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慢性锰中毒对大鼠听功能及耳蜗细胞的影响
目的：探讨锰中毒对大鼠听功能及耳蜗毛细胞、螺旋神经节细胞的影响。方法选取60只断乳21天的SD大鼠，随机分为染毒组和对照组，染毒组（30只）给予氯化锰水溶液（MnCl2·4H2 O ，100 mg · kg-1 d-1）连续灌胃12 w ，对照组（30只）以同法给予等量去离子水。于灌胃4、8和12 w后分别检测两组大鼠血锰浓度，于灌胃12 w对两组大鼠分别行ABR检测，基底膜铺片鬼笔环肽-异硫氰酸荧光素（Phalloidin-FITC）染色观察毛细胞形态及计数，HE染色观察螺旋神经节细胞形态及计数，透射电镜观察毛细胞及螺旋神经节细胞超微结构的变化。结果染毒组大鼠灌胃4、8、12w后血锰浓度分别为24．1±2．4、31．5±2．6、26．7±2．8ng/ml，明显高于对照组（分别为8．5±1．7、11．2±2．1、12．7±2．1 ng/ml），差异有统计学意义（均为 P＜0．05）。灌胃12 w后，染毒组大鼠4、8、16、24、32 kHz ABR反应阈均明显高于对照组（P＜0．05），其中高频阈值升高显著。灌胃12 w后，染毒组耳蜗毛细胞缺失，以底回缺失明显；螺旋神经节细胞数量减少；毛细胞和螺旋神经节细胞线粒体嵴断裂或消失，呈空泡样变。结论慢性锰中毒可导致大鼠耳蜗毛细胞缺失和螺旋神经节细胞减少，进而导致大鼠听功能损伤。
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银杏叶提取物对噪声致大鼠螺旋神经节损伤的保护作用
目的 探讨银杏叶提取物对大鼠噪声暴露后螺旋神经节损伤的保护作用.方法 将36只SD大鼠分为三组:正常对照组(正常组)、生理盐水+噪声暴露组(噪声组)、银杏叶提取物+噪声暴露组(用药组),每组12只.后两组大鼠每天暴露于110 dB SPL白噪声中6 h,连续10天,且于噪声暴露开始每天分别腹腔注射生理盐水和银杏叶提取物10 ml/d.所有大鼠均于实验前和实验第10天检测听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR),并于第二次测试ABR后处死动物,检测耳蜗组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,并用透射电镜观察耳蜗螺旋神经节细胞的超微结构变化.结果 实验后噪声组和用药组的ABR阔值均高于正常组,但用药组显著低于噪声组,差异有统计学意义;用药组SOD活性较噪声组明显增加、MDA含量较噪声组显著降低,差异有统计学意义;用药组耳蜗螺旋神经节损害明显轻于噪声组.结论 银杏叶提取物对大鼠噪声暴露后螺旋神经节细胞的损害具有保护作用.
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强噪声暴露下豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及Caspase-3的表达
目的 探讨强噪声能否诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞(sprial ganglion cell,SGC)的凋亡及SGC的凋亡是否与凋亡蛋白酶Caspase-3信号转导有关.方法 选用健康雄性白色豚鼠20只,随机分为4组,每组5只,其中3组为实验组,1组为对照组.将实验组动物暴露于4 kHz、120 dB SPL窄带噪声中4 h,分别测试噪声刺激停止后1、4、14 d及对照组豚鼠听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR).通过透射电镜和脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(temial-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeing,TUNEL),检测SGC凋亡细胞,免疫组织化学方法检查Caspase-3蛋白的表达.结果 透射电镜观察发现实验组SGC出现了凋亡细胞的特征性改变.实验组SGC的TUNEL染色明显增强,Caspase-3的表达增高,与对照组比较差异均有显著统计学意义(P＜0.01).结论 强噪声可以诱导SGC凋亡;SGC凋亡与caspase-3的激活有关.
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电凝镫骨动脉对大鼠内耳结构和功能的影响
目的 探讨处理镫骨动脉对大鼠内耳解剖结构和功能的影响.方法 选用5只正常的Hooded Wistar大鼠,采用右耳后切口,分离暴露出镫骨动脉,并行双极电凝.将对侧耳设为对照,手术步骤同前,但保留镫骨动脉.术前及术后3周,用短声诱发的听性脑干反应(ABR)和短音诱发的频率特异性ABR来检测每个动物的听力状况;并进行耳蜗组织病理学观察和螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGC)密度的测定.然后进行统计学对比.结果 电凝镫骨动脉后,所有动物的每侧耳都显现出正常的ABR波形,在所测试的各个频率,术前和术后的ABR阈值无显著差异(P＞0.05);术后未见耳蜗结构的组织学改变.电凝侧与对照侧相比,耳蜗的平均SGC密度无显著差异(P＞0.05).结论 电凝镫骨动脉后,对大鼠内耳的结构和听功能没有明显的影响,可以在耳显微外科的实验研究、人工耳蜗植入等研究中应用.
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EGCG对过氧化氢造成的螺旋神经节细胞损害的抑制作用
目的探讨表没食子儿茶素没食子酸盐[(-)-epigallocatechin-(3)-gallate,EGCG]对过氧化氢(H2O2)所致培养耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGC)氧化损伤的保护作用.方法 SGC在体外培养24小时后,分别加入不同浓度(25、50、100、200及500 μmol/L)的H2O2和/或EGCG(10、50及100 μg/ml)后继续培养24小时,采用四唑盐(MTT)比色试验和Hoechst 33258核染色法分别检测细胞活力和凋亡率,并以经典抗氧化剂维生素C为对照.结果当H2O2浓度≥50 μmol/L时,细胞存活率及细胞凋亡率与对照组相比明显下降(P<0.05),并随H2O2浓度升高而加重.EGCG处理后,能明显提高细胞存活率,降低细胞凋亡率(P<0.05),随着EGCG浓度提高,其保护作用加强,且较VitC更具优势.结论绿茶提取物EGCG在H2O2的诱导的SGC氧化损伤中具有明显的保护作用.
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耳蜗螺旋神经节细胞形态及计数的研究进展
哺乳动物及人的耳蜗螺旋神经节细胞（spiral ganglion cells ，SGCs）位于耳蜗骨螺旋板和蜗轴基部的Rosenthal小管内，其外周突通过骨螺旋板内的小管进入螺旋器分布于内毛细胞和外毛细胞。SGCs的主要功能是将耳蜗毛细胞机电转换的信息向听觉系统各级中枢传递［1］。内耳受损后会以SGCs数目变化为特征表现，噪声、年龄老化和耳毒性药物等损伤因素均会造成SGCs突触退化、轴索变性及胞体的损伤，从而影响听力，造成人类不同程度的交流障碍［2］。对耳蜗螺旋神经节细胞的形态学观察及计数能更好地研究耳蜗受损后的病理生理机制和定量反映内耳的损伤程度，因此，本文就近年来关于耳蜗螺旋神经节细胞的形态及计数研究进展综述如下。
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耳蜗钙通道的研究进展
细胞内钙离子(Ca2+)稳态的维持对生命活动是至关重要的,细胞变性坏死可能与胞内Ca2+超载有关.细胞内Ca2+水平的调节通过以下途径实现:钙通道、Na+- Ca2+交换、钙泵以及细胞内部的Ca2+摄取与释放(线粒体和肌浆网等).近年来许多研究已表明,耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞等细胞膜上存在钙通道,通过对细胞内Ca2+稳态的调控,从而对耳蜗生理功能进行调节.
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前庭水管扩大并Mondini畸形患者的多通道人工耳蜗植入
前庭水管扩大并Mondini畸形患者,由于前庭水管的扩张和耳蜗畸形,耳蜗螺旋神经节细胞的残留不足,增加了人工耳蜗植入术的难度,术中易出现脑脊液漏,术后可能影响人工耳蜗的效果[1,2].
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人工耳蜗植入的相关进展
作为人类伟大的仿生科学成果之一，人工耳蜗是迄今成功的用于重建听觉的植入式电子装置，全世界已有超过30万重度听障人群因接受了人工耳蜗植入而重返有声世界［1］。基于正常耳蜗的生理结构及感音原理，人工耳蜗是将声音信号转化为电脉冲信号，通过植入耳蜗内的电极序列兴奋耳蜗内残余的螺旋神经节细胞，重建耳蜗的听觉功能。
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从内毛细胞下突触复合体结构和功能看听神经病的发病机制及部位--读书心得
1996年Starr[1]定义了听神经病(auditory neuropath, AN)为一症状群,它是由于第Ⅷ颅神经的听神经受损引起的一种临床听力学表现特殊的感音神经性聋.近年来随着该病发病率日渐增多且低龄化,引起了越来越多的关注.至今对其发病机制仍有争论.其实Starr已明确指出听神经病的病损部位为位于耳蜗至脑干之间的第Ⅷ颅神经的耳蜗支,不包括脑干听觉径路的病变,只包括:内毛细胞、内毛细胞与传入神经纤维间的突触连接、螺旋神经节细胞、耳蜗内的听神经纤维及以上部位的任意组合[1],并强调指出要将耳声发射(OAE)正常,ABR波Ⅰ异常的耳蜗神经病变与听性脑干反应(ABR)波Ⅰ正常,而后面几个波异常的中枢性听功能障碍相区分[1].
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老年性聋防治的研究进展
老年性聋是伴随着年龄增长出现的听觉器官退行性改变，其病理表现主要为耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞的凋亡，临床表现为由高频向言语频率缓慢进行的双侧对称性感音神经性聋，伴或不伴耳鸣，多数人言语识别率降低，特别是在噪声中言语识别更加困难，严重影响老年人的生活质量。据估计，全世界65～75岁的老年人中有25％受到老年性聋的困扰，而在75岁以上的老年人中，该比例高达70％～80％，到2050年，全世界将有9亿老年人罹患老年性聋［1］。目前尚无可以逆转人类毛细胞和神经元细胞损伤的方法和药物，老年性聋仍无有效治疗方法，防治的主要手段是针对致病因素的预防和听觉康复，并辅以药物治疗。近年来，社会对老年性聋的关注力度逐渐增大，老年性聋的发病机制和防治措施都有了一定的进展，本文就近年来老年性聋的防治进行综述。
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噪声下言语测试对老年性聋患者听觉功能评估的作用
老年性聋（presbycusis）又称年龄相关性听力损失（age-related hearing loss ，ARHL），即随着年龄老化而出现的听觉功能退行性改变，表现为听觉敏感性和噪声环境下言语理解能力减退、中枢系统处理听觉信息速度减慢以及对声音来源定位能力受损等，导致患者的日常交谈、音乐欣赏、警报定位等社会生活困难，且影响程度与听力损失程度成正比，目前已成为一个普遍的社会性健康问题。据统计，65岁及以上人口中40％具有听力障碍，发生率随年龄增加而升高［1］。流行病学研究表明人类老年性聋的高危因素包括耳蜗退化、环境噪声、遗传易感性以及影响健康的普遍因素，如吸烟、动脉粥样硬化等。老年性聋的病理变化表现为毛细胞缺失、耳蜗血管纹变性、传入螺旋神经节细胞萎缩以及听觉中枢传导通路功能减退等［2］。
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60CO照射对豚鼠听力及耳蜗螺旋神经节细胞Caspase表达的影响
目的 探讨60CO照射后豚鼠听损伤及与耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGC) Caspase3、Caspase8、Caspase9表达的关系.方法 选择白化豚鼠40只,随机分为对照组和放射组.对照组8只不实施60CO 照射行ABR检查后处死；放射组32只豚鼠右耳耳颞部一次性给予60CO 70Gy照射,于照射后第1、4、7、14天行ABR检查后,每个时间点各处死8只豚鼠,行耳蜗中轴切片HE染色及免疫组织化学染色,观察SGC形态变化及Caspase3、Caspase8、Caspase9的表达.结果HE染色显示放射组SGC出现萎缩改变,照射后第4、7、14天ABR反应阈分别为25.0±11.72、47.5±11.90、55.00±7.07 dB nHL,与对照组(11.66±2.58 dB nHL)比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).放射组SGC的Caspase 3、Caspase8、Caspase 9的阳性表达比对照组强,照射后第1、4、7、14天SGC的Caspase3平均光密度值分别为0.10±0.02、0.11±0.02、0.14±0.01、0.10±0.01,与对照组(0.07±0.01)比较差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).照射后第1天(0.12±0.01)、4天(0.23±0.04)、7天(0.11±0.01)、14天(0.21±0.03)SGC的Caspase8平均光密度值与对照组(0.05±0.02)比较差异均有显著统计学意义(P＜0.01).照射后第4、7、14天SGC的Caspase9平均光密度值分别为0.22±0.03、0.35±0.02、0.29±0.02,与对照组(0.12±0.01)比较差异均有显著统计学意义(P＜0.01).结论 60C0照射导致豚鼠的听损伤可能与耳蜗SGC的萎缩有关,SGC的萎缩可能与Caspase 3、Caspase8、Caspase 9在SGC的表达上调有关.
关键词： 放射 螺旋神经节细胞 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 内耳 -
内质网应激反应参与强噪声诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的研究
目的:探讨强噪声能否诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)的凋亡,及观察凋亡蛋白酶Caspase-12、内质网应激相关因子Bip/Grp78和CHOP/Gadd153在强噪声暴露后豚鼠耳蜗SGC中的表达,探讨内质网应激在强噪声暴露后豚鼠耳蜗SGC损伤中的作用.方法:选用健康雄性白色豚鼠20只,将实验组豚鼠暴露在4 kHz窄带噪声120 dB SPL噪声环境中4h,噪声刺激停止后1,4,14d组及对照组在处死前测ABR(每组各5只).通过透射电镜和脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL),检测SGC凋亡细胞,免疫组化检测Caspase12、Bip/Grp78,CHOP/Gadd153蛋白的表达.结果:透射电镜观察发现实验组SGC出现了凋亡细胞的特征性改变.实验组SGC的TUNEL染色明显增强,免疫组化检测实验组Bip/Grp78蛋白明显高于正常组,且在1,4,14d都维持在比较高的水平.Caspase-12、CHOP/Gadd153蛋白含量在噪声刺激后迅速增高,1d和4d达到高峰,14d减少.结论:强噪声可以诱导SGC凋亡,Caspase-12活化引起内质网应激反应性凋亡通道是此过程的信号途径之一.
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水杨酸钠对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞外向延迟整流钾电流及其尾电流的影响
目的 采用全细胞膜片钳技术记录耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion neurons,SGNs)外向整流钾电流及其尾电流,分析水杨酸钠对耳蜗SGNs外向整流钾电流及其尾电流的影响,初步探讨其耳毒性机制.方法 采用全细胞膜片钳技术记录急性分离并进行细胞短时间(2～3 h)血清培养后,耳蜗SGNs外向延迟整流钾电流及其尾电流曲线,同时记录不同浓度水杨酸钠(0.01、0.1、0.5、1、10 mmol/L)对2种电流的影响.结果耳蜗SGNs上可记录到外向电流,该电流对4-氨基吡啶(4-AP)敏感,证明其为钾电流,该钾电流具有延迟整流特性;1 mmol/L水杨酸钠能明显抑制耳蜗SGNs外向延迟整流钾电流;+50 mV的去极化电压刺激可使大稳态电流幅值减少(46.3±2.0)%,水杨酸钠对此电流的抑制具有浓度依赖性,外液洗脱后耳蜗SGNs外向延迟整流钾电流可基本恢复正常.另外,可记录出耳蜗SGNs延迟整流钾电流的尾电流曲线;水杨酸钠可降低此尾电流峰值,并缩短尾电流的时间常数,加速尾电流的失活.结论 钾电流在耳蜗SGNs正常电生理活动中有重要作用.水杨酸钠抑制耳蜗SGNs外向整流钾电流及其尾电流,并加速尾电流的失活,这种作用可导致耳蜗SGNs的电生理活动异常,从而引发水杨酸钠对听觉功能的损害.
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Caspase-12在强噪声暴露后豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡中的动态观察
目的 探讨强噪声能否诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞(sprial ganglion cell,SGC)的凋亡,及动态观察凋亡蛋白酶Caspase-12在强噪声暴露后豚鼠耳蜗SGC损伤中的作用.方法 选用健康雄性白色豚鼠20只,将实验组豚鼠暴露在4kHz窄带噪声120 dB SPL环境中4h,噪声刺激停止后1、4、14 d组及对照组在处死前测听性脑干反应(每组各5只).通过脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(ternial-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)检测SGC凋亡细胞,免疫组化检测Caspase-12蛋白在各组中的表达.结果 实验组SGC的TUNEL染色明显增强,免疫组化检测实验组Caspase-12蛋白含量在噪声刺激后迅速增高,1、4d达到高峰,14 d减少.结论 强噪声可以诱导SGC凋亡,Caspase-12活化引起内质网应激反应性凋亡通道是此过程的信号途径之一.
关键词： 强噪声 螺旋神经节细胞 Caspase-12 -
顺铂对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞延迟整流钾电流的影响
目的 探讨耳毒性药物顺铂对耳蜗螺旋神经节细胞延迟整流钾电流的影响,了解顺铂耳毒性的离子机制.方法 钾电流作为对照组,浴液中分别加入100, 500,1000,5000μM不同浓度的顺铂溶液后记录的电流为实验组,观察其对钾通道电流电生理学特性的影响,并观察冲洗后电流的恢复情况.结果 实验显示耳蜗螺旋神经节细胞钾通道电流的电生理学特性受不同浓度顺铂溶液的影响,并具有浓度依赖性,表现在其活化动力学和电流幅度的改变.本实验中顺铂的50%的电流被抑制时的浓度(IC50)为294μM,冲洗后钾通道电流逐渐恢复.结论 顺铂可以改变耳蜗螺旋神经节细胞钾通道电流的电生理学特性,这种变化在短期内可逆,揭示其耳毒性的形成具有一定的离子机制.
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阳离子脂质体介导小鼠原代螺旋神经节细胞NT-3基因转染的实验研究
目的通过阳离子脂质体携带构建的神经营养因子-3(NT-3, Neurotrophin-3)-绿色荧光蛋白基因(pEGFPC2)转染小鼠耳蜗原代培养的螺旋神经节细胞,观察NT-3-pEGFPC2的共表达及其对螺旋神经节细胞生长的影响.方法构建携带绿色荧光蛋白报告基因的重组质粒-NT3 pEGFPC2,建立体外培养原代小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的方法,并用神经丝蛋白(NF200)单克隆抗体进行免疫组化染色鉴定.利用阳离子脂质体携带重组质粒瞬时转染原代小鼠耳蜗螺旋神经节细胞,观察转染后NT-3的表达及对螺旋神经节细胞生长数量的影响.结果成功培养了小鼠原代耳蜗螺旋神经节细胞.基因转染后24 h在荧光显微镜下观察到胞体及轴突发出绿色荧光的螺旋神经节细胞.用Western blot方法检测到相应NT-3蛋白表达.继续培养12 d后各组细胞数量均减少,但NT-3转染组细胞减少数量低于空载体组.结论阳离子脂质体可作为NT-3基因的载体.NT-3的基因转染对抑制耳蜗螺旋神经节细胞的退行性变有一定作用.
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共同腔畸形人工耳蜗植入技术研究进展
共同腔畸形(common cavity deformity,CCD)是由于听囊在胚胎第4周发育停滞所致的严重内耳畸形,占先天性感音神经性耳聋的5％ [1-3],仅次于Modini畸形(约占15％)[2];其病理表现为耳蜗和前庭形成一个共腔、蜗轴未发育,伴或不伴半规管畸形;其临床表现为极重度感音神经性听力损失,需要人工耳蜗植入(cochlear implantation,CI)提高听力[4].由于CCD常伴有内听道及听神经发育异常,常规CI术治疗CCD易发生损伤面神经、误入内听道(internal auditory canal,IAC),术中脑脊液(cerebrospinal fluid leak,CSF)耳漏甚至术后脑膜炎进而危及生命,且常规电极不易在共同腔内固定,严重影响术后听力效果.本文就CCD颞骨病理研究、手术人路选择、术后言语效果3方面予以综述.
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EGCG对H2O2诱导的螺旋神经节细胞MnSOD基因表达的影响
目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸盐(EGCG)在双氧水(H2O2)诱导耳蜗螺旋神经节细胞(SGCs)氧化损伤中对线粒体抗氧化酶基因-MnSOD基因表达的影响.方法:培养离体SGCs,采用半定量RT-PCR方法检测加入不同浓度H2O2和/或EGCG后螺旋神经元MnSOD基因的表达情况.以经典抗氧化剂维生素C作对照.结果:随着H2O2浓度提高,MnSOD基因的表达亦随之升高;在H2O2浓度大于100μmol/L时MnSOD基因表达明显上调(P＜0.05),100μg/ml EGCG能明显抑制H2O2诱导的MnSOD基因表达(P＜0.05).结论:EGCG可能通过清除氧自由基,提高MnSOD酶活性,抑制H2O2诱导的螺旋神经节细胞MnSOD基因表达.
