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TRAIL在重型肝炎患者PBMC和血清中的表达及血浆置换治疗前后的变化
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在重型肝炎发病机制中的作用以及血浆置换治疗前后变化的意义.方法:采用实时荧光定量PCR反应检测30例重型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)TRAILmRNA的水平,采用ELISA法检测其血清可溶性TRAIL(sTRAIL)的水平,并与肝功能相关指标进行相关性分析.观察血浆置换(PE)治疗前后TRAIL的变化,比较治疗有效组和治疗无效组之间TRAIL水平差异.结果:重型肝炎患者PBMC TRAIL mRNA的水平及血清sTRAIL的水平均明显高于健康对照组(0.0622±0.0227 vs 0.0059±0.0023,P＜0.05;9.1058±3.2260 vs 2.4552±1.7485,P＜0.0l).mTRAIL和sTRAIL与肝功能相关指标总胆红素(TB)、白蛋白(ALB)以及凝血酶原时间(PT)均无直线相关性,膜型TRAIL(mTRAIL)和sTRAIL之间也无直线相关性.PE治疗后,肝功能相关指标改善;PBMC TRAIL mRNA水平下降,治疗前后有显著性差异(0.0622±0.0227vs 0.0214±0.0140,P＜0.001);而血清sTRAIL水平在PE治疗前后无明显变化.治疗有效组PBMC TRAIL mRNA水平、血清sTRAIL水平均低于治疗无效组,差异显著(0.0154±0.0076vs 0.0320±0.0178,P＜0.01;8.0476±3.5599 vs11.0479±2.6694,P＜0.05).结论:TRAIL介导的细胞凋亡在重型肝炎病理损害过程中起着重要的作用,TRAIL的水平在一定程度上能反映患者的肝脏损伤程度.从近期观察,PE治疗能降低患者PBMC TRAILmRNA水平,但不能降低血清sTRAIL水平.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 外周血单个核细胞 重型肝炎 血浆置换 -
携带TRAIL基因的新型溶瘤病毒体外诱导肝癌细胞凋亡
目的: 评价携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL在人肝癌细胞株中介导TRAIL基因表达及对肝癌细胞的凋亡诱导作用.方法: CNHK500-hTRAIL感染人肝癌细胞株HepG2、Hep3B以及人正常肝细胞株WRL-68,通过增殖实验观察病毒的选择性增殖能力, 并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL蛋白的表达量, 四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肝癌细胞的功效, 流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响.结果: CNHK500-h TRAI L能选择性地在HepG2、Hep3B细胞内高效增殖; 感染72 h后HepG2、Hep3B细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为167.4、173.22 ng/L; 在MOI = 0.1时, CNHK500-hTRAIL即可明显杀伤HepG2、Hep3B细胞, 并选择性地诱导细胞早期凋亡,均显著高于空病毒CNHK500及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL; 而对人正常肝细胞株WRL-68则无明显杀伤作用.结论: 携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒载体对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达, 明显优于单纯的病毒载体及传统的非增殖型腺病毒载体, 应用前景广阔.
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与肝细胞凋亡的相关性
肿瘤坏死因子相关的调亡诱导配体是TNF家族成员之一,通过其死亡受体诱导凋亡.研究显示TRAIL/死亡受体途径参与多种肝脏病理过程,本文就TRAIL/死亡受体途径的特性、致凋亡的机制及与肝细胞凋亡关系的新进展作一综述.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 凋亡 肝细胞 -
骨保护素和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与动脉粥样硬化的相关性
在动脉粥样性心血管疾病的发生发展过程中,骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)受到了越来越多的关注.OPG具有阻断RANKL和抑制骨重吸收的能力,因此而得名,同时还能够抑制TRAIL末梢作用,并且可以直接(配体独立)影响骨、脉管系统和免疫系统.本文就其与动脉粥样硬化的相关性研究进展作一综述.
关键词： 骨保护素 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 动脉粥样硬化 -
巨噬细胞对小鼠活化肝星状细胞凋亡的影响及机制
目的 探讨不同极化方向巨噬细胞对小鼠活化的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)凋亡的影响及机制.方法 体内构建CCl4诱导的肝纤维化小鼠模型和橄榄油对照组小鼠模型,采用流式细胞术检测不同极化方向巨噬细胞在两组小鼠肝脏中的比例.体外诱导骨髓来源的巨噬细胞极化(M0、M1、M2巨噬细胞),分别收集上清与活化的LX-2细胞共培养.采用CCK-8法、Caspase-3/7活性检测、流式细胞术和Western Blot检测LX-2细胞的凋亡.结果 CCl4组小鼠肝脏巨噬细胞比例显著高于对照组(t=10.86,P<0.0001),其中M1、M2巨噬细胞的比例均显著高于对照组(t值分别为4.62、5.28,P值分别为0.0036、0.0007).与M0和M2巨噬细胞共培养组相比,M1巨噬细胞上清可显著抑制LX-2细胞的增殖、诱导LX-2细胞的凋亡、增加Caspase-3/7酶活性并上调凋亡蛋白Bax的表达(P均<0.05).此外,M1巨噬细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的表达水平显著高于M0和M2巨噬细胞(t值分别为17.15、17.20,P均<0.0001).TRAIL重组蛋白可显著抑制活化的LX-2细胞增殖、促进其凋亡、增强Caspase-3/7酶活性并诱导Bax表达上调.结论 M1巨噬细胞通过表达TRAIL促进小鼠活化的HSC凋亡.
关键词： 肝纤维化 巨噬细胞极化 肝星状细胞 凋亡 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 -
血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、单核细胞趋化蛋白1、肿瘤坏死因子α、白介素1β水平的变化及其与2型糖尿病的相关性研究
目的 探讨可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)与T2DM的相关性.方法 收集T2DM患者84例(T2DM组)和正常对照人群42名(NC组),ELISA测定各类细胞因子的浓度.结果 校正性别、年龄后,T2DM组血清IL-1β、MCP-1和TNF-α水平均高于NC组(P＜0.01);NC组sTRAIL水平高于T2DM组(P＜0.01).Logistic多元回归分析显示,高年龄、低HDL-C、高IL-1β和MCP-1可能是糖尿病的危险因素.结论 血清IL-1β和MCP-1与T2DM有一定相关性,可能参与了T2DM的发生发展,发病机制有待进一步研究.
关键词： 糖尿病 2型 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 白细胞介素1β 单核细胞趋化蛋白1 -
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体在特发性炎性肌病患者骨骼肌的表达
目的 通过检测TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体DR4、DR5、DCRI、DCR2在特发性炎性肌病(IIM)患者骨骼肌组织中的表达,探讨TRAIL系统在IIM发病机制的作用和意义.方法 选IIM患者肌活榆标本36份,其中多发性肌炎(PM)13份,皮肌炎(DM)23份,另选9份骨科外伤手术患者骨骼肌组织标本作对照.用免疫组化法检测TRAIL及其受体在对照组和IIM患者骨骼肌组织中的表达水平.结果 (I)对照组和IIM患者骨骼肌细胞上均有TRAIL及其受体DR4、DR5、DCR1、DCR2表达,IIM患者骨骼肌细胞上TRAIL、DR4、DCR2表达明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P值均小于0.05).(2)IIM患者肌内膜和间质血管周围浸润的淋巴细胞以表达TRAIL和DCR1为主,少量表达DR4,未见DR5、DCR2表达.(3)有吞咽困难的患者病变肌组织TRAIL、DR4、DCR2表达水平明显升高.ESR升高的患者DCR2表达水平较高.结论 IIM患者受累肌组织中TRAIL及其受体的表达明显增加,提示TRAIL系统可能在IIM肌细胞损伤过程中发挥重要作用.
关键词： 肌炎 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 -
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与胰腺癌及相关药物研究
自肿瘤坏死因子家族的新成员肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体被发现以来,它一直是近些年来在肿瘤研究方面的热点.本文综述了近些年肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在胰腺癌方面的相关研究进展,从肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导胰腺癌肿瘤细胞凋亡机制人手,简要介绍胰腺癌对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的耐药机制.并根据目前已认同的耐药机制为线索,通过采用相关蛋白抑制、信号通路调控等提高肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体敏感性,来获取一些新疗法的成果作一综述,再简要介绍一些其他已知抗肿瘤疗法与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的联合应用,共同来描述肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体协同相关药物在胰腺癌研究方面的进展,并简要评论,以此为肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在胰腺癌及相关药物研究方面提供部分参考.
关键词： 胰腺癌 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 -
TRAIL和NKG2D通路在双阴性T细胞抗肿瘤中的作用
双阴性T细胞是一种罕见的细胞类型,调节免疫应答的方式十分独特.由于其具有明显的抗肿瘤作用,在过继免疫疗法的研究进程中逐渐成为热点.但是双阴性T细胞杀伤肿瘤细胞的具体机制尚未明确,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)通路和自然杀伤细胞表面活性受体(NKG2D)通路是其杀伤机制中较为重要的两个部分,并且NKG2D还可以调节分泌型TRAIL的产生,使得两种通路建立了一定的联系.本文主要对双阴性T细胞的抗肿瘤作用以及TRAIL和NKG2D通路在其中的作用机制进行总结描述.
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移植物浸润T淋巴细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及受体DR4和DR5表达与大鼠小肠移植急性排斥反应的相关性
目的 探讨浸润T淋巴细胞七的DR4、DR5表达同小肠移植急性排斥反应的关系.方法 将2种近交系大鼠(SD、Wistar)54只按随机配对法分为A、B、C3组.A组大鼠为对照组(18只)行虚拟手术;B组(18只)大鼠行同系小肠移植;C组(18只)大鼠行不同品系小肠移植.各组大鼠于术后5 d取移植肠样本分别做HE染色和免疫荧光双标记染色.采用免疫荧光染色、激光共聚焦技术测定各组标本浸润T淋巴细胞肿瘤坏死因相关凋亡诱导配体及DR4、DR5的表达情况.结果 A组大鼠小肠黏膜正常,B组大鼠小肠表现为免疫耐受,C组大鼠表现为急性排斥反应.C组大鼠高T淋巴细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与A、B组大鼠比较差异有统计学意义(P < 0.01);A、B组大鼠浸润T淋巴细胞DR4、DR5均呈高表达,C组大鼠呈低表达,C组大鼠与A、B组比较差异有统计学意义(P < 0.01);A、B组大鼠比较差异无统计学意义(P > 0.05).结论 急性排斥反应的发生可能与浸润T淋巴细胞DR的低表达有关.减少浸润淋巴细胞DR表达的下调,或者上调DR将有助于控制急性排斥反应,诱导免疫耐受.
关键词： T淋巴细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 小肠移植 急性排斥反应 -
前列腺癌PC-3细胞抗TRAIL诱导凋亡的实验研究
目的 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)能够诱导人前列腺癌细胞株PC-3细胞凋亡而不损伤正常细胞.部分PC-3细胞能够对TRAIL产生抵抗作用,本研究对其发生发展的分子机制进行进一步探讨和阐述.方法 将体外培养的PC-3细胞分为对照组(仅加培养基)和实验组(不同浓度滴度的TRAIL处理),作用时间24～72小时.MTT法检测细胞抑制率,筛选出抵抗TRAIL治疗的PC-3细胞,Q-PCR检测Fas相关死亡域样白介素1B转换酶抑制蛋白(FLICE inhibitory protein,FLIP)、死亡受体4(death receptor,DR4)、DR5、Fas相关死亡域(Fas-associateddeathdomain,FADD)和caspase-8基因表达情况.结果 TRAIL对PC-3细胞具有一定增殖抑制作用,细胞平均存活率随着TRAIL作用时间延长而减少;同时与TRAIL浓度有关,在200 ng/ml的TRAIL时,对PC-3细胞的增殖抑制作用较强.Q-PCR检测结果显示TRAIL作用24小时的PC-3细胞较对照组的FLIP、DR4、DR5、FADD和caspase-8基因的表达降低;随着TRAIL作用时间延长至72小时,DR4、DR5、FADD和caspase-8基因的表达下降,而FLIP表达上升.结论 体外实验TRAIL对于PC-3治疗具有一定效果,和TRAIL浓度作用时间有关,在TRAIL作用一定时间内,随着作用时间延长,细胞增殖抑制作用越强.TRAIL对PC-3抑制作用与药物浓度有一定关系,在200 ng/ml时对PC-3细胞抑制生长率强.PC3-TR的DR4、DR5、FADD和caspase-8及FLIP在TRAIL短时间治疗内表达下降,而在长时间治疗时DR4、DR5、FADD和caspase-8表达下降,FLIP表达上升.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 前列腺癌 死亡受体 Caspase-8 -
二甲双胍增强膀胱癌5637细胞对TRAIL的敏感性及其机制研究
目的：探讨二甲双胍能否增强膀胱癌5637细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导细胞凋亡的敏感性及其机制。方法 MTT法检测不同浓度TRAIL（0、10、20、40、60、100 ng/mL）和二甲双胍（10 mM）联合用药对膀胱癌5637细胞的增殖抑制作用。Annexin V-FITC/PI双染检测二甲双胍对TRAIL诱导5637细胞凋亡的影响。Western blot检测二甲双胍和/或TRAIL干预5637细胞24小时后对caspase-8、caspase-3、PARP、DR4、DR5和c-FLIPL表达的影响。结果二甲双胍可增强TRAIL对膀胱癌5637细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导作用，二甲双胍单独用药并未上调DR4和DR5表达，但显著下调c-FLIPL表达。结论二甲双胍显著增强膀胱癌5637细胞对TRAIL的敏感性，其机制可能与二甲双胍下调c-FLIPL表达有关。
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PKC-δ在TRAIL与阿霉素联合诱导骨肉瘤细胞株MG-63凋亡中的作用
目的 初步观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与低剂量阿霉素(ADM)联合应用对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞凋亡的影响,探讨蛋白激酶C-δ (PKC-δ)在其中的作用,并用PKC激活剂佛波脂(PMA)和PKC-δ特异性抑制剂Rottlerin对这一凋亡过程的影响来探讨PKC-δ在其中的作用.方法 倒置相差显微镜观察TRAIL与ADM联合应用后MG-63细胞凋亡形态的变化,同时逆转录-聚合酶链反应法检测PKC-δ的mRNA表达变化.流式细胞仪(FCM)检测PMA和Rottlerin作用联合组细胞后凋亡率的变化.结果 5μg/ml的ADM与500ng/ml的TRAIL联合作用24h后,部分MG-63细胞变圆、悬浮,可见大小不等的细胞碎片.TRAIL和ADM联合应用组PKC-δ的mRNA的表达明显增加,与单用组和对照组有显著性差异(P＜0.01).Rottlerin与联合用药作用12h后细胞的凋亡率降低,PMA则能使凋亡率增加(P＜0.01).结论 TRAIL与低剂量ADM联合作用可以促进MG-63细胞凋亡.Rottlerin能抑制TRAIL和ADM联合诱导MG-63细胞凋亡,PMA则起促进作用,PKC-δ可能参与了该凋亡过程并起促进作用.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 阿霉素 蛋白激酶C-δ 骨肉瘤 凋亡 -
葡萄糖、雌二醇对MG63细胞株TRAIL,OPG,OPGL mRNA表达的影响
目的 观察在不同浓度葡萄糖、雌二醇环境下人成骨肉瘤MG63细胞株肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)的表达,探讨绝经后糖尿病女性骨质疏松症的发病机制.方法 用不同浓度葡萄糖(5.5、16.7、33.3 mmol/L)和17β-E2分别刺激培养的MG63细胞24 h,RT-PCR法检测TRAIL、OPG、OPGL mRNA的表达.结果 葡萄糖对MG63细胞中TRAIL、OPGLmRNA的表达,均按照对照组、5.5 mmol/L组、16.7 mmol/L组、33.3 mmol/L组顺序递增(P＜0.05),OPGmRNA的表达按照此顺序递减(P＜0.05).33.3 mmol/L组TRAIL mRNA的水平明显高于对照组[(1.004±0.070)vs(0.740±0.023),P＜0.05],而17β-E2可增加OPG mRNA的表达,减少TRAIL、OPGLmRNA的表达.结论 高糖环境可能导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG的表达减少,从而导致骨质疏松.而雌二醇对葡萄糖环境下的MG63细胞中上述因子的表达可产生一定的对抗效应.这可能是绝经后糖尿病女性骨质疏松症患者雌激素替代治疗的依据之一.
关键词： 高糖 雌二醇 MG63细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 -
T3对MG63细胞株TRAIL,OPG,OPGL表达的影响
目的 观察在不同浓度T 3环境下人成骨肉瘤MG 63细胞株肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)的表达,探讨甲亢性骨质疏松症的发病机制.方法 用不同浓度T 3(对照组,10-12、10-10、10-8 mol/L组)分别刺激培养的MG 63细胞24 h,RT-PCR法检测TRAIL,OPG,OPGL mRNA的表达.结果 T 3对MG 63细胞中TRAIL,OPGL mRNA的表达,均按照对照组、10-12 mol/L组、10-10 mol/L组、10-8 mol/L组顺序递增(P＜0.05),OPG mRNA的表达按照此顺序递减(P＜0.05),10-8 mol/L组TRAIL mRNA的水平明显高于对照组(P＜0.05).同时,OPG/OPGL比率按照对照组、10-12 mol/L组、10-10 mol/L组、10-8 mol/L组顺序递减.结论 T 3可能导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG的表达减少.这可能是甲亢性骨质疏松症的重要发病机制之一.
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T3对MG63细胞株增殖及TRAIL,OPG,OPGL表达的影响
目的 观察在不同浓度三碘甲状腺原氨酸环境下人成骨肉瘤MG63细胞株增殖和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)的表达,探讨甲亢性骨质疏松症的发病机制.方法 用不同浓度T3(0、1.0×10-12、1.0×10-10、1.0×10-8 mol/L)分别刺激培养的MG63细胞24 h,MTT比色分析法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,逆转录PCR(RT-PCR)法检测基因表达情况,免疫细胞化学法检测MG63细胞中TRAIL的表达及分布.结果 T3以浓度依赖方式抑制MG63细胞的增殖,并将细胞阻滞于G1期.T3能下调MG63细胞中OPG的表达,上调OPGL和TRAIL的表达.TRAIL免疫反应阳性物质密度高浓度T3组明显高于对照组.结论 T3可抑制成骨细胞的增殖,导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG的表达减少.这可能是甲亢性骨质疏松症的重要发病机制之一.
关键词： 三碘甲状腺原氨酸 MG63细胞 护骨素 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 -
人重组TNF相关凋亡诱导配体联合塞来昔布诱导胆囊癌细胞凋亡的作用研究
目的于体外实验观察人重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhTRAIL)联合环氧化酶-2选择性抑制剂塞来昔布对胆囊癌的疗效,初步探讨产生疗效的机制.方法用western-blot法检测塞来昔布作用于胆囊癌细胞株后,抗凋亡蛋白c-FLIP和死亡受体DR4、DR5表达状况.rhTRAIL联合塞来昔布作用于胆囊癌细胞株SGC-996后,采用3种方法检测细胞凋亡状况:(1)细胞的相差显微镜观察;(2)caspase 3、7活性检测;(3)Annexin染色后凋亡细胞流式细胞仪检测.结果塞来昔布可下调SGC-996细胞c-FLIPs的表达,上调DR5的表达,且呈浓度、时间依赖性.rhTRAIL联合塞来昔布作用于胆囊癌细胞后,细胞凋亡水平明显高于单独用药组和对照组.结论塞来昔布可通过下调c-FLIPs表达和上调DR5表达,显著增强rhTRAIL诱导胆囊癌SGC-996细胞凋亡的作用.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 塞来昔布 胆囊癌 凋亡 -
TRAIL联合环氧合酶抑制剂体外诱导肝癌细胞凋亡的实验研究
目的 探讨塞莱昔布增加TRAIL诱导肝癌细胞HepG2、Hep3B凋亡的分子机制.方法 应用流式细胞仪分析塞莱昔布联合应用TRAIL对肝癌细胞HepG2和Hep3B细胞周期的影响;Western blot检测HepG2和Hep3B细胞在塞莱昔布作用前后凋亡信号传导蛋白caspase-8,caspase-3,caspase-9,DR4,DR5,DcR1,c-FLIP,RIP,Cytc,Smac和Bid的表达变化.结果 联合用药组中HepG2及Hep3B细胞生存率分别为29.37%±2.68%和22.75%±2.77%,显著低于塞莱昔布单独用药组的73.04%±4.03%和66.90%±3.47%(t=9.975,P＜0.01).塞莱昔布预先处理能够下调c-FLIP及RIP的表达及增加Cytc、Smac、Bid的表达,但对DR4、DR5、DcR1的表达无明显影响.结论 TRAIL联合塞莱昔布通过下调c-FLIP及RIP的表达,活化死亡受体通路及上调Bid的表达,激活线粒体通路诱导肝癌细胞凋亡.
关键词： 癌 肝细胞 细胞凋亡 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 -
白细胞介素12通过抑制survivin表达加强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导的肝癌细胞凋亡
目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肝细胞癌(HCC)的治疗作用,以及TRAIL耐药的可能机制和逆转耐药方案. 方法采用原位杂交方法观察HCC与正常肝组织中TRAIL的表达差异.采用不同浓度的sTRAIL(可溶性)处理HCC细胞株及真核表达质粒pIRES-EGFP-sTRAIL转染HCC细胞株,观察sTRAIL的抑癌疗效.建立裸鼠肝癌模型,观察sTRAIL的体内抑癌作用.进一步,检测HCC中survivin的表达并采用反义寡核苷酸封闭治疗.后,观测sTRAIL和IL-12联合抗癌效果. 结果肝癌组织DR表达量显著强于正常肝组织DR表达量.60例肝癌组织中54例不表达诱捕受体DcR1,25例不表达DcR2,而20例正常肝组织均表达DcR.两种HCC细胞株中DcR1表达缺失.经sTRAIL (100 ng/ml)处理24 h,HCC细胞凋亡发生率约10%,而Jurkat细胞凋亡率达70%以上.体外pIRES-EGFP-sTRAIL转染对肝癌细胞杀伤作用不敏感.体内直接瘤体注射pIRES-EGFP-sTRAIL可对裸鼠肝癌无明显抑制作用.HCC高表达survivin,反义寡核苷酸封闭可部分逆转TRAIL耐药.IL-12使survivin表达明显下调,显著加强TRAIL对HCC细胞的杀伤作用. 结论 HCC对TRAIL诱导的凋亡有耐药现象.survivin参与HCC对TRAIL的耐药机制,反义寡核苷酸封闭可部分逆转TRAIL耐药.IL-12可通过抑制survivin表达增强TRAIL对HCC杀癌作用.联合基因治疗(如TRAIL和IL-12基因)可能成为一种有前途HCC治疗方案.
关键词： 癌 肝细胞 白细胞介素12 survivin 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 -
槐耳清膏联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肝癌细胞生长的影响
目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合中药槐耳清膏对肝癌细胞株HepG2及肝癌耐阿霉素(ADM)细胞株(HepG2-ADM)的作用.方法通过培养液中ADM的浓度梯度递增法筛选培养,建立肝癌细胞HepG2-ADM耐药细胞株;TRAIL,TRAIL+ADM,TRAIL+槐耳清膏分别处理肝癌细胞株HepG2、HepG2-ADM及正常肝细胞株L02,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果联合用TRAIL(100 ng/L)和槐耳清膏(1.0 g/L)处理肝癌细胞株HepG2-ADM及肝细胞株L02,MTT显示对前者增殖有明显抑制作用,而对后者无明显作用;流式细胞仪检测TRAIL联合槐耳清膏处理HepG2、HepG2-ADM,可诱导细胞凋亡,与其他组相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论槐耳清膏可显著增强TRAIL对HepG2及HepG2-ADM的杀伤作用,而对正常胎肝细胞株L02杀伤作用轻微,TRAIL和槐耳清膏联合应用可望克服肿瘤细胞中存在的化学治疗药物耐药和TRAIL耐受问题.
关键词： 癌 肝细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 抗药性
