的方法,并进行神经丝蛋白(NF)免疫组化染色鉴定及受体酪氨酸激酶C(TrKC)免疫组化染色.利用阳离子脂质体作为载体,将重组质粒pIRES2-EGFP(增强型绿色荧光蛋白)-NT-3瞬时转染耳蜗螺旋神经节细胞,观察转染后耳蜗螺旋神经节细胞的形态、数量等改变.结果成功培养了小鼠耳蜗螺旋神经节细胞.NT3基因转染48 h后,荧光显微镜下见聚合分布的、胞体及轴突发出绿色荧光的螺旋神经节细胞,与未转染细胞相比,螺旋神经节细胞形态未见明显变化.继续培养2周后,各实验组细胞的数量均减少,但NT3转染组细胞减少的数量低于空载体组及空白对照组.结论 NT3基因转染可以在一定程度上减轻耳蜗螺旋神经节细胞的退行性改变.
