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TRAIL及其受体在PCOS病人卵巢颗粒细胞表达
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体死亡受体4(DR4)和诱骗受体1(DcR1)在多囊卵巢综合征(PCOS)病人卵巢颗粒细胞的表达及其与PCOS发病的关系.方法 收集PCOS病人30例及卵巢正常者(对照组)30例的卵巢颗粒细胞,RT-PCR方法分析两组TRA IL及其受体DR4、DcR1 mRNA表达情况,Western blot法检测两组TRAIL及其受体DR4、DcR1蛋白表达情况.结果 PCOS组TRA IL mRNA及蛋白表达较对照组明显增加(t=2.641、2.891,P<0.01),DcR1 mRNA和蛋白表达较对照组明显降低(t=2.039、3.079,P<0.01),两组DR4 mRNA和蛋白表达比较差异无显著性(P>0.05).结论 PCOS病人卵巢颗粒细胞TRAIL及其受体异常表达,可能通过参与卵巢颗粒细胞凋亡调控导致PCOS发病.
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自噬在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导甲状腺髓样癌TT细胞凋亡中的作用
目的 观察在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)作用下甲状腺髓样癌TT细胞自噬发生情况,明确自噬在TRAIL诱导甲状腺癌TT细胞凋亡中的作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖抑制率;MDC染色检测自噬的发生情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测相关蛋白的表达.结果 ①MTT实验显示:TRAIL对TT细胞增殖抑制作用弱,在浓度为250、500、1000、2000 ng/ml的TRAIL作用48 h后对TT细胞增殖抑制率分别为(3.02±1.82)％、(4.87±1.45)％、(7.51±1.57)％及(12.76±3.23)％;②TRAIL作用48 h后,胞内代表自噬小体的绿色荧光亮点明显增多,且随TRAIL浓度的增加而增加;③3-MA预处理TT细胞4h,TRAIL 500 ng/ml及1000 ng/ml的凋亡率分别为(17.83 ±1.54)％及(27.81±1.79)％,明显高于单用TRAIL(3.70±0.34、6.55 ±0.59)％与3-MA (7.71±0.64)％之和,差异有统计学意义(t=3.282,P＜0.05;t=7.830,P＜0.01).④各实验组可见明显的caspase-8的活化裂解片段,自噬相关蛋白Beclin 1的表达明显减低.结论 甲状腺髓样癌TT细胞对TRAIL不敏感,TRAIL能诱导TT细胞内自噬发生,抑制自噬可明显改善TT细胞对TRAIL的敏感性.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 甲状腺髓样癌 自噬 凋亡 Beclin 1 -
重组腺相关病毒介导TRAIL对卵巢癌裸鼠肝转移的抑制作用的实验研究
目的 探讨重组腺相关病毒介导TRAIL对卵巢癌裸鼠肝转移的抑制作用.方法 构建卵巢癌裸鼠肝转移模型.选择重组腺相关病毒rAAV-PEG-sTRAIL治疗,将裸鼠分为TRAIL治疗组和对照组,治疗6w后,观察肝转移率和肝转移结节数;Tunnel法分析TRAIL对肿瘤细胞的凋亡诱导情况.结果 全身系统性给予重组腺相关病毒介导TRAIL后,治疗组和对照组相比转移率低,肝转移结节数目少,差异有统计学意义(p<0.05);Tunnel法分析TRAIL可诱导肿瘤细胞凋亡.结论 重组腺相关病毒介导TRAIL可抑制卵巢癌裸鼠肝的转移生长,TRAIL用于卵巢癌肝转移的基因治疗中具有较好的应用前景.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 卵巢癌 基因治疗 -
塞来昔布增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对甲状腺髓样癌TT细胞凋亡作用的研究
目的 探讨塞来昔布(celecoxib)增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)诱导甲状腺髓样癌TT细胞凋亡的效应及相关机制.方法 MTT法检测TRAIL、celecoxib及2者联合应用对TT细胞的增殖作用;PI单染流式细胞仪检测联合用药对TT细胞周期的影响;Hochest33258染色和DNA ladder检测联合用药对TT细胞凋亡的作用;Western blot检测cyclin A、Cdk2、caspase-8、c-FLIP、RIP蛋白表达改变.结果 ①MTT实验显示:TRAIL1000 ng/ml与celecoxib 50 μM联合用药的增殖抑制率为(47.53％±1.34％),明显高于单用TRAIL(7.75％±3.84％)及celecoxib (24.49％±1.57％)之和组(t检验,F=5.234,P＜0.01),差异有统计学意义;②PI检测显示:celecoxib组和联合用药组G0/G1期细胞明显高于Control组和TRAIL组(F=242.694,P＜0.01);③Westem blot检测:celecoxib组及联合用药组Cyclin A和Cdk2蛋白表达明显下调,且2者之间未见明显差异;④Hochest33258染色观察细胞核的凋亡形态学改变发现:联合用药组核固缩及核碎裂现象明显增多,其细胞凋亡率为(24.23％±2.91％),明显高于单用TRAIL(5.86％±1.41％)及celecoxib 11 (20％±1.24％)之和(t检验,F=1.824,P＜0.01),差异具有统计学意义;⑤Western blot检测发现:联合用药组caspase-8活化裂解程度明显增加,c-FHP及RIP蛋白表达亦明显下调.结论 celecoxib能增强TRAIL对甲状腺髓样癌TT细胞增殖的抑制作用,其机制是通过celecoxib将TT细胞阻滞于G0/G1期,并下调c-FHP及RIP的表达,促进TRAIL对caspase-8的活化,诱导细胞凋亡.
关键词： Celecoxib 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 周期阻滞 凋亡 TT细胞 -
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对白血病NB4和K562细胞的作用及与其受体表达的关系
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)对白血病NB4和K562细胞的作用及与其受体表达的关系.方法 以Jurkat细胞株为阳性对照,采用不同浓度的TRAIL分别作用于NB4和K562细胞,观察细胞形态；采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况；用流式细胞术检测细胞表面TRAIL受体的表达情况.结果 TRAIL作用导致NB4细胞株生存率显著下降,但弱于Jurkat细胞株,其变化具有TRAIL作用时间和浓度依赖性；对K562细胞株生存率的影响不明显.NB4细胞表面死亡受体4( DR4)和DR5表达水平较高,同时诱骗受体1(DcR1)表达较高；K562细胞DR5表达水平较高,而DR4及DcR1微量表达；Jurkat细胞表面仅DR5低水平表达；DcR2在三株细胞表面均无表达.结论 NB4细胞对TRAIL中度敏感,K562细胞对TRAIL耐受；NB4细胞敏感性较低可能与DcR1表达有关,K562细胞耐受性与其表面TRAIL受体表达无关.
关键词： NB4细胞 K562细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 欺骗受体 -
死亡受体Fas在TRAIL联合三氧化二砷诱导人胃癌细胞凋亡中的作用
目的:探讨Fas在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)与三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)联合诱导人胃癌细胞凋亡过程中的作用.方法:采用体外培养人低分化胃腺癌细胞SGC-7901,分别以Fas正义、反义寡核苷酸转染SGC-7901细胞获得Sense、Antisense细胞.以0.5μg/ml As2O3+0.2μg/ml TRAIL分别处理未转染细胞、Sense组细胞以及Antisense组细胞,采用MTT法检测24、48、72 h后细胞增殖情况；倒置显微镜观察联合作用48 h后细胞集落形态；DAPI染色法、流式细胞仪技术检测48 h时细胞凋亡率；Western blot法检测48 h细胞中Fas、FADD以及Parp表达情况.结果:与未转染组和Sense组细胞比较,转染Fas反义寡核苷酸后,降低了TRAIL与As2O3联合抑制细胞增殖、促进凋亡的作用(P＜0.05),48 h时效果为明显；荧光显微镜下可见死亡细胞明显减少；Western blot结果显示细胞中Fas、FADD表达降低,Parp活化程度降低(均P＜0.05).结论:Fas在TRAIL与As2O3联合抑制人胃癌细胞增殖、促进细胞凋亡过程中起重要作用.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 三氧化二砷 凋亡 胃癌细胞SGC-7901 Fas -
低剂量8-氯腺苷联合TRAIL对前列腺癌细胞杀伤力的研究
目的:观察低剂量顺铂对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的增敏作用.方法:人前列腺癌细胞株PC-3M经过TRAIL(100ng/ml)、低剂量8-氯腺苷(0-200μmol/L)以及联合用药处理96h,用流式细胞分析仪和蛋白质免疫印迹分析测定细胞生存率、细胞周期以及相关细胞凋亡蛋白的动态变化.结果:人前列腺癌细胞株PC-3M单独经过TRAIL或低剂量8-氯腺苷处理后并不能降低其存活率,但联合用药后细胞生存率大大降低.结论:低剂量8-氯腺苷可以增强TRAIL对前列腺癌细胞的杀伤效应,效果优于两种药物的单独使用.8-氯腺苷主要是诱导人前列腺癌细胞株PC-3M发生G2/M期阻滞和细胞凋亡,P53和P21蛋白参与了这一分子生物学事件.
关键词： 8-氯腺苷 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 凋亡 前列腺癌
