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壮骨镇痛胶囊含药血浆对破骨细胞骨吸收功能的影响
目的 探讨壮骨镇痛胶囊含药血浆对破骨细胞( osteoclast,oc)骨吸收功能的影响.方法 取1日龄新生SD大鼠四肢骨髓分离培养OC,实验组加入2.5％含药血浆,对照组采用生理盐水对照血浆,运用重氮盐法检测含药血浆对OC分泌抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)的影响；运用甲苯胺蓝染色法观察含药血浆对OC形成骨吸收陷窝的影响.结果 2.5％含药血浆共育组在48h、72h、96h对OC分泌TRAP的量都小于对照血浆组且呈明显的时效关系,与对照血浆组比较,其差异具有统计学意义(P＜0.01).2.5％含药血浆组在48h、72h、96h OC的存活数低于对照血浆组,且呈明显的时效关系,与对照血浆组比较,其差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 壮骨镇痛胶囊含药血浆能够明显抑制OC的活性.
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麻黄汤含药血浆与血清蛋白质(肽)组学比较
目的:通过对麻黄汤含药血浆和血清蛋白质(肽)组学的比较,探讨凝血及相关过程对含药血浆与血清的影响,为中药血浆药理学方法建立提供依据.方法:采用2-DE技术分析含药血浆和血清蛋白质(肽)组学,运用300DPI扫描、PDQuest 7.3.0软件、ESI-MS/MS对重要差异蛋白质点进行鉴定,对比麻黄汤血浆和血清差异蛋白的特征.结果:与BP比较,麻黄汤DCP共识别到32个差异蛋白点,其中26个差异点表达上调,6个差异点表达下调;与BS比较,麻黄汤DCS共识别到18个差异蛋白点,其中14个差异点表达上调,4个差异点表达下调;与DCS比较,麻黄汤DCP共识别到26个差异蛋白点,其中18个差异点表达上调,8个差异点表达下调;去除纤维蛋白原血浆前后比较,麻黄汤DCP共识别到24个差异蛋白点,其中20个差异点表达上调,4个差异点表达下调.成功鉴定出血浆与血清中7个高表达差异蛋白,分别为α-1-AT、ApoE、ApoA-Ⅰ、γ-FIB、HP、FPA和molybdate ABC transporter.结论:麻黄汤DCP与DCS具有明显的蛋白改变,且差异蛋白可能是研究麻黄汤药理作用的有效靶点.通过本研究,为探讨建立中药血浆药理学方法提供实验依据.
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左归降糖益肾方药含药血浆对足细胞损伤模型miRNA-30 d及GPP78表达的影响
目的 探讨左归降糖益肾方药含药血浆处理体外培养的小鼠足细胞对miRNA-30d及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平的影响. 方法 将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白血浆组(25 mmol/L葡萄糖,10%空白血浆)、模型组( D-葡萄糖50 mmo/L联合棕榈酸2 mmo/L,10%空白血浆)、中药含药血浆组( D-葡萄糖50 mmo/L联合棕榈酸2 mmo/L,10%中药含药血浆) ,4-苯基丁酸(4-PBA)含药血浆组( D-葡萄糖50 mmo/L联合棕榈酸2 mmo/L,10%4-PBA含药血浆). 处理48 h后,采用Real-time RT-PCR法检测miRNA-30d表达水平;RT-PCR法、Western blot法检测GRP78 mRNA或蛋白表达水平的变化. 结果 与空白组相比,模型组足细胞miRNA-30 d表达水平下调、GRP78 mRNA和蛋白的表达水平均上调(P<0.01),且miRNA-30d与GRP78 表达水平呈负相关(P<0.05);与模型组相比,中药含药血浆组足细胞miRNA-30d表达水平上调,GRP78 mRNA和蛋白的表达水平均下调,差异均有统计学意义( P<0 .01 ) ,且在下调miRNA-30 d 表达水平方面与4-PBA含药血浆组作用相当. 结论 左归降糖益肾方药含药血浆可以上调miRNA-30 d表达水平,下调GRP78 mRNA和蛋白表达水平,从而改善D-葡萄糖联合棕榈酸诱导的足细胞损伤.
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大鼠灌胃复方五仁醇胶囊后血清和血浆中五味子醇甲和五味子乙素的比较
目的 比较复方五仁醇胶囊主要入血成分在大鼠血清和血浆中的量.方法 灌胃给药制备大鼠含药血清和含药血浆,HPLC法测定五味子醇甲和五味子乙素.Lichrosphere C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,Phenomenex Description C18保护柱(4.0 mm×3.0 mm),甲醇-水梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长254 nm.结果 五味子醇甲、五味子乙索分别在0.051 2～0.614 4和0.039 8～0.477 6μg线性关系良好,低、中、高3个水平五味子醇甲、五味子乙素的平均相对回收率分别为96.72%、101.06%、102.05%和99.03%、100.18%、100.28%.血清和血浆中五味子醇甲平均质量浓度分别为11.063 2、12.883 7μg/mL,五味子乙素平均质量浓度分别为7.490 9、12.590 8μg/mL.结论 复方五仁醇胶囊主要入血成分血浆中的量高于血清.
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威灵仙与柱果铁线莲体内外的高效液相色谱对比分析
目的 对常用中药材威灵仙及其地方品种柱果铁线莲体内外的高效液相色谱(HPLC)进行比较.方法 采用HPLC法分别测定威灵仙、柱果铁线莲、威灵仙含药血浆、柱果铁线莲含药血浆和空白血浆的指纹图谱,并分别进行威灵仙与柱果铁线莲、威灵仙含药血浆与柱果铁线莲含药血浆指纹图谱共有峰的分析.结果 威灵仙与柱果铁线莲药材HPLC指纹图谱有10个共有峰,威灵仙含药血浆与柱果铁线莲含药血浆HPLC指纹图谱有5个共有峰.结论 对威灵仙和柱果铁线莲体的体内外共有峰进行深入的比较分析,将有助于阐明具有相同功效的同属植物可能具有相同的药效物质基础.
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黄芩含药血浆与含药血清中黄芩苷对比研究
目的 从大鼠灌胃黄芩煎液的给药剂量、天数及采血时间方面开展试验,比较含药血浆与含药血清中黄芩苷,初步探讨建立规范的黄芩中药血浆药理方法.方法 大鼠灌胃黄芩煎液后,取其第1、3天给药后的1h,2h及第5天给药后1h、2h、6h、12h含药血浆和含药血清,采用HPLC-MS法,测定含药血浆和含药血清中黄芩苷含量.结果 大鼠灌胃黄芩3～5天取药后1h含药血浆与血清黄芩苷浓度相对较高.结论 为黄芩中药血浆药理方法学给药剂量、时间及采血时间提供了理论依据.
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麦冬有效组分的提取工艺及组分与药效相关性分析
目的 对麦冬总皂苷的提取工艺进行优化,并对正交实验结果和体外药效结果进行相关性分析,通过两者的相关性证明麦冬总皂苷为麦冬中治疗冠心病的主要成分.方法 以麦冬总皂苷为指标,采用正交设计对提取过程中溶媒量、提取时间、提取次数三个因素进行估选研究,优选工艺条件,并采用心肌细胞Na2S2O4缺氧/复氧模型,考察细胞存活率,通过SPSS软件对正交实验结果和细胞药效进行相关性分析.结果 麦冬乙醇提取的佳条件为:12倍量的50％乙醇提取3次,每次1h,通过药效学试验和相关性分析,表明两者呈显著相关性.结论 通过正交设计优化了麦冬提取工艺,经体外药学验证,并通过相关性分析,证明了麦冬总皂苷为麦冬治疗冠心病的主要成分.
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中药血浆药理方法的研究进展
完善和发展中药血浆药理方法是可行的和必要的,越来越多学者主张半体内实验采用血浆进行研究,除非抗凝剂干扰实验.文章从血浆与血清差异性研究、中药药效研究、中药药代动力学研究及中药血浆代谢产物研究对中药血浆药理方法运用进展情况进行综述,并指出其存在的问题和前景展望.
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活血散结方含药血浆对视网膜色素上皮细胞 毒性作用的研究
目的 制备活血散结方含药血浆,并研究其不同浓度对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的毒性作用.方法 以成年健康家兔为对象,制备活血散结方含药血浆.将提取的兔原代RPE细胞分9个组,分别为:空白对照组、正常血浆组、5％含药血浆组、10％含药血浆组、20％含药血浆组、40％含药血浆组、60％含药血浆组、80％含药血浆组、100％含药血浆组,予以相对应浓度的含药血浆干预,CCK8法检测含药血浆对兔RPE细胞毒作用.结果 活血散结方各浓度含药血浆对RPE细胞有抑制作用,其中5％～20％含药血浆对RPE细胞有较弱的抑制作用,但与正常血浆比较,抑制率差异无统计学意义(P>0.05);而40％～100％含药血浆对RPE细胞生长有明显的抑制作用,与正常血浆比较,抑制率差异有统计学意义(P<0.05).结论 活血散结方含药血浆对RPE细胞有一定的抑制作用,抑制程度与含药血浆浓度成量效关系,可以考虑选择5％～20％含药血浆浓度作为后续实验研究的干预浓度.
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壮骨镇痛胶囊对乳腺癌细胞体外增殖和迁移的抑制效应研究
目的 研究壮骨镇痛胶囊对高转移人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移的影响.方法 采用血浆药理学方法制备壮骨镇痛胶囊含药血浆,采用MTT法检测不同浓度含药血浆对MDA-MB-231细胞生长增殖的影响;采用划痕法测定其对MDA-MB-231细胞迁移的影响.结果 当正常大鼠血浆浓度≤15.0%时,对MDA-MB-231细胞生长增殖无明显影响,差异无统计学意义(P＞0.05);壮骨镇痛胶囊含药血浆浓度在5.0%～15.0%范围内,对MDA-MB-231细胞生长增殖均有显著抑制作用,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05),该药对MDA-MB-231细胞的高非毒性浓度为2.5%:当壮骨镇痛胶囊含药血浆浓度为5.0%和1.25%时能显著抑制乳腺癌细胞的迁移,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05),含药血浆浓度为0.63%时对细胞迁移无显著抑制作用,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 5.0%～15.0%壮骨镇痛胶囊含药血浆对体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长增殖具有抑制作用,壮骨镇痛胶囊含药血浆能显著抑制MDA-MB-231细胞迁移,且其作用与浓度相关.
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肿节风总黄酮含药血浆对大鼠骨髓巨核细胞增殖及TPO、TGF-β1含量的影响
目的:探讨肿节风总黄酮含药血浆对大鼠骨髓巨核细胞增殖及TPO、TGF-β1含量的影响.方法:分别一次性灌胃给予SD大鼠肿节风总黄酮0.39、2.0 g/kg,于给药后20、40、60 min眼眶取血收集肿节风总黄酮含药血浆.采用兔抗大鼠血小板相关抗体(稀释倍数为128倍)建立大鼠骨髓巨核细胞增殖障碍模型,考察肿节风总黄酮0.39、2.0 g/kg含药血浆对大鼠骨髓巨核细胞增殖及培养上清液中TPO、TGF-β1含量的影响.结果:(1)兔抗大鼠血小板相关抗体可显著降低大鼠骨髓巨核细胞增殖;相对于空白血浆组,肿节风总黄酮0.39、2.0 g/kg含药血浆可显著促进大鼠骨髓巨核细胞的增殖.(2)兔抗大鼠血小板相关抗体可显著降低大鼠骨髓巨核细胞培养体系中TPO含量,显著增加TGF-β1含量;相对于空白血浆组,肿节风总黄酮0.39、2.0 g/kg含药血浆可显著增加大鼠骨髓巨核细胞培养体系中TPO含量,显著降低TGF-β1含量.结论:肿节风总黄酮0.39、2.0 g/kg含药血浆可显著促进大鼠骨髓巨核细胞的增殖,可能与增加大鼠骨髓巨核细胞培养体系中TPO含量,降低TGF-β1含量等有关.
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复方五仁醇胶囊入血成分对原代培养肝细胞损伤的保护作用
目的:研究复方五仁醇胶囊含药血清对原代培养盱细胞损伤的保护作用.方法:建立CCl4诱导的大鼠用细胞损伤模型,采用L8(27)正交设计给药和取血方案,制备大鼠含药血清或血浆,并考察含药血清或血浆对MTT和培养上清液中ALT的影响.结果:复方五仁醇胶囊含药血清或血浆对CCl4诱导的肝细胞损伤具有保护作用,不同给药方式及取血时间对作用有显著影响,且两者之间有交互作用,血浆略优于血清,动物是否造模对作用无明显影响.结论:复方五仁醇胶囊连续灌胃给药3天,每天上下午各给药1次,末次给药2h后获得的大鼠血浆对CCl4诱导的肝细胞损伤有良好的保护作用.
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9种中药多糖含药血浆对小鼠腹腔Mφ释放细胞因子的影响
目的 研究黄芪等中药多糖干预机体免疫功能的部分机制.方法 常规提取黄芪、防风、当归、柴胡、枸杞、地黄、板蓝根、蒲公英、香菇等9味中药多糖组份,分别按大、中、小剂量罐胃给药,制备小鼠含药血浆；选择浓度为20％的含药血浆干预体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ),并用ELISA法检测Mφ释放IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等细胞因子(CK)的水平.结果 除柴胡多糖外,其余8种中药多糖含药血浆对IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α中1个或多个细胞因子水平具有明显升高或降低作用(P＜0.05或P＜0.01),且具有浓度差异性(P＜0.05或P＜0.01).结论 黄芪等8味中药调节机体免疫功能的机制,可能与这些中药的多糖组份在体内干预巨噬细胞释放IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等细胞因子有关.
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熏硫与未熏硫白芷的体内外HPLC图谱对比分析
目的:对熏硫与未熏硫白芷体内外的高效液相色谱进行比较.方法:采用HPLC法分别测定熏硫与未熏硫白芷药材、熏硫与未熏硫白芷含药血浆和空白血浆指纹图谱,并分别进行熏硫与未熏硫白芷药材,未熏硫白芷与含药血浆指纹图谱的分析.结果:硫黄熏蒸对白芷香豆素类成分影响较大,熏硫与未熏硫白芷体内外HPLC指纹图谱结果类似.结论:为白芷药效物质基础的研究奠定了基础.
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中药含药血浆和血清对DMEM培养液渗透压和PH值的影响
目的:观察不同来源的单味和复方中药延胡索、水蛭、朱砂、四物汤的含药血浆和含药血清对DMEM培养液的渗透压和PH值影响,探讨中药血浆药理方法体外反应体系构建.方法:通过在DMEM培养液中加入延胡索、水蛭、朱砂、四物汤的合药血浆与含药血清,按照细胞培养的常规条件进行培养,分别测定其培养第1、2、4、7天后培养液的冰点渗透压和PH值.结果:随着培养时间的延长,各组别培养液的渗透压和PH值逐渐增加.但与同期对照组比较,加入含药血清与含药血浆培养液的渗透压和PH值差异不具有显著性(P＞0.05).同期相同药物和剂量的含药血浆与含药血清培养液的渗透压和PH值之间差异同样不具有显著性(P＞0.05).结论:不同来源的单味和复方中药的含药血浆与含药血清对细胞培养液的渗透压和PH值影响基本一致,提示中药半体内实验中单味中药或复方的含药血浆和含药血清均不影响细胞培养体系的渗透压和PH值.
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活血散结中药复方含药血浆对PDGF干预下兔RPE细胞增殖的影响
目的:观察活血散结中药复方含药血浆对血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)干预下兔RPE细胞增殖的影响.方法:酶消化法获取RPE原代细胞,进行RPE细胞的原代培养和传代;制备活血散结中药复方含药血浆;选取第4代兔RPE细胞为实验细胞,PDGF低、中、高剂量(5、10、20μg/L)干预48h后,CCK-8法检测并选取适宜细胞实验干预浓度;建立PDGF干预下RPE细胞增殖模型.实验分组为空白对照组(DMEM)、 正常血浆组、PDGF(10μg/L)组、PDGF(10μg/L)+AG1296(10μmol/L)组、PDGF(10μg/L)+10％ 含药血浆组,PDGF(10μg/L)+20％含药血浆组,分别加入相应处理因素干预24h后,Transwell法测定兔RPE细胞迁移力;而干预48h后,CCK-8法测定兔RPE细胞的细胞活力OD值.结果:10％ 和20％ 浓度的活血散结中药复方含药血浆能有效抑制PDGF干预下RPE细胞的细胞活力、细胞迁移.结论:活血散结中药复方含药血浆能够抑制PDGF干预下兔RPE细胞增殖,这可能是其有效治疗增殖性玻璃体视网膜病变的机制之一.
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密蒙花总黄酮含药血浆对干眼症细胞模型Bax mRNA及Bcl-2mRNA表达的影响
目的:观察密蒙花总黄酮含药血浆对干眼症细胞模型中泪腺上皮细胞Bax mRNA及Bcl-2 mRNA表达的影响.方法:将培养生长状态良好的泪腺上皮细胞,随机分为无雄激素培养黄酮治疗组(以下简称密蒙花总黄酮组),含雄激素培养对照组(以下简称雄激素组),无雄激素培养空白组(以下简称空白组).分别加入含密蒙花总黄酮血浆、丙酸睾酮、含空白血浆开始进行干预.建立干眼症细胞模型.用Trizol试剂提取细胞总RNA.RT-PCR法检测泪腺上皮细胞中Bax mRNA及Bcl-2 mRNA的表达.结果:密蒙花组、雄激素组能够抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA的表达,与空白组比较差异有显著性(P＜0.01);密蒙花组Bax mRNA的表达低于雄激素组,比较差异有显著性(P＜0.01).密蒙花组、雄激素组Bcl-2 mRNA的表达均高于空白组,比较差异有显著性(P＜0.01);密蒙花组Bcl-2 mRNA的表达高于雄激素组,比较差异有显著性(P＜0.01).结论:密蒙花总黄酮含药血浆作用于雄激素水平下降所致干眼症的细胞模型可抑制Bax mRNA的表达,使Bax mRNA的表达量降低,同时促进Bcl-2 mRNA的表达,使Bcl-2 mRNA的表达量增加.密蒙花总黄酮含药血浆很可能是通过抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA及促进Bcl-2 mRNA表达的途径而达到抑制细胞凋亡的作用.
