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灵芪胶囊体外对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响
目的:观察灵芪胶囊(LQC)体外对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响.方法:体外人肺腺癌A549细胞经LQC含药血清处理后,采用MTT比色法测定其抑制率;逆转录-聚合酶链反应检测其凋亡相关基因bcl-2、bax的mRNA表达;Wright-Giemsa染色法观察其形态变化.结果:不同浓度LQC含药血清对A549细胞增殖具有抑制作用,且与浓度呈正相关;LQC含药血清能使bcl-2基因的mRNA表达水平显著下降、bax基因的mRNA表达水平显著增强;同时,细胞形态发生改变.结论:LQC含药血清可调控肿瘤细胞凋亡的相关基因,这可能是其产生抗肿瘤生物学效应的基础之一.
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瑞香狼毒水提物小鼠的药物血清对K562细胞增殖的影响
目的:研究瑞香狼毒(SCA)抗癌作用机理.方法:小鼠SCA灌胃给药后采集血清,处理体外培养的人红白血病K562细胞,测定其MTT转化及克隆形成率.结果:SCA小鼠药物血清显著降低K562细胞MTT转化率和克隆形成率,并与给药剂量呈正相关,给药2h～4h时的药物血清表现出更强的抑制肿瘤细胞增殖作用.结论:口服SCA后机体吸收入血的有效成分的直接抑制癌细胞增殖作用可能是其重要抗癌机理之一.
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心脉神口服液抗食饵性动脉粥样硬化的效应研究
动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管系统中常见的一种病理现象和过程,也是心、脑血管疾病的重要病理基础.寻找有效抗AS的药物一直是备受关注的课题.现代医学认为AS的主要病理改变是巨噬细胞浸润、平滑肌细胞增生和迁移、氧化与抗氧化失衡、胶原合成增多和细胞内脂质沉积.中医理论认为AS为"瘀血、痰浊"范畴、属本虚标实之证.中医预防、治疗AS的基本法则是标本兼治、补泻并施和行滞通脉、益气活血、疏肝理气、化痰、消瘀等.随着天然药物和自然疗法的兴起,中药作为天然传统药物中的佼佼者已重新受到重视和青睐.心脉神口服液(XinMeiShen oral liquid, XMSol)组方为第三军医大学新桥医院何作云教授的祖传验方,主要由黄芪、何首乌等组成,在临床实践中经过反复验证、不断完善并采用新技术加工而成.临床主要用于治疗高脂血症及动脉粥样硬化性疾病.本研究采取分组随机对照的方法,运用生物化学、免疫细胞化学、放射免疫学、病理学(电镜)、血清药理学、核酸分子杂交等多种方法,较系统地观察心脉神口服液对实验性高脂血症及AS形成过程中血脂、脂质过氧化、前列腺素代谢等变化,以及对血管壁形成粥样斑块、平滑肌细胞增殖的影响.从而评估了心脉神口服液对实验性AS的预防和治疗作用并探讨其作用机理,为心脉神口服液抗AS的临床应用提供一定的理论依据.
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引经药对P-糖蛋白的影响
目的:研究多种引经药对P-糖蛋白的影响,探讨该类药物的共同作用机制.方法:按血清药理学方法制备含药血清;通过MTT法,观察含药血清对长春新碱所致Hela细胞和MDCK细胞毒性的影响.结果:在所选取的受试药物中,柴胡、升麻、川芎、丹皮、黄连、黄柏、知母等多种药物均能增强长春新碱所致细胞毒性,并呈一定的时间和剂量依赖关系.结论:多种引经药均可抑制P-糖蛋白的外排作用.
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加味桃核承气汤含药血清对胰岛素诱导兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用
目的:探讨加味桃核承气汤含药血清对胰岛素诱导兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用.方法:采用兔主动脉平滑肌细胞株(SMC),以胰岛素(RI)诱导SMC增殖,制备桃核承气汤不同配伍组方含药血清,MTT法观察各组对RI诱导SMC增殖的抑制作用,以罗格列酮及美迪康作为对照组,探讨各组在糖尿病大血管病变发生与发展中可能的作用.结果:RI诱导SMC增殖试验确定RI终浓度为300mu/L;加味桃核承气汤含药血清对RI诱导SMC增殖的抑制作用试验显示,活血+泻热通下组、桃核承气汤组、罗格列嗣组增殖抑制作用十分显著(P＜0.01),以活血+泻热通下组抑制率高(39.8%).美迪康组、泻热通下组及益气养阴组增殖抑制作用不明显(P＞O.05).结论:加味桃核承气汤可能通过抑制RI诱导SMC增殖作用抗糖尿病动脉粥样硬化所致的大血管病变,本方抑制平滑肌细胞增殖的有效成份可能存在于活血+泻热通下组中.
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化湿利水泄浊法对培养SHR血管平滑肌细胞游离钙的影响
目的:研究化湿利水泄浊法治疗高血压血管重构的机理.方法:组织贴块法行自发性高血压大鼠(SHR)主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的分离培养,并以倒置显微镜、α-SM actin免疫组化法鉴定;采用MTT法观察各含药血清对VSMC增殖的抑制作用,荧光染料FURA-2/AM标记法观察含药血清对VSMC游离钙浓度([Ca2+]i)的影响,并与平肝潜阳法、西药依那普利比较.结果:与模型组比较各含药血清对VSMC增殖(除平肝潜阳组)、[Ca2+]i均有明显的抑制作用(P＜0.05),其中化湿组作用更为显著(P＜0.01).结论:化湿利水泄浊法对培养SHR的VSMC的增殖及[Ca2+]i有明显抑制作用,可能是该药改善高血压血管重构的作用环节之一.
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补肾化瘀解毒方药物血清对肺癌耐药细胞内Ca2+浓度影响的研究
为了探讨补肾化瘀解毒方对肺癌耐药细胞内Ca2+浓度的影响,选择人肺腺癌耐药株A549/DDP为模型,采用荷瘤动物血清药理及流式细胞法,并与正常动物含药血清为对照,结果补肾化瘀解毒方荷瘤动物含药血清与正常动物药物血清均能显著降低肺癌A549/DDP耐药细胞内Ca2+浓度(P＜0.001),但荷瘤动物药物血清降低作用显著高于正常动物药物血清(P＜0.05).表明补肾化瘀解毒方药物血清有阻止肺癌耐药细胞内Ca2+的内流或释放作用,但荷瘤动物药物血清与正常动物药物血清具有差异性.
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miR-7介导加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞增殖和促进凋亡的研究
目的:研究miR-7是否介导加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞增殖和促进B16恶性黑色素瘤细胞凋亡的过程.方法:应用血清药理学方法给药,37℃、5％ CO2的恒温培养箱中培养B16恶性黑色素瘤细胞,收集对数期细胞,终浓度10％的小鼠含药血清,作用24 h.实验分为空白对照组、血清对照组、4.61 g/kg、9.22 g/kg和18.44 g/kg加味四君子汤含药血清组,每组合5个样本数,应用Real-time PCR法检测miR-7的内源性表达;分别转染miR-7模拟物和miR-7抑制物到B16恶性黑色素瘤细胞,应用Real-time PCR法检测miR-7模拟物和miR-7抑制物的转染效率、应用MTT法、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测miR-7对B16恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响.结果:加味四君子汤含药血清作用24h,与空白对照组和血清对照组相比,9.22g/kg和18.44 g/kg加味四君子汤含药血清组B16恶性黑色素瘤细胞中miR-7表达升高;miR-7模拟物和miR-7抑制物成功转染到B16恶性黑色素瘤细胞中,其Relative Conc值分别是(6.47±0.18)和(0.20±0.01),与空白对照组、血清对照组和阴性对照组相比分别显著升高和显著降低;与空白对照组和血清对照组及阴性对照组相比,miR-7模拟物组的抑制率显著升高(53.61±2.11)％,miR-7抑制物组抑制率显著降低(6.76±0.48)％;与空白对照组和血清对照组及阴性对照组相比,miR-7模拟物组的凋亡率显著升高(34.30±2.13)％,miR-7抑制物组凋亡率显著降低(5.80±0.78)％.结论:miR-7介导加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞增殖和促进B16恶性黑色素瘤细胞凋亡的过程,miR-7可能是加味四君子汤抗恶性黑色素瘤的重要分子之一.
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加味四君子汤含药血清对B16恶性黑色素瘤细胞NF-κB(p65)活性和表达的影响
目的:研究加味四君子汤含药血清对转录因子核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65的活性和表达的影响.方法:应用血清药理学方法给药,37℃、5％ CO2的恒温培养箱中培养B16恶性黑色素瘤细胞,收集对数期细胞,小鼠含药血清终浓度为10％,作用24h.实验分为空白对照组、血清对照组、4.61 g/kg、9.22 g/kg、18.44 g/kg加味四君子涛含药血清组和5 mg/L顺铂组,每组含5个样本数.分别应用Real-Time PCR法、EMSA法、Westem blot法检测加味四君子汤含药血清对B16恶性黑色素瘤细胞活性和表达的影响.结果:加味四君子汤含药血清作用24 h后,呈剂量依赖式降低NF-κB(p65)的活性和基因蛋白表达,与空白对照组和血清对照组相比,9.22 g/kg中药组、18.44 g/kg中药组和5 mg/L顺铂组分别显著降低NF-κB(p65)活性、mRNA及蛋白表达(P＜0.05),但5 mg/L顺铂组活性、mRNA及蛋白表达低于9.22 g/kg中药组,高于18.44 g/kg中药组.结论:加味四君子汤含药血清能够降低恶性黑色素瘤细胞NF-κB(p65)的活性和表达水平,NF-κB(p65)可能是加味四君子汤含药血清抗恶性黑色素瘤的机制之一.
关键词： 加味四君子汤 血清药理学 B16恶性黑色素瘤细胞 NF-κB(P65) -
加味四君子汤含药血清对B16恶性黑色素瘤细胞侵袭和MMP2、MMP9表达的影响
目的:研究加味四君子汤含药血清对恶性黑色素瘤细胞B16侵袭及其相关机制的研究.方法:实验分为空白对照组、血清对照组、加味四君子汤4.61 g/kg、9.22 g/kg、18.44g/kg和顺铂5μg/ml组.分别应用MTT法确定药物佳作用时间;Transwell实验检测B-16细胞侵袭能力,应用Western Blot方法检测基质金属蛋白酶(metalloprotease,MMP)2和9蛋白的表达.结果:加味四君子汤以剂量依赖方式抑制B16恶性黑色素细胞增殖,作用24h为佳作用时间;与空白对照组和血清对照组相比,9.22 g/kg中药组、18.44g/kg中药组、5μg/ml顺铂组分别使B16细胞的侵袭能力显著降低,分别显著降低MMP2和MMP9蛋白表达水平,且两者呈现剂量依赖式降低,但5μg/ml顺铂组侵袭能力和MMP2和MMP9蛋白表达低于9.22 g/kg中药组,高于18.44g/kg中药组.结论:加味四君子汤含药血清能显著降低B16恶性黑色素瘤细胞侵袭,并且能够显著降低与B16恶性黑色素瘤细胞侵袭相关的蛋白MMP2和MMP9表达,提示加味四君子汤可能在抑制肿瘤侵袭转移中起着重要作用.
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鹅不食草挥发油抗变态反应血清药理学研究
目的:用血清药理学方法研究鹅不食草挥发油对抗原诱导RBL-2H3细胞释放组胺、β-氨基已糖苷酶,对刀豆蛋白(Con-A)诱导小鼠脾细胞增殖、诱导脾淋巴细胞分泌IL-4的影响,探讨其抗变态反应的可能机制.方法:ELISA法测定鹅不食草挥发油含药血清对抗原诱导RBL-2H3释放组胺、β-氨基已糖苷酶的影响;MTT法测定鹅不食草挥发油含药血清对Con-A诱导脾细胞增殖的影响,ELISA法测定鹅不食草挥发油含药血清对Con-A诱导脾淋巴细胞分泌IL-4的影响.结果:与空白血清相比,鹅不食草挥发油0.5 ～2h含药血清(9g/kg生药量,10％含药血清)均具有抑制抗原诱导RBL-2H3释放组胺、β-氨基已糖苷酶,抑制Con-A诱导小鼠脾细胞增殖、分泌IL-4的作用.结论:鹅不食草挥发油抗变态反应作用机制可能与抑制炎症介质释放,抑制细胞免疫功能有关.
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血清药理学方法研究千里光抗大肠埃希菌的作用机制
目的:应用血清药理学方法研究千里光抗大肠埃希茵的作用及其机制.方法:从千里光中分离出黄酮类化合物,然后通过给小鼠灌胃制备千里光水浸液的含药血清和黄酮类化合物的含药血清.用扫描电镜观察各含药血清对大肠埃希茵超微结构的影响,用同位素前体参入试验观察各含药血清对大肠埃希茵生物合成的影响.结果:与阴性对照血清相比,2种含药血清作用后的大肠埃希菌,其形态和超微结构均发生明显的变化,表现为茵体表面粗糙,部分菌体出现缢痕,并在缢痕处缢缩或断裂等变化;DNA、RNA、蛋白质和肽聚糖合成也受到明显的抑制.结论:千里光的抗大肠埃希茵作用机制可能是通过抑制细茵的DNA、RNA、蛋白质和肽聚糖的合成有关,其作用的有效成份可能是黄酮类化合物.
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益肝康拆方药物血清对肝星状细胞TGF-β1及受体影响的研究
目的:探讨益肝康抗肝纤维化作用机制、配伍意义.方法:分别制备益肝康及其拆方--丹参小复方纯化浸膏、正常大鼠及肝纤维化大鼠药物血清,温育体外培养的HSC,RT-PCR和Western blot技术检测TGF-β1 mRNA及蛋白表达,RT-PCR和流式细胞技术检测TβR-I mRNA及蛋白表达.结果:益肝康及丹参小复方纯化浸膏、正常大鼠和肝纤维化大鼠药物血清均可以抑制TGF-β1与受体TβR-I基因及蛋白表达,益肝康作用优于小复方,肝纤维化大鼠药物血清作用优于正常大鼠药物血清.结论:益肝康及丹参小复方抗肝纤维化的主要机制之一是抑制TGF-β1与TβR-I基因和蛋白表达,益肝康全方更具配伍意义,肝纤维化大鼠药物血清与正常大鼠药物血清药效学不同.
关键词： 益肝康 肝纤维化 肝星状细胞 转化生长因子beta-1 血清药理学 -
补肾调冲方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌及其FSHR mRNA表达的影响
目的:运用血清药理学方法观察补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌功能及其FSHR mRNA表达的影响.方法:在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入空白或含药血清,培养48小时后,用放免法测定各组颗粒细胞培养液中E2、P含量,流式细胞仪测定各组颗粒细胞的细胞周期分布及增殖指数(PI),用Real-time RT-PCR方法实时定量测定颗粒细胞FSHR mRNA的表达量.结果:补肾调冲方血清组E2、P含量较空白血清组均明显升高,G0/G1期细胞均明显减少,而S期细胞及PI值则明显增高;颗粒细胞FSHR mRNA表达量明显增多,且随剂量增加而作用增强.结论:补肾调冲方含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞的增殖与甾体激素分泌功能以及FSHR mRNA的表达,从而增强含药血清中所含促性腺激素对颗粒细胞的作用及颗粒细胞对促性腺激素的反应性.这也是补肾调冲方调节卵巢功能的作用机理之一.
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芪灵益肝煎及其CO2超临界萃取液对小鼠腹水型肝癌细胞株Hca-F25/CL-16A3端粒酶表达的影响
利用血清药理学方法,以环磷酰胺(CTX)为阳性对照,用倒置相差显微镜观察芪灵益肝煎含药血清作用后H22细胞形态学改变,用MTT法测抑瘤率,采用免疫组化技术探讨芪灵益肝煎及其CO2超临界萃取液对H22细胞TERT表达的影响,结果表明:芪灵益肝煎含药血清作用后H22细胞生长明显受抑,细胞涂片免疫组化表明各含药血清组均能下调TERT亚单位.
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清肝化瘀方药含药血清对肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响
目的:观察用两种方法制备的清肝化瘀方药含药血清对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:中药血清A为正常状态下大鼠的含药血清,中药血清B为病理状态下大鼠的含药血清,应用MTT比色法比较两种中药血清对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用.用流式细胞术检测中药血清B对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:中药血清A对肝癌细胞SMMC-7721增殖有轻微的抑制作用.中药血清B对肝癌细胞有明显的抑制作用,两种血清的抑制效应均呈时间依赖性.中药血清B还能促进肝癌细胞凋亡,使细胞滞留于G0/1期,降低SPF和PI.结论:病理状态下长期给药制备的清肝化瘀方药含药血清能够明显抑制人肝癌细胞增殖,促进其凋亡.
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软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤的保护作用
目的:研究软脉胶囊对神经细胞PC12缺氧损伤的影响.方法:采用血清药理学方法,研究软脉胶囊含药血清对连二亚硫酸钠引起的PC12细胞缺氧损伤的影响.结果:软脉胶囊可明显对抗缺氧引起的PC12细胞形态改变,降低LDH的漏出,增加细胞的存活率.结论:软脉胶囊含药血清对缺氧损伤引起的PC12细胞损伤具有保护作用.
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固肾止漏胶囊对大鼠子宫平滑肌收缩功能的影响
目的:观察固肾止漏胶囊含药血清对大鼠子宫平滑肌收缩功能的影响.方法:连续给药10天获取含药血清观察其对于大鼠离体子宫收缩活动的影响.结果:固肾止漏胶囊含药血清可使大鼠离体子宫收缩率明显增加,收缩频率明显增加.结论:固肾止漏胶囊有增加子宫平滑肌收缩力的作用,可能是其治疗崩漏的机理之一.
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冠心苏合胶囊含药血清对乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用
目的:采用血清药理学方法探讨冠心苏合胶囊对过氧化氢(H2O2)致心肌细胞过氧化损伤的保护作用.方法:血清药理学方法制备含药血清(0.8g生药/kg),体外培养原代乳鼠心肌细胞,随机分为正常对照组、空白血清对照组、H2O2损伤模型组、冠心苏合低、中、高剂量(5％,7.5％,10％)干预组,建立H2O2氧化损伤模型,以不同剂量的冠心苏合含药血清进行干预.MTT法测定细胞存活率,并检测各组心肌细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)及过氧化氢酶(CAT)的活性.结果:100μmol/L H2O2处理2h,原代乳鼠心肌细胞存活程度适中,模型制备的重复性较好;与H2O2单纯损伤组和空白血清对照组比较,冠心苏合低、中、高(5％,7.5％,10％)剂量干预组的心肌细胞有较高存活率(P＜0.01),且呈现一定的剂量依赖性;与正常细胞相比,H2O2损伤后MDA、LDH含量明显升高,T-SOD、CAT活性降低,而冠心苏合含药血清可剂量依赖性的降低损伤细胞MDA、LDH含量,升高CAT、T-SOD活性,结果具有显著统计学差异.结论:冠心苏合胶囊能够提高H2O2诱导的原代乳鼠心肌细胞存活率;下调MDA、LDH水平,上调CAT、SOD水平,对氧化损伤的心肌细胞起保护作用
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耳聋左慈汤含药血清对庆大霉素致小鼠耳蜗毛细胞损伤的拮抗作用
目的:用血清药理学方法观察耳聋左慈汤对庆大霉素(Gentamicin,GM)所致小鼠耳蜗毛细胞损伤的作用.方法:完整分离小鼠耳蜗基底膜,平铺于鼠尾胶上,无血清培养液培养24小时后,正常组更换含10%空白血清的培养液,模型组同时加入0.3mM GM和10%空白血清,耳聋左慈汤药物血清组同时加入0.3 mM GM和10%含药血清,继续培养24小时,免疫荧光染色后荧光显微镜下进行全耳蜗毛细胞计数.用全耳蜗毛细胞损失率评价耳聋左慈汤含药血清对GM所致耳蜗毛细胞损伤的作用.结果:正常耳蜗毛细胞排列整齐,无缺失,而0.3mM GM模型组耳蜗毛细胞大量缺失,外毛细胞损失率(41.8±1.9)%高于内毛细胞损失率(16.8±1.8)%;耳聋左慈汤药物血清可降低耳蜗毛细胞的损失率,内、外毛细胞损失率与模型组比较差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:耳聋左慈汤含药血清对GM造成的耳蜗毛细胞损伤有拮抗作用.
