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T3对人外周血淋巴细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体表达及细胞凋亡的影响
目的研究不同浓度T3对体外培养的人外周血淋巴细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的表达及细胞凋亡的影响.方法密度梯度离心法分离外周血淋巴细胞,加入不同浓度T3,作用5 d后,流式细胞仪检测淋巴细胞表面TRAIL的阳性率及细胞凋亡.结果 (1)随T3浓度增加,TRAIL表达量增加,在1.0×10 -12 mol/L与1.0×10 -11 mol/L浓度T3刺激下,TRAIL 阳性率分别为 (16.78±3.84)%、(18.11±3.04)%,两组间差异无统计学意义(P＞0.05),T3在1.0×10 -10、1.0×10 -9、1.0×10 -8 mol/L时,TRAIL阳性率分别为(23.02±2.28)%、(28.01±1.37)%、(32.43±3.96)%,组间差异有统计学意义(P＜0.01).(2)T3浓度从0 mol/L增至1.0×10 -12、1.0×10 -11、1.0×10 -10、1.0×10 -9、1.0×10 -8mol/L,淋巴细胞凋率分别为:(5.13±0.89)%、(12.53±2.00)%、(15.51±2.45)%、(18.66±1.02)%、(22.76±2.43)%、(28.76±3.32)%,不同浓度组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 T3促进淋巴细胞TRAIL的表达及凋亡,提示在Graves病中T3可能通过TRAIL途径诱导淋巴细胞凋亡,推测此机制可能参与了 Graves病的发病.
关键词： 三碘甲状腺原氨酸 格雷夫斯病 淋巴细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞凋亡 -
高碘增加大鼠甲状腺细胞TRAIL表达
建立雌性SD大鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)模型,饲以高碘饮食,正常对照组、正常高碘组、EAT对照组和EAT高碘组FT3、FT4依次增高(P＜0.05或P＜0.01).半定量RT-PCR、Western印迹结果显示肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在各组大鼠甲状腺中均有表达,其表达在正常对照组、正常高碘组、EAT对照组、EAT高碘组依次增高(P＜0.01),高碘可能通过增加TRAIL表达诱导甲状腺细胞过度凋亡,进而影响其功能及病理学改变.
关键词： 碘 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 甲状腺炎 自身免疫性 -
凋亡相关蛋白在胃癌细胞凋亡中的作用研究
目的研究核转录因子(NF)-κB、生存素(survivin)、Bcl-2和Caspase3在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的胃癌细胞凋亡中的作用.方法应用细胞培养和流式细胞仪检测的方法,观察胃癌细胞SGC-790l、MKN28、AGS、MKN45经TRAIL作用后的细胞凋亡率,Western blot方法分析4种胃癌细胞中NF-κB、生存素、Bcl-2和Caspase3的表达.结果TRAIL 50 ng/ml作用于胃癌细胞24 h后,MKN28、MKN45、AGS和SGC-7901细胞的凋亡率分别为24.05%,7.83%,8.05%和3.17%.TRAIL300 ng/ml作用于胃癌细胞24 h后,MKN28、MKN45、AGS和SGC-7901细胞的凋亡率分别为36 05%,20.27%,16.50%和11.80%.Western blot结果显示,SGC-7901细胞NF-κB、生存素的表达高于MKN28细胞(P＜0.05),与Bcl-2的表达无明显差异.MKN28细胞Caspase3的表达高于SGC-7901细胞(P＜0.05).结论TRAIL具有选择性诱导肿瘤细胞凋亡的特性,肿瘤细胞对TRAIL的耐药现象可能与凋亡抑制因子生存素和NF-κB的表达增强以及Caspase3的表达抑制有关.
关键词： 胃癌细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞凋亡 凋亡相关基因 -
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体通过促进死亡相关蛋白3表达抑制人胃癌细胞株的生长
目的:观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人胃癌细胞株的生长抑制作用及其作用前、后人胃癌细胞株中死亡相关蛋白3(DAP3)表达情况,探讨DAP3在TRAIL抑制人胃癌细胞株生长中的作用.方法:选择不同浓度(0、50、100、200ng/ml)TRAIL作用于人胃癌细胞株BGC-823和HGC-27 48 h后,用酸性磷酸酶法测定各组细胞株生长抑制情况,确定TRAIL的有效浓度;取有效浓度的TRAIL处理人胃癌BGC-823和HGC-27细胞株48 h后,分别用Western印迹法和RT-PCR检测TRAIL对DAP3蛋白和DAP3 mRNA表达的影响.结果:①酸性磷酸酶法测得100 ng/ml TRAIL可有效抑制人胃癌细胞株BGC-823和HGC-27生长.②Western印迹法未能在人胃癌细胞株BGC-823和HGC-27中测得DAP3表达,而100 ng/ml) TRAIL处理后48 h,在BGC-823和HGC-27中均可测得DAP3表达;同样,RT-PCR法测得100ng/ml) TRAIL处理48 h后,两株胃癌细胞株中DAP3 mRNA表达显著升高.结论:TRAIL能有效抑制人胃癌细胞株BGC-823和HGC-27的生长,其机制与促进DAP3表达有关.
关键词： 胃肿瘤 死亡相关蛋白3 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 肿瘤细胞 培养的 -
IFN-γ增强TRAIL诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的研究
目的 探讨γ-下扰素(IFN-γ)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)抑制神经母细胞瘤LAN-1细胞株生长作用的影响,为TRAIL的临床应用提供理论依据.方法 以神经母细胞瘤细胞株LAN-1为对象,采用MTT比色法和流式细胞术研究IFN-γ/对TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的影响.结果 IFN-γ组、TRAIL组和IFN-γ 72 h+TRAIL组的存活分数分别为(97.12±3.03)%、(83.35±2.95)%、(60.05±4.05)%.IFN-γ组、TRAIL组、IFN-γ24 h+TRAIL组、IFN-γ 48 h+TRAIL组和IFN-γ 72 h+TRAIL组的凋亡率分别为(2.26±0.35)%、(3.03±0.68)%、(6.87±0.99)%、(9.80±1.85)%、(15.11±2.57)%.IFN-γ 24 h+TRAIL组的凋亡率高于IFN-γ组与TRAIL组(P<0.05).随着IFN-γ预处理时间的延长,TRAIL引起LAN-1的凋亡率也明显上升(P<0.05).结论 IFN-γ能有效加强TRAIL对LAN-1细胞株的凋亡诱导作用.
关键词： 干扰素Ⅱ型 LAN-1细胞株 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 -
藤黄酸联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导 配体诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的 效果和机制
背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)能选择性地杀伤肿瘤细胞,但多种肿瘤对其耐药.该研究旨在探讨藤黄酸(gambognic acid,GA)与TRAIL联合对人结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响及GA联合TRAIL抗结肠癌的作用机制.方法:建立人结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,测定TRAIL和(或)GA对裸鼠移植瘤的影响,采用H-E染色观察肿瘤组织形态结构改变,TUNEL法检测细胞凋亡状况;HT-29细胞经过siRNA干扰Nrf2表达后,通过AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,RT-PCR法检测Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA的表达水平.结果:联合应用GA显著促进了TRAIL对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制(抑瘤率达67.0％)和诱导凋亡作用,下调了组织中Nrf2、Bcl-2的表达,增强了Bax和DR5的表达;与阴性对照siRNA相比,Nrf2干扰能明显上调TRAIL诱导HT-29细胞的凋亡率,提高ROS含量,下调Nrf2和Bcl-2表达,上调Bax和DR5表达.结论:GA可能是通过下调Nrf2表达,使ROS水平升高而激活线粒体凋亡途径与死亡受体途径,从而逆转人结肠癌HT-29细胞体内外对TRAIL的耐药性.
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喷他脒增强K562细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导凋亡敏感性
背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是一种理想的抗肿瘤药物,但许多肿瘤细胞常对TRAIL诱导凋亡耐受.本研究探讨了喷他脒增强白血病K562细胞对TRAIL诱导凋亡敏感性.方法:利用光镜形态学和Annexin V FITC/PI 双标记凋亡细胞的流式细胞仪(FACS)测定两种方法观察喷他脒预处理K562细胞并继用TRAIL后凋亡的发生.应用蛋白印迹方法观察此过程中半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3,-8和聚ADP核糖聚合酶(PARP)等3种蛋白的蛋白剪切与X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)蛋白表达的改变.结果:在10 μg/ml喷他脒作用K562细胞20 h,K562细胞未发生凋亡,继用200 ng/ml TRAIL 作用4 h后,光镜和Annexin V FITC/PI 双标记流式细胞仪方法均观察到细胞发生明显凋亡,并出现了Caspase-3,-8和PARP蛋白剪切,两者单独作用则无明显细胞凋亡发生.另外,喷他脒明显降低了XIAP表达.结论:喷他脒联合TRAIL可能成为肿瘤治疗的一种新策略.
关键词： 喷他眯 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 肿瘤 -
香加皮杠柳苷联用TRAIL对胃癌SGC-7901和MGC-803细胞的作用及其机制
目的:探讨香加皮杠柳苷(cortex periplocae,CPP)联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对胃癌细胞的作用及其机制.方法:人胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803培养完成后,采用50、100、200 ng/ml的CPP和1μg/ml的TRAIL单用或联合处理.MTS法检测SGC-7901和MGC-803细胞的增殖情况,流式细胞术检测其凋亡率,Westcm boltting检测pro-BID、Mcl-l、cleaved caspase-3、DR4、DR5的表达水平.结果:SGC-7901和MGC-803细胞经CPP (50、100、200 ng/ml)和TRAIL(1 μg/ml)联合处理24 h后,细胞增殖率明显低于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(/＜0.05或P＜0.01).SGC-7901和MGC-803细胞凋亡率均明显高于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(P＜0.05或P＜0.01).SGC-7901和MGC-803细胞中pro-BID、Mcl-1表达水平明显降低(均P＜0.05),cleaved caspase-3表达水平明显升高(P＜0.05),DR4和DR5受体的表达水平升高(均P＜0.05).结论:CPP协同TRAIL可明显诱导人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞凋亡,增强人胃癌细胞对TRAIL的敏感性.
关键词： 香加皮杠柳苷 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 胃癌细胞 增殖 凋亡 -
TRAIL通过降低EGFR的表达水平抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的可能机制.方法:Western blotting、Real-time PCR分别检测rsTRAIL处理对MDA-MB-231细胞内EGFR、磷酸化转录因子IκBα (p-IκBαt)和miR-146a表达的影响.向MDA-MB-231细胞转染miR-146a mimics、miR-146ainhibitor,Western blotting检测miR-146a对MDA-MB-231细胞中EGFR表达水平的影响.Transwell实验检测rsTRAIL、miR-146a和EGFR对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响.结果:20 ng/ml rsTRAIL显著抑制MDA-MB-231细胞中EGFR的表达(6 h,t =4.35,P＜0.05;12 h,t=8.609,P＜0.01;24 h,=10.84,P＜0.01),提高p-IκBα(6 h,t=-4.201,P＜0.05;12h,t=-15.805,P＜0.01;24 h,t=-35.921,P＜0.01)和miR-146a的表达水平(6 h,t=-4.67,P＜0.05;12h,t=-11.635,P＜0.01;24 h,=-15.8,P＜0.01),并且呈时间依赖性.在MDA-MB-231细胞中转染miR-146a mimics显著抑制EGFR的表达(=6.25,P＜0.01);反之,转染miR-146a inhibitor则促进细胞内EGFR的表达(t=-3.674,P＜0.05).rsTRAIL处理(t=7.108,P＜0.01)、转染miR-146a mimics或siEGFR(t =6.051,P＜0.01;=5.245,P＜0.01)均导致细胞的侵袭能力显著下降.结论:rsTRAIL通过特异性增加miR-146a的表达水平靶向降低EGFR的表达从而抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭能力.
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AntiMRP3(scFv) -sTRAIL靶向诱导多形性成胶质细胞瘤的凋亡
目的:观察抗人类多药耐药相关蛋白3 (multidrug resistance protein 3,MRP3)的单链抗体与可溶性坏死因子相关凋亡诱导配体( soluble TNF-related apoptosis inducing ligand,sTRAIL)的融合蛋白antiMRP3( scFv) -sTRAIL对多形性成胶质细胞瘤( glioblastoma multiforme,GBM) U251细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法:MTT法检测不同浓度antiMRP3( scFv) -sTRAIL( 3.9063～250 nmol/L)作用后U251细胞的存活率.给予亲代antiMRP3( scFv)或TRAIL活性中和抗体mAb 2E5预孵育,应用IC50剂量的antiM RP3 (scFv) -sTRAIL作用U251细胞,流式细胞仪检测U251细胞的凋亡率,Western blotting检测U251细胞中caspase-3的激活及其关键底物DNA裂解因子(DNA fragmentation factor,DFF)的降解.结果:随着antiMRP3( scFv) -sTRAIL浓度的增加,U251细胞的存活率逐渐降低[(84.84±0.2)％～(19.93±1.8)％];IC50剂量(62.5 nmol/L)的antiMRP3(scFv) -sTRAIL单独或给予antiMRP3(scFv)、mAb 2E5预孵育后处理,致U251细胞的凋亡率分别为(58.0±1.3)％、(14.9±1.7)％和(17.4±3.0)％;amiMRP3 (scFv)或mAb 2E5预孵育均可阻断U251细胞中antiMRP3( scFv) -sTRAIL诱导的caspase-3的激活及DFF的裂解.结论:AntiMRP3 (scFv) -sTRAIL促进sTRAIL靶向识别并诱导GBM细胞凋亡,为开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础.
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融合蛋白Kininogen D560-148-TRAIL114-281的表达及其抑制血管新生和诱导细胞凋亡的作用
诱导SW1990细胞凋亡.结论:融合蛋白Kininogen D560-148-TRAIL114-281既能诱导肿瘤细胞凋亡又能抑制血管生成,为进一步开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础.
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重组TRAIL腺病毒抑制肺癌细胞生长和诱导凋亡的作用
目的: 研究重组TRAIL腺病毒(Ad-TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460抑制生长和诱导凋亡的作用,探讨Ad-TRAIL用于非小细胞肺癌基因治疗的可能性.方法:培养肿瘤细胞,分别加入Ad-TRAIL、sTRAIL,并设Ad、PBS作对照.倒置显微镜、吖啶橙染色后荧光显微镜、电镜进行细胞形态结构观察;肿瘤细胞生长抑制实验检测细胞存活率,绘制肿瘤细胞生长抑制曲线;DNA凝胶电泳、PI染色、TUNEL染色和流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡;集落形成实验观察肿瘤细胞集落形成能力.结果:Ad-TRAIL组、sTRAIL组与空腺病毒Ad组、PBS阴性对照组相比均明显抑制非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460的增殖.DNA凝胶电泳出现DNA梯形条带;形态学观察发现Ad-TRAIL组的肿瘤细胞具有细胞凋亡的形态;Ad-TRAIL作用的YTMLC细胞有较高比例(8.55%)的亚二倍体凋亡峰,而Ad和PBS组分别为1.08%和0.47%;Ad-TRAIL组被TUNEL标记的细胞比例为10.6%,高于Ad组的1.13%.Ad-TRAIL组的集落数为28±7,而PBS和Ad对照组分别为257±18,193±12.结论:Ad-TRAIL对非小细胞肺癌细胞具有抑制生长和诱导凋亡的作用,Ad-TRAIL有可能用于非小细胞肺癌的基因治疗.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 重组复制缺陷型腺病毒 凋亡 非小细胞肺癌 -
抗人DR5单克隆抗体诱导U343细胞凋亡研究
目的:探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡配体的死亡受体DR5单克隆抗体对神经胶质瘤细胞株U343的杀伤作用及机制.方法:采用流式细胞仪从蛋白质水平定量地检测DR5在U343的表达;用RT-PCR从mRNA水平检测DR5的表达;免疫细胞化学法明确DR5在U343的分布情况.通过MTT法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪DNA倍体分析,观察抗人DR5单克隆抗体对U343细胞增殖的抑制活性及其诱导凋亡效应.结果:神经胶质瘤细胞株U343表达死亡受体DR5,DR5分布于细胞内细胞核的周围.抗人DR5单克隆抗体3μg/ml作用4 h可明显杀伤U343细胞,其机制与诱导凋亡有关.结论:抗人DR5单克隆抗体可以诱导神经胶质瘤细胞株U343凋亡,以死亡受体为靶点的抗体制剂为肿瘤治疗提供新的途径.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 凋亡 -
TRAIL基因原核表达载体的构建、表达与抗体制备
目的:获取抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)抗体.方法:利用PCR技术和基因重组技术将TRAIL基因构建于原核表达载体pPreTMH-Tb中,经酶切、测序鉴定证实构建完全正确后,通过IPTG诱导在大肠杆菌DH-5α中获得表达,并将TRAIL蛋白免疫家兔,通过Dot blot及Western blot检测抗TRAIL抗体的产生.结果:成功构建TRAIL基因原核表达载体,并在大肠杆菌DH-5α中获得表达,TRAIL蛋白表达量占菌体蛋白质总量的11.8%,Dot blot及Western blot检测证实获得了抗TRAIL抗体.结论:成功制备抗TRAIL抗体,这为TRAIL在真核细胞水平研究奠定了实验基础.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 基因表达 大肠杆菌 -
死亡受体5和肿瘤生物治疗
死亡受体5属于肿瘤坏死因子受体超家族,在多种肿瘤细胞中均有表达,它通过与肿瘤细胞表面相应的配体结合而迅速诱导细胞凋亡.死亡受体5在正常细胞很少或几乎不表达,因此其对正常细胞没有作用.近年来有学者认为可以将死亡受体5作为一个肿瘤生物治疗的新靶点,为研究出更有效的抗肿瘤药物提供帮助.目前重组人TRAIL、抗DR5单克隆抗体等相关药物已进入临床试验阶段,而小分子DR5活化剂的发现,更进一步拓展了人们对于DR5在肿瘤生物治疗中的认识.因此,对死亡受体5研究的进一步深入,可能为未来肿瘤生物治疗提供新的策略.本文就DR5的作用机制及其在肿瘤治疗中的研究及应用做一综述.
关键词： 死亡受体5 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 抗DR5单克隆抗体 肿瘤治疗 -
scFv-sTRAIL融合蛋白靶向诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展
随着分子生物学技术的进步和在分子水平上对恶性肿瘤发病机制认识的不断加深,以细胞受体、表面抗原、关键基因和细胞内调控分子为靶点的分子靶向治疗已成为辅助传统治疗的合理选择.抗体导向治疗是一种新颖的分子靶向治疗手段.目前已研发多种抗体导向类抗癌药物,这类药物由特异性识别肿瘤细胞的靶向部分和杀伤肿瘤的效应部分组成,因而具有较强的靶向杀伤肿瘤细胞作用,同时可有效降低药物对局部正常组织和全身的系统性毒性作用.利用基因工程技术将人类血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(serum-soluble TNF-related apoptosis-inducing ligand,sTRAIL)与抗肿瘤单链抗体(single chain antibody fragment,sc Fv)融合,构建scFv-sTRAIL融合蛋白,是一种理想的抗体导向治疗策略.通过scFv与肿瘤细胞所特有的细胞表面抗原的特异结合,加强sTRAIL在肿瘤病灶的富集,靶向诱导肿瘤细胞凋亡,从而获得增强抗体的疗效和更高的药物安全性.
关键词： 单链抗体 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 融合蛋白 凋亡 -
IFN-γ增强TNF相关凋亡诱导配体对骨巨细胞瘤细胞的抑制
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)对人骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone ,GCT)的作用及干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)对TRAIL抗瘤活性的影响,并探讨其影响机制.方法: 选取2003年-2006年于301医院骨科手术切除的骨巨细胞瘤新鲜标本9例,将取自标本的骨巨细胞瘤细胞分为:对照组, TRAIL组,IFN-γ组, IFN-γ诱导后加入TRAIL组,应用CCK-8法检测TRAIL、IFN-γ单独及联合作用对骨巨细胞瘤细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪、TUNEL法分析IFN-γ对TRAIL凋亡诱导作用的影响,RT-PCR法检测IFN-γ作用前后肿瘤细胞DR4、DR5、TRAIL的表达.结果: 骨巨细胞瘤细胞对照组存活率为(98.64±0.31)%,TRAIL (100、 500、1 000 μg/L)单独作用对肿瘤细胞增殖无明显抑制作用;IFN-γ(500、1 000 U /ml)单独作用后,细胞的存活率分别为(94.05±1.89)%、(90 47±2.66)%.IFN-γ(500 U /ml)诱导24 h后与TRAIL(100、200 μg/L)联合作用,细胞的存活率分别为(84.65±2 46)%、(77.65±3.14)%.两者联合作用后流式细胞仪测得联合作用组凋亡率为(27.94±2.88)%、(38.65±2.46) %,对照组凋亡率为(1.77±0.49)%;TUNEL法测得联合作用组凋亡率分別为(19.63±3.51)%、(29.28±4.80)%,对照组的凋亡率为(1.1±0.17)%.RT-PCR 结果显示,IFN-γ作用24 h后肿瘤细胞TRAIL、DR4、DR5 mRNA表达明显上调.结论: 骨巨细胞瘤细胞对TRAIL不敏感, IFN-γ可以明显提高TRAIL诱导骨巨细胞瘤细胞凋亡的敏感性,其机制可能与IFN-γ上调TRAIL、DR4、DR5 mRNA的表达有关.
关键词： 骨巨细胞瘤 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 干扰素-γ 凋亡 -
激活淋巴细胞中TRAIL及其受体表达的初步研究
目的:探讨静止及激活状态外周血淋巴细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体的表达和它们在淋巴细胞生长、增殖中的作用.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测和基因测序确定不同状态淋巴细胞TRAIL及其受体的表达.结果:在静止状态外周血淋巴细胞TRAIL及其受体皆不表达,而在激活状态TRAIL及其受体都存在不同程度的表达.结论:TRAIL及其受体在激活的淋巴细胞中表达增强,可能参与其激活调控机制.
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重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白的鉴定
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)是继TNF、FasL之后发现的具有诱导细胞凋亡能力的细胞因子配体,存在于细胞表面,在多种组织和细胞中广泛表达[1].人TRAIL由281个氨基酸组成,为Ⅱ型膜糖蛋白,胞外区可被半胱氨酸蛋白酶剪切到体液中,形成相对分子质量为19 000大小的可溶性蛋白,发挥生物学功能[2,3].目前认为TRAIL通过与其受体DR4和DR5结合,进而诱导肿瘤细胞凋亡.正常细胞表面有与DR4和DR5竞争的诱骗受体DcR1和DcR2,而许多肿瘤细胞并不表达这两种诱骗受体,因此TRAIL对于肿瘤细胞具有一定的特异性,为肿瘤的生物治疗提供了新策略[4～6].本研究以正常人外周血淋巴细胞的TRAIL全长cDNA为模板,克隆TRAIL胞外区Val114～Gly281,在大肠杆菌中诱导表达,经纯化获得高生物活性的可溶性蛋白,从而为期在体内作用的研究提供可能.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞凋亡 克隆 原核表达 -
葡萄糖对MG63细胞株TRAIL表达的影响
目的:观察在不同浓度葡萄糖环境下人成骨肉瘤MG63细胞株肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)的表达,探讨糖尿病骨质疏松症的发病机制. 方法:用不同浓度葡萄糖(5.5、16.7、33.3 mmol/L)分别刺激培养的MG63细胞24 h,采用RT-PCR法检测TRAIL、OPG、OPGL mRNA的表达,以免疫组织化学法检测MG63细胞中TRAIL的表达及分布.结果:不同浓度葡萄糖环境的MG63细胞中TRAIL、OPGL mRNA的表达,均按照对照组、5.5 mmol/L组、16.7 mmol/L组、33.3 mmol/L组的顺序递增(P＜0.05),OPG mRNA的表达按照此顺序递减(P＜0.05).33.3 mmol/L组TRAIL mRNA的水平明显高于对照组[(1.004±0.070) vs (0.740±0.023),P＜0.05],TRAIL免疫反应阳性物质密度也明显高于对照组.结论:高糖环境可能导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG表达减少.这可能是糖尿病骨质疏松症的重要发病机制之一.
关键词： 糖尿病 骨质疏松 葡萄糖 MG63细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体
