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小鼠牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因敲除载体的构建
目的:构建用于小鼠牙本质涎磷蛋白基因敲除的载体;方法:PCR获得上、下游两条同源臂,将同源臂和正、负双向筛选标志按一定顺序克隆到载体pBluescript中,序列测定确认正确后,NotI酶切使载体线性化;结果:载体中各部分的排列顺序与预期一致;结论:获得了小鼠牙本质涎磷蛋白基因敲除的载体,为以后的工作打下了基础.
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Smad3对小鼠牙本质涎磷蛋白启动子片段的调控
目的:在小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中分析DSPP启动子活性,了解TGF-1的信号分子Smad3对小鼠牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)基因启动子片段的调控作用.方法:瞬时转染和报告基因检测.结果:TGF-131可以下调pGL3LUC-Pdspp-410-176 bp和pGL3LUC-Pdspp-410～+54 bp的活性,Smad3可以加强这种下调作用;它们对pGL3LUC-Pdspp-195-+54 bp的调控作用不明显.结论:TGF-β1可以通过Smad3信号通路对DSPP启动子进行调控;在DSPP启动子-410～-176 bp之间,存在着其它的启动元件,促使其启动活性.在DSPP启动子-195～+54 bD区域内,存在DSPP抑制子元件,发挥负调节作用,导致启动活性下降或丧失.
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DSPP基因启动子不同片段启动活性的对比分析
目的:对比分析牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)基因启动子不同片段的启动活性.方法:选择小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23为实验细胞,利用含DSPP基因启动子不同片段的真核表达载体,采用报告基因方法观察DSPP基因启动子不同片段的启动活性.结果:在MDPC-23细胞中,DSPP基因启动子不同片段的真核表达载体均不同程度地表现了启动活性.其启动活性有差异(P＜0.01).结论:DSPP基因启动子不同片段的启动活性有差异,其活性变化反映位于-95 bp～54 bp、-410 bp～-195 bp、-1243 bp～-791 bp、-1447 bp～-1243 bp、-3519 bp～-2475bp区存在潜在的增强子;-195 bp～-95 bp、-670 bp～-410 bp、-2475 bp～-1447 bp区存在潜在的抑制子.进一步明确了DSPP基因启动子的结构,为今后研究DSPP基因的特异性表达奠定基础.
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Cbfa1在Smad3调控牙本质涎磷蛋白基因转录过程中的作用
目的:研究转录因子核心结合因子a1(Cbfa1)在Smad3分子调控牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因表达中的作用.方法:培养MDPC-23细胞,通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Cbfa1对TGF-β1调控目的基因dspp转录的影响.结果:Cbfa1可以抑制DSPP启动子的活性,TGF-β1可以降低Cbfa1对DSPP的抑制作用,当Cb-fa1与Smad3共同作用于DSPP启动子时,对DSPP转录活性的抑制作用更强.Cbfa1的两个亚型Osf2和PEBP2αA在DSPP转录调控过程中可能发挥的功能不完全一致.结论:转录因子Cbfa1可以与Smad3共同作用,调控DSPP基因启动子的转录表达.
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牙本质涎磷蛋白在小鼠体外培养软骨细胞中的表达
目的:探讨牙本质涎磷蛋白(Dentin Sialophosphoprotein,DSPP)在体外培养的软骨细胞中的表达.方法:采用免疫组化方法,检测培养的第3代小鼠鼻软骨细胞中DSPP的表达.结果:培养细胞胞浆呈阳性着色.结论:DSPP可在体外培养的软骨细胞中表达.
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小鼠牙本质涎磷蛋白(DSPP)特异性启动子的克隆和序列分析
目的:获得小鼠牙本质涎磷蛋白(DSPP)编码序列上游约1.6 kb的特异性启动子.方法:按MacDougall报道设计一对引物,提取小鼠胚胎干细胞基因组DNA作为模板,PCR获得大小约为1.6 kb的DNA片段,将该片段克隆并进行序列分析.结果:所得到的片段是DSPP的特异性启动子,其序列与文献报道有一定差异,但转录因子的结合位点均未发生突变.结论:成功获得小鼠DSPP的特异性启动子,为进一步的研究打下基础.
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牙本质涎磷蛋白在小鼠鼻软骨表达的原位杂交研究
目的:目的:检测小鼠发育过程中牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,SPP)在鼻软骨的表达状况.方法:采用原位杂交技术,观测Balb/C小鼠出生后1、3、6、8 d鼻软骨中DSPP mRNA的表达.结果:DSPP在1-6 d小鼠的鼻软骨中均有表达.其中,3 d时表达强,8 d时转为阴性.结论:DSPP在小鼠鼻软骨中的表达具有时空特异性.
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MDPC-23细胞内核心结合因子A1增强Smad3调控牙本质涎磷蛋白基因的表达
目的:研究转录因子核心结合因子A1(CBFA1)在Smad分子调控牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因表达中的作用.方法:细胞培养,基因转染和报告基因检测.结果:转化生长因子β1(TGF-β1)抑制DSPP基因启动子活性的表达.Smad3过表达显著增强了TGF-β1对DSPP基因表达的转录抑制.单独过表达CBFA1对DSPP基因启动子活性无明显影响.但是,CBFA1与Smad3共转染显著增强Smad3对DSPP基因启动子的抑制作用,在TGF-β1存在时,其作用进一步增强.结论:在成牙本质细胞系MDPC-23内,CBFA1可能作为一种转录因子协同调控Smad3对DSPP基因转录的调控.
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瘦素对人根尖乳头干细胞成骨/成牙本质相关基因表达的影响
目的 探讨瘦素(leptin)对人根尖乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)增殖及成骨/成牙本质相关基因表达的影响,为临床年轻恒牙根尖持续发育的研究提供实验基础.方法 采用人根尖乳头组织块培养法获得hSCAPs,以免疫荧光染色法、Western blot和qRT-PCR分别检测hSCAPs中leptin及其受体OBRb蛋白及基因的表达.实验组用质量分数为0.1μg/mL的leptin(0.1μg/mL组)和1.5μg/mL的leptin(1.5μg/mL组)分别刺激hSCAPs,对照组仅加入α-MEM培养基,CCK-8、流式细胞仪法、qRT-PCR分别检测各组hSCAPs增殖情况及成骨/成牙本质相关基因:碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达.结果 hSCAPs表达leptin及其受体OBRb的蛋白及基因.与对照组相比,实验组细胞增殖能力及S期细胞比例均高于对照组(P<0.05),且其中1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组(P<0.05).3 d和7 d时,0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量高于对照组,且1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P<0.05),14 d时0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量明显低于对照组(P<0.05);0.1μg/mL组、1.5μg/mL组OCN mRNA的表达量于7 d、14 d时高于对照组,且1.5μg/mL组均高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P<0.05),于14 d达到峰值.结论 Leptin可促进hSCAPs增殖,并上调hSCAPs成骨/成牙本质相关基因的表达.
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中年男性多发性髓石一例
髓石一直以来被认为是牙髓病理性钙化的产物,多由炎症或牙髓老龄化状态等因素引起,多数无症状,偶有急性牙髓炎表现、三叉神经样疼痛或偏头痛等有症状髓石报道,而健康牙无症状髓石较少.本文将报道健康成年人无症状多发性髓石一例,并就相关文献对其病因及机制进行分析.
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小整联蛋白结合配体N-连结糖蛋白家族成员在牙发育中的作用
小整联蛋白结合配体N-连结糖蛋白家族是一组主要在牙和骨组织中表达的蛋白质，其基因具有通用的外显子内含子结构，影响细胞的增殖和分化。目前已知其包括骨桥蛋白、骨涎蛋白、牙本质基质蛋白-1、牙本质涎磷蛋白、细胞外基质磷酸糖蛋白和釉蛋白等6个成员，本文就其在牙发育过程中的作用作一综述。
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牙本质发生不全Ⅱ型的研究现状
牙本质发生不全Ⅱ型(DGI-Ⅱ)又名遗传性乳光牙本质,为常染色体显性疾病,表现为牙结构的异常.其发病与牙本质涎磷蛋白的突变有关.下面就DGI-Ⅱ的基因研究、遗传方式、病理改变、临床治疗作一综述.
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小分子整联蛋白结合配体N-连接糖蛋白家族成员在牙髓干细胞分化过程中的作用
体外诱导牙髓干细胞向成牙本质细胞分化并观察其过程,是目前研究牙髓干细胞分化机制和寻找其分化标志的主要方法.在成牙本质细胞分化和矿化过程中,小分子整联蛋白结合配体N-糖蛋白(SBLING)家族成员发挥着重要作用.下面就SBLING家族成员牙本质涎磷蛋白、牙本质基质蛋白-1和细胞外基质磷酸糖蛋白在牙髓干细胞分化过程中的作用作一综述.
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小整合素结合配体N端联结糖蛋白家族的研究进展
小整合素结合配体N端联结糖蛋白家族是一组主要在牙及骨组织中表达的蛋白质,具有通用的外显子内含子结构,影响细胞的增殖和分化.目前包括骨桥蛋白、骨涎蛋白、牙本质基质蛋白1、牙本质涎磷蛋白、基质细胞外磷酸糖蛋白和釉蛋白等6个成员.本文就该家族的成员组成、生物学特性和生物学功能等方面作一综述.
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牙髓干细胞分化为成牙本质细胞相关标记物的研究进展
体外诱导牙髓干细胞分化为成牙本质细胞,检测牙本质涎磷蛋白、碱性磷酸酶活性等相关标记物的变化,从而鉴定其分化能力,是近年来在牙髓干细胞领域中研究的热点.本文就上述标记物的研究进展进行综述.
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牙本质涎磷蛋白反义核酸对牙胚超微结构的影响
目的探讨牙本质涎磷蛋白(DSPP)在牙胚发育和矿化中的作用及其机制.方法胎龄为17 d Balb/C胎鼠上颌第一磨牙,分为2组,对照组牙胚置于无血清BGJb半固定培养基中培养;DSPP反义核酸组牙胚置于含有30 μmol/L,长15 bp的DSPP反义寡核苷酸的半固体培养基中培养.牙胚体外培养10 d后,进行透射电镜观察.结果 2组牙胚牙尖处成牙本质细胞中均含有大量的细胞器,线粒体肿胀,粗面内质网扩张,且DSPP反义核酸组成牙本质细胞中粗面内质网扩张更为明显;胞外基质超微结构显示:对照组胶原纤维聚集成束,排列具有一定的方向,牙尖基质带平均厚度为3 μm ;DSPP反义核酸组胶原纤维粗细不等,排列紊乱,牙尖基质带平均厚度为2.5 μm.结论 DSPP可能通过控制成牙本质细胞正常的分泌功能、胶原纤维的正常形态和排列在牙胚生长、矿化中起重要作用.
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正畸牙根吸收与龈沟液中牙本质涎磷蛋白和牙本质涎蛋白相关性的实验研究
目的 探讨大鼠龈沟液中牙本质涎磷蛋白(DSPP)和牙本质涎蛋白(DSP)的表达与实验性牙移动所致牙根吸收的关系.方法 36只健康Wistardd大鼠随机分成3组:对照组、轻力组、重力组.以上颌切牙为支抗,轻力组和重力组分别以0.392、0.98 N力拉右侧上颌第一磨牙向近中移动.加力7 d后,提取龈沟液,制备实验牙及其牙周组织切片,行苏木精-伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察牙根吸收情况,并通过Western blot检测龈沟液中DSPP、DSP的表达.结果 组织学观察:对照组未见明显的牙根吸收,轻力组未见明显的牙根吸收及破牙骨质细胞,重力组在根尖1/3远中区及根分叉附近出现明显牙根吸收.Western blot结果 显示:对照组中只有DSPP表达,轻力组和重力组中有DSPP和DSP表达.3组大鼠龈沟液中DSPP、DSP蛋白的表达均有统计学差异(P<0.05),重力组中2种蛋白表达高,轻力组次之,对照组低.结论 在正畸所导致的牙根吸收过程中,龈沟液中有DSPP和DSP的表达.
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转录因子c-Jun和c-Fos在牙本质涎磷蛋白基因表达中的作用
目的研究成牙本质细胞内转录因子c-Jun和c-Fos在牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因转录调控中的作用,探索成牙本质细胞内DSPP基因表达的调控机制.方法细胞免疫组化观察MDPC-23细胞内c-Jun和c-Fos蛋白分子的表达.瞬时转染和报告基因检测c-Jun和c-Fos在DSPP基因转录中的作用.结果MDPC-23细胞表达c-Jun和c-Fos蛋白,c-Jun和c-Fos主要分布在MDPC-23细胞胞核.c-Jun或c-Fos过表达均显著抑制DSPP基因启动子活性.结论证实成牙本质细胞内转录因子c-Jun和c-Fos参与下调DSPP基因表达.
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小鼠牙本质涎磷蛋白基因上游启动子的克隆和序列测定
目的克隆并测定小鼠牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因上游启动子的序列.方法提取成年Balb/e鼠基因组DNA,设计引物,通过聚合酶链反应(PCR)得到小鼠牙本质涎磷蛋白基因上游启动子的序列.再将目的片段定向连入T载体,酶切鉴定并测序.结果将小鼠牙本质涎磷蛋白基因上游启动子序列分3段克隆,分别得到997 bp、1004bp及674bp大小的目的片段.连人载体后,酶切结果测定重组质粒成功.其测序结果与小鼠基因组染色体位置5q21处的相应序列99%一致.结论成功克隆到牙本质涎磷蛋白基因上游启动子的序列,为进一步研究DSPP基因的转录调控机制奠定了基础.
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过表达牙本质涎磷蛋白的骨髓间充质干细胞部分牙向和骨向分化基因的表达
目的 观察小鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSC)过表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)后的形态学改变,并研究其部分牙向及骨向分化基因的表达情况.方法 体外培养小鼠BM-MSC,通过腺病毒介导的方式将DSPP基因转染小鼠 BM-MSC,通过标记基因GFP检测转染效率,观察转染后细胞的形态学改变,RT-PCR 方法检测过表达 DSPP 的 BM-MSC 有无成牙和成骨基因的mRNA表达.结果 成功获得小鼠BM-MSC,经腺病毒介导的DSPP 基因转染 BM-MSC 的转染效率可达42.7%,转染后的细胞出现分化,似成牙本质样细胞.转染后细胞表达DSPP、DMP1、Msx1/2、Pax9、Lhx6/7、Sox9、Cbfα1、Osx、ColⅠ等多种牙向和骨向发育分化基因.结论 过表达DSPP 的 BM-MSC 出现细胞分化,并可表达多种牙向及骨向发育分化的基因.
