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田基黄不同提取物含药血清体外抗乙肝和抗肝癌作用的实验研究
目的 观察田基黄不同提取物的含药血清体外抗乙肝和抗肝癌的作用.方法 采用酶链免疫法,观察田基黄不同提取物的含药血清对2215细胞分泌HBeAg和HBsAg的抑制作用.采用MTT技术,观察田基黄不同提取物的含药血清对肝癌细胞BEL-7404增殖的抑制作用.结果 当含药血清浓度为5%时,田基黄乙醇总提取物和正丁醇提取物对HBeAg和HBsAg呈现较好抑制作用,抑制率分别为34.84%和57.95%,以及76.02%和53.15%(P＜0.05);当含药血清浓度为20%时,醋酸乙酯提取物对HBeAg和HBsAg呈现较好的抑制作用,抑制率分别为79.79%和57.22%(P＜0.05);水提取物3种浓度的含药血清对HBeAg和HBsAg都有较好的抑制作用,抑制率分别达到了70%和30%以上(P＜0.05).田基黄各提取物对肝癌BEL-7404细胞都有一定的抑制作用,该抑制作用呈明显的量效关系,当含药血清浓度为20%时,乙醇总提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物的抑制率分别为29.74%,53.80%,40.79%和54.24%(P＜0.01).结论 田基黄不同提取物含药血清能抑制2215细胞分泌HBeAg和HBsAg,并且能抑制肝癌细胞BEL-7404的增殖.其抗乙肝的有效成分主要分布在田基黄的水提取物中,而抗肝癌的有效成分则均衡分布于各种极性部位.
关键词： 田基黄 2215细胞 BEL-7404细胞 血清药理学 -
化浊行血汤含药血清血管内皮保护作用及其体内给药时效差异的研究
目的 观察化浊行血汤含药血清对缺氧内皮细胞的保护作用,以及其药理作用与动物灌胃给药的量-时效关系.方法 以化浊行血汤不同给药方案、药后不同取血时间所得的药物血清为受试对象,培养血管内皮细胞,进行缺氧复氧实验,复氧同时给予不同化浊行血汤含药血清干预,采用MTT法观察不同含药血清对缺氧内皮细胞活性的影响.结果 含药血清各组与模型组比较有显著差异(P<0.05).给药后不同时间取血所获得的药物血清对缺氧内皮细胞活力的影响存在一定差异,以2次/d灌胃连续3 d,并在末次灌胃90 min后取血所得药物血清药理效应佳.结论 化浊行血汤含药血清具有保护缺氧内皮细胞的作用,其血清药效与动物给药方法存在一定时效关系.
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虫草菌丝药物血清对白细胞介素-1β损伤胰岛细胞的保护作用的实验研究
目的 通过白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)损伤离体胰岛细胞,研究虫草菌丝(Cordyeeps sinensis,CS)含药血清对胰岛细胞的保护作用以及其机制与抗氧化酶和一氧化氮(Nitric oxide,NO)的关系.方法 离体培养乳鼠胰岛细胞,用IL-1β损伤胰岛细胞,与不同浓度CS含药血清共同孵育,应用MTT法检测细胞活性,放免法检测基础和高糖胰岛素分泌量,比色法检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)的含量,诱生型一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,iNOS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione perioxidase,GSH-Px)的活性.结果 CS含药血清显著提高IL-1β损伤的胰岛细胞活性,并且胰岛细胞基础和高糖刺激胰岛素分泌量明显提高.IL-1β作用后细胞培养上清液中NOS活性升高.NO含量增加,而SOD,GSH-Px的活性水平降低,经与不同浓度CS含药血清共同孵育后,细胞培养上清液中NO含量减少、iNOS活性降低,SOD,GSH-Px的水平明显升高,呈剂量依赖性,具有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 CS含药血清对IL-1β损伤的胰岛细胞分泌功能和细胞活性有保护作用,其机制与降低iNOS的活性,从而减少NO生成以及提高SOD,GSH-PX的活性水平有关.
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复方五仁醇胶囊保肝作用的实验与临床研究
目的 考察复方五仁醇胶囊对损伤肝细胞的保护作用及对慢性肝炎的治疗效果.方法 以SD大鼠为供体制备复方五仁醇胶囊含药血清,CCl4诱导大鼠原代培养肝细胞损伤模型,采用血清药理学方法考察含药血清对损伤肝细胞增值(MTT法)和培养上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)的影响;将446例慢性乙型肝炎患者随机分成治疗组和对照组,以临床症状、体征、肝功能为主要指标,考察复方五仁醇胶囊的治疗效果.结果 与模型组比较,含药血清组MTT值明显升高,上清液中ALT均显著下降,体系中加入10%含药血清效果佳;治疗组、对照组临床症状、体征及肝功能指标均明显得到改善,复方五仁醇胶囊的疗效优于阳性对照药护肝片.结论 复方五仁醇胶囊对肝细胞损伤具有明显保护作用,对慢性肝炎有较好治疗作用.
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复方银黄微型灌肠剂对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子和白细胞介素-6的影响
目的 研究复方银黄微型灌肠荆(Yinhuang Micro-enema Compound,YHMEC)含药血清对大鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的影响.方法 将大鼠随机分成3组,分别于末次灌肠给药后10,30,60 min采集含药血清,采用MTT比色法检测不同采血时间的含药血清对PMφ活力的影响;细胞培养上清液中TNF-α,IL-6的表达采用ELISA法检测.结果 末次给药后30,60 min采集的含药血清对PMφ的活力及细胞因子的表达影响显著(P<0.05或P<0.01).结论 复方银黄微型灌肠剂含药血清能显著抑制LPS诱导的TNF-α,IL-6表达,具有明显的体外抗炎活性.
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运用血清药理学方法研究生脉散对豚鼠离体工作心脏的作用
目的 观察家兔灌胃给予生脉散后,其含药血清对豚鼠离体工作心脏血流动力学的影响.方法 家兔按分组灌胃分别给予生脉散5,10 ml·kg-1,2次/d,连续3 d,末次给药后60 min取血,分离血清.制备豚鼠离体工作心脏,观察含药血清对心率(HR)、动脉血压(AP)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张期末压(LVEDP)、左室内压大上升及下降速率(±dp/dtmax)的影响.结果 含药血清在给药后不同时间具有减慢HR,降低AP,LVEDP,增高LVSP和±dp/dtmax的作用,且呈明显的剂量依赖关系(P＜0.01).结论 含药血清具有正性肌力和负性频率作用.
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大黄牡丹汤含药血清对巨噬细胞释放炎症因子的影响
目的 研究大黄牡丹汤临床治疗炎症性疾病的部分机制.方法 常规制备大黄牡丹汤水煎剂,分大、中、小剂量灌胃干预小鼠并制备含药血清,在96孔板中将含药血清与小鼠腹腔巨噬细胞共孵,收集培养上清,采用Griess比色法检测巨噬细胞NO分泌量、ELISA法检测巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6分泌量.结果 与正常血清对照组比较,大黄牡丹汤含药血清能剂量依赖性地促进正常巨噬细胞分泌NO、TNF-α、IL-1β和IL-6(P ＜0.01);能抑制LPS活化的巨噬细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β(P＜0.05或P＜0.01),但对LPS活化的巨噬细胞分泌IL-6无显著影响(P＞0.05).结论 大黄牡丹汤对活化前后的巨噬细胞分泌炎症因子的干预作用,可能是该方调控炎症反应的主要机制之一.
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瓜蒌含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响
目的 研究瓜蒌水煎剂含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,探讨其抗癌作用机制.方法 采用血清药理学方法制备瓜蒌含药血清,MTT法检测含药血清对HeLa细胞生长的抑制作用,Wright's-Giemsa染色和叮啶橙-EB染色在倒置显微镜和荧光显微镜下观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA Ladder.结果 HeLa细胞经不同剂量的瓜蒌含药血清作用24,48 h后,细胞体外抑制作用明显,呈量效、时效关系;倒置显微镜观察可见HeLa细胞膜皱缩,细胞核固缩,核染色质边缘化,并出现凋亡小体;荧光显微镜下可见晚期的凋亡细胞被染成红色,细胞固缩成球状;琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞发生了DNA断裂,呈梯状条带.结论 瓜蒌含药血清对HeLa细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与诱导细胞凋亡相关.
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黄连素诱导体外培养的肺腺癌A549细胞凋亡
目的 研究黄连素对体外培养的A549增殖和凋亡作用.方法 利用MTT法观察黄连素对A549的增殖影响;荧光显微镜观察细胞形态的改变;琼脂糖凝胶电泳检测DNA的损伤;半定量RT-PCR法分析Bcl-2,Bax,p53mRNA的表达情况;流式细胞仪测定细胞周期的阻滞情况;血清药理学观察大鼠含药血清对A549的作用.结果 黄连素能显著抑制A549增殖,并呈一定的量效和时效关系;细胞的形态发生明显改变,出现凋亡小体;DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型的梯状条带;黄连素能够上调Bax、p53,下调Bcl-2的mRNA的表达;大鼠含药血清能显著抑制细胞生长.结论 黄连素能够抑制A549细胞生长 ,诱导凋亡.
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不同制备方法对西黄丸体外抑瘤作用影响的比较研究
目的 研究不同制备方法对西黄丸体外抑瘤作用的影响.方法 采用3种制备方法,即西黄丸浸提液、煎液、含药血清,MTT法分别测定其对两种人恶性肿瘤细胞株(人原发性肝癌细胞株SMMC7721、人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60)增殖的影响.结果 西黄丸浸提液和煎液均表现出明显的抑瘤作用(P<0.05,P<0.01),且抑瘤效应以浸提液为佳(P<0.05);西黄丸含药血清未表现出抑瘤效应,且含药血清在较高浓度时,对细胞生长表现出促进作用(P<0.01),与空白大鼠血清作用相似.结论 不同的制备方法对西黄丸体外抑瘤作用有明显的影响,西黄丸浸提液和煎液均具有明显的押瘤作用,且浸提液的抑瘤作用优于煎液,古人将西黄丸定位于丸剂,确有其合理性和科学性.血清药理学实验方法是否适合于体外抑瘤实验需进一步探讨.
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穿山龙总皂苷对大鼠T淋巴细胞功能影响的血清药理学研究
目的 用血清药理学方法研究穿山龙总皂苷对大鼠脾淋巴细胞增殖及其分泌IL-2的影响,探讨其可能的作用机理.方法 用MTT法测定不同浓度穿山龙含药血清(分别在培养系中加入20%,10%,5%含药血清)对Con A诱导脾淋巴细胞增殖的影响;用双抗体夹心ELISA法测定不同浓度穿山龙总苷含药血清对Con A诱导脾淋巴细胞分泌IL-2影响.结果 20%和10%穿山龙总皂苷含药血清可抑制Con A诱导的脾淋巴细胞增殖(P＜0.01, P＜0.05),20%和10%穿山龙总皂苷含药血清可抑制Con A诱导的脾淋巴细胞分泌IL-2(P＜0.01,P＜0.05).结论 穿山龙总皂苷含药血清可抑制Con A诱导的大鼠脾淋巴细胞增殖及IL-2的产生.
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补肾调冲含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞体外分泌功能的影响
目的探讨补肾调冲方对大鼠离体卵巢颗粒细胞分泌功能的影响.方法采用血清药理学的方法,以不同含药量的大鼠血清,与体外培养的颗粒细胞共同孵育24 h,用放免法测定培养液中E2,P,IGF-I,TNF-α的浓度.结果补肾调冲含药血清可升调颗粒细胞E2及IGF-I的分泌量.降调P,TNF-α的分泌量.结论补肾调冲方可通过调节卵巢颗粒细胞的分泌功能,进而改善卵巢功能.
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二至丸对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞作用的活性组分构件研究
目的 探讨二至丸免疫调节作用的活性组分构件.方法 运用中药复方组合化学、血清药理学和细胞药理学方法,观察女贞子、墨旱莲系列提取物及其组合物对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞的作用.结果 女贞子乙醇提取物、墨旱莲乙醇提取物、女贞子乙醇提取物+墨旱莲乙醇提取物(1:1)具有较强的丝裂原样作用,可以促进小鼠外周血、脾淋巴细胞增殖和腹腔巨噬细胞的吞噬功能.结论 二至丸对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞作用的活性组分构件是女贞子乙醇提取物+墨旱莲乙醇提取物(1:1).
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人的含药血清用于经方血清药理学研究探讨
中医动物实验模型被认同性的不足与动物血清对人源细胞潜在毒性制约了动物含药血清的运用,而将人的含药血清这一离体标本作用于人源细胞进行经方血清药理学研究,更切合药物在人体内代谢实际情况,有利于从细胞、分子水平阐述中药复方包括经方的作用机制.
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中药血浆药理方法的研究进展
完善和发展中药血浆药理方法是可行的和必要的,越来越多学者主张半体内实验采用血浆进行研究,除非抗凝剂干扰实验.文章从血浆与血清差异性研究、中药药效研究、中药药代动力学研究及中药血浆代谢产物研究对中药血浆药理方法运用进展情况进行综述,并指出其存在的问题和前景展望.
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“补肾益肝活血方”对小鼠骨髓基质细胞成软骨分化相关基因表达的影响
目的:采用血清药理学方法,从基因水平探索中药补肾益肝活血方影响小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)成软骨细胞分化的机制.方法:取45只昆明大鼠随机分为3组,补肾益肝活血方高、低剂量组分别以含14.67×4g生药/kg、14.67g生药/kg的水溶液2mL灌胃,对照组以等量生理盐水2mL灌胃,2次/d,连续给药3d后,腹主动脉采血制备血清.另从4只昆明小鼠骨髓中分离出BMSCs,贴壁法培养传代,取第3代BMSCs分为4组:对照组、阳性组及高、低剂量中药血清诱导组,依次以空白血清、成软骨诱导阳性药及高、低剂量中药血清诱导BMSCs成软骨细胞分化.苏木精-伊红染色观察各组软骨分化情况,基因芯片技术分析成软骨分化基因表达差异谱,并用Real time PCR验证.结果:苏木精-伊红染色显示阳性组及高、低剂量中药血清诱导组均能促进BMSCs成软骨细胞分化.阳性组及高、低剂量中药血清诱导组中软骨细胞相关的金属基质蛋白酶-3(MMP3)、含纤蛋白样表皮生长因子细胞外基质蛋白-1(EFEMPI)均为下调基因(下调倍数＞2).Real time PCR示阳性组及高、低剂量中药血清诱导组中Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、SOX9基因及糖胺聚糖(Aggrecan)的表达均增高,表明三组均有软骨生成,且MMP3、EFEMP1的表达下降,进一步验证了基因芯片结果.结论:补肾益肝活血方含药血清能有效诱导BMSCs成软骨细胞分化,其作用机制很可能与MMP3、EFEMP1介导的通路有关.
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益骨口服液含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响
目的:探讨益骨口服液含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响.方法:取SD大鼠40只,雌雄各半.将大鼠分为A组(高剂量组)、B组(中剂量组)、C组(低剂量组)、D组(空白组),E组(对照组).按照不同的剂量灌胃.灌胃10 d后,制备舍药血清;将从乳鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中,然后应用MTT法、硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察体外培养成骨细胞、碱性磷酸酶及矿化结节的变化.结果:经过10 d益骨口服液灌胃后采血制备的含药血清明显增加了成骨细胞数量(P＜0.05或P＜0.01)、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成明显.结论:证实了益骨口服液含药血清可以促进成骨细胞增殖、分化及矿化.
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红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响
目的:研究中药红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响.方法:取SD大鼠48只,随机将大鼠分为A组(空白组)、B组(倍美力组)、C组(普拉固组)、D、E、F组(红曲高、中、低剂量组)六组,按10 ml/kg分别予以生理盐水、倍美力水溶液(6.25 μg/ml)、普拉固水溶液(0.2 mg/ml)及红曲水提液(1.25g/ml、0.625 g/ml、0.125 g/ml)灌胃.灌胃10天后,制备含药血清;将从乳鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中,然后应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察体外培养成骨细胞、碱性磷酸酶及矿化结节的变化.结果:经过10天红曲水提液灌胃后采血制备的含药血清明显增加了成骨细胞数量(P＜0.01或P＜0.05)、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成,作用随红曲剂量的增加而增加.结论:成功地运用血清药理学的方法,模拟了体内的药理环境;证实了红曲含药血清可以呈剂量依赖性地促进成骨细胞增殖.
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炙甘草汤含药血清对家兔心室肌细胞瞬时外向钾电流的抑制作用
目的:探讨炙甘草汤含药血清对家兔心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)及其动力学的影响.方法:用酶解法分离单个兔心室肌细胞.血清药理学法确定血清中炙甘草汤含药浓度.全细胞膜片钳技术记录炙甘草汤含药血清对兔心室肌细胞Ito的影响前后变化.结果: 20% 炙甘草汤含药血清作用心肌细胞5 min,可使Ito明显减小.指令电位为+50 mV时,可使Ito从(43.3±5.89)pA/pF减少到(7.98±2.78)pA/pF (n=6,P＜0.01).该含药血清对Ito的抑制作用可逆.在5%～40%范围内,该含药血清对Ito的抑制作用为浓度依赖性,IC50的平均值为12.18%.20%该含药血清使各膜电位水平下Ito减小,I-V曲线下移.不改变Ito稳态激活动力学曲线,但使失活动力学曲线显著左移.50% Ito失活曲线点分别为(-41.4±3.5)mV和(-79.9±2.9)mV(n=8,P＜0.05).同时使Ito 失活后恢复时间延长,用药前后50% Ito恢复时间分别为(18.2±2.5)ms和(44.1±2.2)ms(n=8,P＜0.01).结论:炙甘草汤含药血清对家兔心室肌细胞Ito具有显著的抑制作用,这可能是炙甘草汤抗心律失常的可能电生理基础之一.
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含辛伐他汀药物血清对兔血管平滑肌细胞增殖的直接作用及意义
研究表明,他汀类药物在抗动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)中存在许多非调脂机制[1].但目前尚存在一些问题阻碍正式认定他汀类药物通过直接作用于血管壁的抗AS作用[2].本研究采用改进血清药理学方法观察辛伐他汀对体外血管平滑肌细胞增生的影响,探讨辛伐他汀对血管平滑肌细胞的直接作用及意义.
