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大黄(庶虫)虫丸血浆药理学与血清药理学作用的比较研究
目的建立血浆药理学研究方法,探讨话血化瘀方剂大黄(庶虫)虫丸对血小板聚集的影响.方法健康志愿者54人,其中5人服大黄(庶虫)虫胶囊,5人服阿司匹林用于制备含药的血清和血浆,44人不服药,采血后分离血小板PRP,随机分成8组:自体血清组、异体血清组、大黄(庶虫)虫血清组、阿司匹林血清组、自体血浆组、异体血浆组、大黄(庶虫)虫血浆组、阿司匹林血浆组.每组分别加入相应的血清和血浆孵育30 min,用ADP和肾上腺素二种诱导剂处理,观察各组对血小板聚集的影响.结果用ADP和肾上腺素二种诱导剂处理,血小板在自体血清组、异体血清组、大黄(庶虫)虫血清组、阿司匹林血清组中均不聚集,而在自体血浆组、异体血浆组、大黄(庶虫)虫血浆组、阿司匹林血浆组中聚集.用ADP诱导自体血浆组与异体血浆组相比较,P1(1 min聚集率)、P5(5 min聚集率)、PM(大聚集率)、TM(解聚集率)、I(聚集时间)差异均无显著性(P＞0.05).大黄(庶虫)虫胶囊和阿斯匹林组与异体血浆组相比较,P1、P5、PM、I差异均有非常显著性(P＜0.01),TM也显著下降(P＜0.05).大黄(庶虫)虫胶囊与阿斯匹林组比较,P1、PM、I差异均有显著性(P＜0.05),而P5、TM二者作用相似.用肾上腺素诱导自体血浆组与异体血浆组相比较,P1、P5、PM、TM、I差异均无显著性(P＞0.05).大黄(庶虫)虫胶囊和阿斯匹林组与异体血浆组相比较,P5、PM、I差异均有非常显著性(P＜0.01),而P1、TM差异也有显著性(P＜0.05).大黄(庶虫)虫胶囊与阿匹林组比较,P1、P5、PM差异均有显著性(P＜0.05),而TM、I二者作用相似.结论在进行血栓与止血体外研究时,用血清药理学方法是无法完成的.血浆药理学方法能更好地再现体内环境中产生的药理效应.大黄(庶虫)虫丸抗血小板聚集作用明显优于阿司匹林.
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灵芪蠲肝胶囊对大鼠肝星状细胞增殖及TIMP-1表达的影响
目的 观察不同浓度的灵芪蠲肝胶囊含药血清对血小板衍化生长因子(PDGF)诱导的大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)增殖和组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白量表达的影响,探讨其可能的抗肝纤维化机制.方法 灵芪蠲肝胶囊高、中、低剂量组按含药血清浓度200 mL·L-1分别作用于10 ng·mL1 PDGF刺激的HSC-T6,24 h、48 h、72 h后,用CCK-8法测定各组HSC-T6的吸光度值,透射电镜观察各组细胞超微结构的变化,免疫印迹法检测24 h时各组细胞中TIMP-1蛋白量的表达.结果 灵芪蠲肝胶囊含药血清可明显抑制HSC-T6的增殖,各组药物在各时间点对HSC-T6的抑制作用随血清中药物浓度增加呈逐渐增强趋势；同时各药物血清组HSC-T6中TIMP-1蛋白表达量均明显减少(均P＜ 0.01).结论 (1)灵芪蠲肝胶囊可以抑制PDGF诱导的HSC-T6增殖,且作用具有剂量依赖性；(2)灵芪蠲肝胶囊能降低TIMP-1在活化的HSC-T6中的表达,从而减少其对基质金属蛋白酶(MMPs)的抑制,实现抗肝纤维化作用.
关键词： 灵芪蠲肝胶囊 肝纤维化 血清药理学 血小板衍化生长因子 组织金属蛋白酶抑制剂-1 -
平肺口服液抑制肺成纤维细胞生长和诱导凋亡
目的 采用血清药理学方法,研究平肺口服液对人胚肺成纤维细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用.方法 平肺口服液10g/kg和20 g/kg分别灌服大鼠,第1～7天每日一次,第8～10天每日两次,于第11天早上末次灌服后2 h腹主动脉无菌采血制备含药血清.采用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术分别检测平肺口服液含药血清对人胚肺成纤维细胞(CCC-HPF-1)增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响.结果 平肺口服液20 g/kg灌服所得大鼠含药血清作用96 h和120 h分别能抑制CCC-HPF-1细胞增殖(P<0.01);流式细胞术检测表明该含药血清作用96 h能诱导CCC-HPF-1细胞发生凋亡(P<0.05)和G1/G0期阻滞(P<0.05).结论 平肺口服液能抑制肺成纤维细胞增殖,诱导细胞凋亡以及使细胞周期阻滞于G1/G0期,这可能有助于其预防放射性肺损伤.
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复脉Ⅰ号对大鼠心肌和主动脉~(45)Ca跨膜流动的影响
目的 采用血清药理学方法,研究复脉汤有效部位(复脉Ⅰ号)对大鼠心肌和主动脉~(45)Ca内流和外溢的影响规律,探讨复脉Ⅰ号抗心律失常的药理机制.方法 应用~(45)Ca跨膜测量技术研究复脉Ⅰ号含药血清对大鼠心肌和主动脉电压依赖钙通道(PDC)的影响.结果 复脉Ⅰ号含药血清对大鼠心肌和主动脉~(45)Ca跨膜流动的影响显著,既能阻滞~(45)Ca大量内流,又能促进已流入细胞内的~(45)Ca外溢.结论 复脉Ⅰ号抗心律失常的机理可能与阻滞细胞膜外Ca~(2+)内流,促进膜内Ca~(2+)外溢,维持细胞内Ca~(2+)浓度的稳定有关.
关键词： 复脉汤 有效部位 同位素~(45)Ca 电压依赖钙通道(PDC) 血清药理学 -
芎姜复方不同提取部位的宫缩效应研究
目的分析芎姜复方不同提取部位的缩宫作用.方法 运用血清药理学方法,按照离体子宫实验法测定正常小鼠离体子宫肌活动力.结果 醇提物缩宫作用显著,而挥发油、水提醇沉物具抗子宫收缩作用;醇提物中氯仿提取物的缩宫作用明显优于其他提取物.结论 同一处方的不同提取部位及不同组分具有不同的药效.
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罗勒胶囊对小鼠脾细胞产生IL-2和IFNγ能力的影响
目的探讨罗勒胶囊对小鼠免疫功能的影响.方法用罗勒胶囊含药血清孵育小鼠脾细胞而诱生IL-2和IFNγ,利用IL-2依赖株CTLL-2和IFNγ敏感细胞L929细胞,采用MTT法检测含药血清作用后小鼠脾细胞产生IL-2和IFNγ的能力.结果罗勒胶囊血清大、中剂量组及香菇多糖(LNT)组能显著提高小鼠脾淋巴细胞IL-2产生能力,与生理盐水对照组比较,P＜0.01,但罗勒胶囊大、小剂量组作用不如香菇多糖(P＜0.05,P＜0.01);罗勒胶囊血清大、中剂量组及香菇多糖(LNT)组能显著提高小鼠脾淋巴细胞IFNγ产生能力,与生理盐水对照组比较,P＜0.01.结论罗勒胶囊能促进IL-2和IFNγ的产生,增强机体的免疫功能.
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益心饮血清对感染柯萨奇B3病毒大鼠搏动心肌细胞的保护作用
目的探讨益心饮对病毒性心肌炎的影响.方法取新生SD大鼠心室肌制备培养搏动心肌细胞,接种Coxsackie B3病毒建立体外病毒性心肌炎模型.同时添加含药血清,分别在病毒感染后1、3、5d检测心肌细胞的搏动速率、乳酸脱氢酶释放、细胞存活率.结果益心饮血清能够明显提高感染心肌细胞的搏动速率,降低乳酸脱氢酶的释放,提高细胞存活率.结论益心饮血清对感染Coxsackie B3病毒的SD大鼠培养心肌细胞具有明显的保护作用.
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培补肝肾复方中药对PC12细胞损伤模型的保护作用
目的探讨培补肝肾复方对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)所致PC12细胞损伤模型的保护作用.方法采用血清药理学方法,制备中药含药血清,以肾上腺嗜铬细胞瘤克隆化细胞株PC12细胞为材料,利用MPP+建立经神经生长因子(NGF)诱导前后的PC12细胞的损伤模型,观察不同给药剂量的培补肝肾中药血清对PC12细胞的作用.结果形态学检查发现等效剂量培补肝肾中药复方血清可显著提高PC12细胞的存活数,减低细胞损伤程度.结论培补肝肾复方中药血清可对抗MPP+引起的细胞损伤,对体外培养的PC12细胞具有保护作用.
关键词： 培补肝肾复方 PC12细胞损伤模型 血清药理学 保护作用 -
补肝肾方血清对体外培养大鼠软骨细胞的影响
目的观察补肝肾方血清对体外培养的SD大鼠软骨细胞增殖和总蛋白合成的影响.方法分别采用5%,10%,20%的补肝肾方血清和相应浓度的空白血清培养SD大鼠软骨细胞,用MTT法检测软骨细胞的增殖,用考马斯亮蓝测定法检测细胞总蛋白含量.结果补肝肾组与对照组比较,不同血清浓度下补肝肾组的软骨细胞OD值及总蛋白含量均高于对照组(P＜0.01或P＜0.05).结论 3种不同血清浓度下补肝肾方均有明显的促进体外软骨细胞增殖及蛋白合成的作用,且5%和10%含药血清作用较明显.
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补阳还五汤对大鼠脑皮层神经元生长的影响
目的观察含补阳还五汤的药物血清对体外培养大鼠脑皮层神经元生长的影响,为补阳还五汤治疗缺血性脑损伤提供实验依据.方法以体外培养新生SD乳鼠大脑皮层神经元为观察对象,采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞生长情况.观察含药血清对常规培养及在缺氧状态下神经元生长的影响.结果补阳还五汤对常规培养及在缺氧条件下培养的神经元有显著促进生长作用,与空白血清组比较有显著差(P<0.05).结论大鼠以补阳还五汤灌胃给药后,其血清中的药物成份有促进体外培养神经元细胞生长的作用.
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喂饲补肾中药大鼠的血清对成骨细胞的生物学作用
目的探讨喂饲补肾中药大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用.方法在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的中药血清,并与空白组对照,分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能.结果补肾中药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用,可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量.结论补肾中药血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能.
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黄芪对成骨细胞成骨能力的血清药理学实验
目的观察黄芪含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞体系增殖、分化及成骨能力的影响.方法3月龄SD大鼠12只,随机分3组,分别以生理盐水(NS)、0.5g/mL及5g/mL剂量的黄芪灌胃,取大鼠血清经处理终稀释成1:20、1:40、1:80分别加入成骨细胞体系,进行细胞增殖(MTT法)、ALP活性测定以及矿化结节计数.结果黄芪(0.5g/mL)灌胃的含药血清在1:80稀释比,MTT法所测吸光度A值及ALP活性显著高于NS对照组;黄芪(5g/mL)灌胃的含药血清在1:20稀释比,MTT法所测吸光度A值及ALP活性亦显著高于NS对照组;矿化结节计数两组含药血清均显著高于NS对照组.结论黄芪在体内对成骨细胞的成骨作用受药物本身经体内吸收、代谢后的浓度变化调节的影响.
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中药血清药理学研究进展
随着中药血清药理学的不断发展,国内许多学者都采用血清药理学方法进行中药复方的研究,并取得一定的进展.本文对中药血清药理学实验动物的选择、给药方案、采血方案、血清灭活与保存、对照组的设定与血清的添加量、中药血清药理学研究应用现状进行了综述,阐明血清药理学在中药体外药效研究中的重要性,为今后相关研究提供参考.
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不同条件温阳活血解毒复方血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响
[目的]探讨不同条件温阳活血解毒复方含药血清(YBTR)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖影响的差异.[方法]体外培养HUVECs细胞.含药血清制备:将32只SD大鼠(雌雄各半)随机分成生理盐水组及低、 中、 高剂量组(灌胃剂量分别为10.35、31.05、93.15 g·kg-1,每日2次)4组,分别在4个时间点(大鼠喂养第4天首次灌胃1 h、2 h后,第6天首次灌胃1 h、2 h后,以下分别用D3H1、D3H2、D5H1、D5H2表示)每组各取1只雌性大鼠和雄性大鼠采血制成含药血清.采用CCK8法观察各组含药血清对HUVECs增殖能力的影响.[结果]自不同性别大鼠和不同时间点采集的药物血清作用HUVECs后的细胞增殖抑制率比较,差异均有统计学意义(P性别=0.000<0.01,P时间=0.000<0.01),时间和性别的交互作用有统计学意义(P时间×性别=0.001<0.01),其中D3H2、D5H1随性别的不同而不同(PD3H2×性别=0.000<0.01、PD5H1×性别=0.002<0.01).随着D3H2雌性含药血清剂量的增加,其对HUVECs的增殖抑制作用也逐渐增加,其组间比较差异有统计学意义(P<0.05),整体趋势呈浓度依赖性.在雌性大鼠中,不同浓度组的含药血清对HUVECs的增殖抑制作用,在D3H2达到峰值后均出现下降;而在雄性大鼠中,低、 中剂量组含药血清在D5H1达到峰值,高剂量组则在D3H1达到峰值.[结论]选择雌性的大鼠在D3H2采血制备的温阳活血解毒复方含药血清对HUVECs的增殖抑制作用佳.
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六味地黄丸调控肝癌CBRH7919细胞Cx43表达的体外研究
[目的]探讨六味地黄丸对大鼠肝癌CBRH7919细胞缝隙连接蛋白(Cx)43表达的影响.[方法]应用血清药理学方法制备六味地黄丸含药血清,分别采用蛋白免疫印迹(Western blot)法、异硫氰酸荧光素(FITC)标记间接免疫荧光染色—激光共聚焦显微镜技术、流式细胞术检测不同剂量(体积分数0%、2.5%、5%、10%)六味地黄丸含药血清组CBRH7919细胞Cx43蛋白的表达,采用实时定量逆转录—聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组肝癌细胞Cx43 mRNA的表达.[结果]与对照组(0%六味地黄丸含药血清)比较,体积分数为2.5%、5%、10%的六味地黄丸含药血清均能明显提高肝癌CBRH7919细胞Cx43蛋白及mRNA表达水平.[结论]六味地黄丸可能是通过促进肝癌CBRH7919细胞Cx43蛋白及mRNA的表达,改变Cx43膜定位,改善细胞间缝隙连接通讯功能,从而发挥抑制肝癌的作用.
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新伤续断汤对成骨细胞增殖及骨形态发生蛋白的影响
【目的】探讨新伤续断汤（由骨碎补、续断、地鳖虫等组成）对大鼠成骨细胞增殖以及骨形态发生蛋白2（BMP-2）表达的影响。【方法】采用血清药理学方法制备新伤续断汤含药血清，与α-MEM培养基配成细胞培养液。按酶序列消化法从SD大鼠乳鼠颅骨获取、培养成骨细胞，以碱性磷酸酯酶染色和钙结节染色鉴定细胞。取第3~4代细胞用细胞增殖—毒性（CCK-8）法检测经体积分数为5%、10%、20%新伤续断汤含药血清处理24、48、72 h后的细胞增殖情况。用含体积分数10%的新伤续断汤、续断、骨碎补、空白对照含药血清分别培养细胞，采用微量酶标法检测碱性磷酸酶的活性，酶联免疫吸附法检测BMP-2的表达。【结果】新伤续断汤对成骨细胞的影响呈时间、浓度上的依赖性，其中浓度为10%时效果明显。体积分数10%的新伤续断汤、骨碎补、续断含药血清的成骨细胞碱性磷酸酶活性较空白对照组显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；7 d时，新伤续断汤组、骨碎补组与空白对照组比较， BMP-2表达显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。【结论】新伤续断汤能促进大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性及BMP-2的表达，其中单味药骨碎补可能发挥重要作用，其促进骨折愈合机制可能与提高细胞的成骨功能有关。
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清热除痹汤含药血清对尿酸钠结晶刺激下THP－1细胞活性及分泌白细胞介素－1β的影响
目的探讨清热除痹汤含药血清对尿酸钠结晶刺激下THP－1细胞的增殖活性及分泌白细胞介素－1β（IL－1β）功能的影响。方法体外培养人单核细胞THP－1细胞，分为5组，空白血清组，模型对照组，中药血清高、中、低浓度组（浓度分别为体积分数20％、10％、5％），除空白血清组外，其他各组均加入浓度为500 mg／L的尿酸钠结晶，于培养0、12、24、48 h时间点采用四甲基偶氮唑盐比色（MTS）法检测细胞的增殖活性，培养48 h后采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测细胞上清液IL－1β含量。结果各组THP－1细胞活性均随着时间的延长而增加，模型对照组各时间点细胞活性均较空白血清组显著增高（P＜0．05或P＜0．01），48 h模型对照组的IL－1β水平较空白血清组显著增高（P＜0．01）。12、24 h中药血清各浓度组，48 h中药血清高、中浓度组细胞活性均较模型对照组显著下降（P＜0．05或P＜0．01），48 h中药血清各浓度组IL－1β水平均较模型对照组显著下降（P＜0．01）。结论清热除痹汤含药血清对尿酸钠结晶刺激下THP－1细胞的活性有抑制作用，机制与其可抑制IL－1分泌有关。
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百合知母汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞的保护作用
[目的]观察百合知母汤含药血清对氯化镉(CdCl2)致大鼠卵巢颗粒细胞(GC)损伤的影响.[方法](1)分别选用23 d、3月和12月龄雌性sD大鼠各5只,取卵巢进行GC计数,连续观察10 d内GC的生长情况,采用噻唑蓝(MTT)比色法于490 nm波长处测定光密度(D)值,筛选适卵巢GC.(2)于适卵巢GC体外培养的第3天加入终浓度分别为10、20、40、60、80μmol/L的CdCl2刺激液,37℃、体积分数5%CO2培养箱内培养48 h后,采用MTT法观察细胞生长情况,筛选CdCl2刺激液的适浓度.(3)将筛选出适的卵巢GC体外培养72 h后,在96孔板内分别加入适浓度的CdCl2刺激液及终浓度分别为体积分数1.25%、2.5%、5%、10%、20%的大鼠百合知母汤含药血清,依据含药血清浓度由低至高分为5组,同时另设对照组:①空白对照组:体积分数10%DMEM培养液,②模型组:体积分数10%DMEM培养液+适浓度CdCl2刺激液,③空白血清组:空白血清+适浓度CdCl2刺激液.继续培养48 h后,采用MTT比色法测定D值,观察百合知母汤含药血清对大鼠卵巢GC以及对CdCl2致卵巢GC损伤后的影响.[结果]23 d龄大鼠卵巢GC数量多、形态好,呈指数生长,23 d为适生长时间.CdCl2浓度与卵巢GC的活性呈剂量依赖性关系,随浓度增加而损伤加重,其中浓度为40 μmol/L CdCl2培养液中的GC细胞边缘出现皱缩,为适CdCl2刺激液浓度.百合知母汤含药血清对卵巢GC生长有促进作用,能抵抗40 μmol/L CdCl2刺激液对GC的损伤作用.[结论]百合知母汤含药血清保护大鼠卵巢GC的作用与其能拮抗CdCl2的损伤和增加卵巢GC的活性和数量有关.
关键词： 百合知母汤/药理学 围绝经期综合征/中药疗法 血清药理学 细胞培养 -
尿毒清胶囊人含药血清抑制尿毒症毒素血清刺激的肾小管上皮细胞-2增殖与转分化作用观察
[目的]探讨尿毒清胶囊含药血清对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)增殖与转分化的影响.[方法]将体外培养的HK-2细胞分为6组:正常时照组,体积分数5%、10%尿毒症毒素血清组(简称尿毒症血清组),体积分数5%、10%尿毒清胶囊含药血清组(简称含药血清组),蒙诺组(浓度为10-6mmoL/L).采用四氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和α-平滑肌肌动蛋白(α-sMA)阳性细胞百分率.[结果]5%、10%尿毒症血清组光吸收值(D)显著高于正常对照组(均P<0.01).5%含药血清组D值显著低于10%尿毒症血清组(P<0.01),10%含药血清和蒙诺组D值显著低于5%、10%尿毒症血清组(均P<0.01).5%、10%尿毒症血清组G0/G1期细胞百分数(PG0/G1)显著降低(均P<0.01),细胞增殖指数(TP)显著升高(均P<0.01).5%、10%含药血清组及蒙诺组可显著升高PG0/G1,降低,P(均P<0.01).5%、10%尿毒症血清组HK-2细胞α-sMA阳性细胞百分率(Pα-SMA阳性显著高于正常对照组(均P<0.01),5%含药血清组Pα-SMA阳性显著低于10%尿毒症血清组(P<0.01),10%含药血清组和蒙诺组P<,α-SMA阳性>显著低于5%、10%尿毒症血清组(均P<0.01).[结论]尿毒清胶囊抗肾纤维化作用机制可能与其抑制参与肾纤维化的肾小管上皮细胞的增殖和转分化,进而抑制肾组织纤维化有关.
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补肾行气活血法对骨髓基质干细胞诱导成软骨细胞作用的影响
[目的]观察补肾行气活血法对诱导骨髓基质干细胞(BMSCs)成软骨细胞作用的影响.[方法]将传至第3代的BMSCs分为阴性对照组和治疗组,分别采用软骨细胞诱导培养基加体积分数为10%的空白对照血清和诱导培养基加体积分数10%的骨炎定含药血清培养诱导成软骨细胞,观察软骨细胞的生长状况及细胞表型特征.[结果]治疗组在细胞贴壁、生长形态及成软骨特性方面明显优于对照组,细胞表型的免疫组化染色均为阳性.[结论]以补肾行气活血法为组方依据的骨炎定含药血清既可促进BMSCs的增殖,又可促进诱导的软骨细胞分化.
关键词： 补肾行气活血法 软骨细胞/药物作用 骨髓基质干细胞/病理学 血清药理学 细胞培养
