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抗阻训练对衰老大鼠线粒体介导腓肠肌细胞凋亡通路相关因子表达影响的研究
目的:探讨抗阻训练对衰老大鼠线粒体介导腓肠肌细胞凋亡通路相关因子表达的影响.方法:以雄性SD大鼠为研究对象,饲养至18月龄后通过8周抗阻训练干预,分别以无负重,30％、50％、70％大负重进行间歇跑台运动,坡度为35°,跑速15 m/min,隔天1次.8周末检测腓肠肌ROS、Cyt c和Bcl-2 mRNA表达,并与安静组比较.结果:8周抗阻训练使衰老大鼠腓肠肌ROS、Cyt c减少,Bcl-2mRNA表达增加,其中30％、50％大负重抗阻训练两组大鼠ROS下降具有统计学意义(P＜0.01);30％、50％大负重抗阻训练两组大鼠腓肠肌Bcl-2 mRNA表达增加具有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05);无负重,30％、50％大负重抗阻训练3组大鼠腓肠肌Cyt c减少具有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:低、中等负重抗阻训练能下调衰老过程中大鼠腓肠肌ROS、Cyt c,促进Bcl-2 mRNA的表达,起到改善线粒体功能的作用,从而预防、延迟细胞凋亡的发生.
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法舒地尔预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞色素C和caspase-3表达的影响
目的 研究法舒地尔对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞色素C(Cyt C)和caspase-3蛋白表达的影响,探讨其脑保护机制.方法 线栓法制作大鼠中动脉缺血再灌注损伤模型.成年雄性SD大鼠120只随机分成3组:假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注模型组(Mod组)、法舒地尔干预组(Fas组),再分为再灌注3h、12h、24h和48h,以及TTC染色组5个亚组,每组8只大鼠.缺血再灌注后进行神经功能缺损评分(NDS),免疫组织化学方法检测脑组织中Cyt C蛋白、caspase-3的表达,TTC染色测量鼠脑梗死体积并计算百分比.结果 ①Sham组大鼠无神经功能缺损,NDS评分为0,TTC染色亦未见脑组织梗死;Mod组和Fas组大鼠均有明显的神经功能缺损,TTC染色亦可见明显的脑组织梗死;但与Mod组相比,Fas组神经功能缺损少、NDS评分低(P＜0.01),脑梗死体积减小(P＜0.05).②与Sham组相比,脑缺血再灌注后,Mod组和Fas组大鼠脑组织Cyt C和caspase-3的表达显著升高(P＜0.01),其中Cyt C表达高峰出现在12h,caspase-3表达高峰出现在24h;Fas组和Mod组间比较显示Fas组Cyt C和caspase-3的表达又显著低于Mod组(P＜0.01).结论 ①法舒地尔能减轻大鼠脑局灶性缺血再灌注引起的神经功能缺损,减小脑梗死体积.②部分抑制脑缺血再灌注引起的Cyt C和caspase-3表达增加可能是法舒地尔的脑保护机制之一.
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青春期营养性肥胖对大鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响
目的:探讨营养性肥胖对青春期雄性大鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响.方法:健康青春期Wistar雄性大鼠20只,按随机化原则分为两组,每组10只,对照组给予普通饲料喂养,高脂组用高脂、高热量饲料喂养建立营养性肥胖大鼠模型,10周末处死大鼠摘取睾丸.全自动生化分析仪(ACA)检测外周血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);光镜观察睾丸组织病理学改变;原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸组织凋亡细胞;免疫组化法检测Cyt c、caspase-3蛋白的分布和表达;RT-PCR法检测睾丸组织Cyt c mRNA和Caspase-3 mRNA的表达,结果:高脂组TC、TG、LDL-C和HDL-C较对照组明显升高,差异有显著性(P<0.05);高脂组生殖细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.01),凋亡细胞以精原细胞和精母细胞为主;高脂组Cyt C蛋白和Cyt c mRNA表达明显高于对照组(P<0.01);高脂组Caspase-3蛋白和caspase-3 mRNA表达明显高于对照组(P<0.01).结论:营养性肥胖诱导大鼠睾丸生殖细胞凋亡增多,其机制可能与Cyt c、caspase-3蛋白表达升高相关.
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Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用
目的:研究Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸(RRR-α-tocopheryl succinate,α-TOS;vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡线粒体途径中的作用.方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定VES对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50值);吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞凋亡;Mito Tracker Red CMXRos染色观察线粒体膜电位(△ψm)的改变;Western Blot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC-7901细胞Bid、Bax、Bcl-2蛋白表达和细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)蛋白表达与定位的影响.结果:VES对SGC-7901细胞的IC50值为101.45μg/ml;VES可引起SGC-7901细胞发生凋亡和线粒体膜电位下降;并引起Cyt C蛋白在细胞内重新定位、Bid蛋白剪切活化、Bax蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少.结论:VES可抑制SGC-7901细胞的生长,并通过线粒体途径诱导凋亡,其机制可能是通过剪切活化Bid蛋白、上调Bax/Bcl-2相对水平来实现的.
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线粒体与细胞凋亡的研究进展
线粒体是细胞凋亡的调控中心.在线粒体途径细胞凋亡过程中,线粒体结构和功能发生重构,线粒体外膜通道形成,导致一系列凋亡蛋白如Cyt C、AIF、EndoG、Omi/HtrA2、Smac/DIABLO等从线粒体释放到胞浆中,通过激活caspase或者抑制内源性凋亡抑制蛋白而发挥促凋亡作用.
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缺氧缺血性脑病新生大鼠心肌Caspase-3、Cyt C蛋白表达与心肌细胞凋亡的关系
目的:探讨缺氧缺血性脑病(HIE)新生大鼠心肌Caspase-3、Cyt C蛋白的表达及其与心肌细胞凋亡的关系.方法:7日龄新生大鼠制备HIE经典模型.分为HIE组和假手术对照(NC)组,两组分别于HIE后1小时、4小时、12小时、24小时、48小时、72小时、7天取心脏组织,应用免疫组织化学法检测心肌组织Caspase-3、Cyt C蛋白的表达;应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡.结果:HIE组24小时Caspase-3出现阳性细胞表达增多,48小时达高峰,24小时～7天Caspase-3的表达均明显高于NC组(P＜0.05).HIE组24小时Cyt C出现较多的阳性细胞表达,72小时达高峰,至7天时仍高于NC组(P＜0.05).HIE组12小时心肌阳性凋亡细胞开始增多,72小时达高峰,12～72小时各时间点阳性凋亡细胞明显高于NC组(P＜0.05).Caspase-3、Cyt C蛋白表达与凋亡细胞数二者之间均呈直线正相关.结论:HIE新生大鼠心肌细胞Caspase-3、Cyt C蛋白表达增加,提示Caspase-3、Cyt C蛋白表达对心肌细胞凋亡起促进作用.
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Cyt C和Caspase 3在STZ诱导糖尿病大鼠晶状体上皮细胞中的表达
目的 研究Cyt C和Caspase 3在STZ诱导糖尿病大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)中的表达,为糖尿病性白内障的发生机制提供新的线索.方法 60只健康雄性SD大鼠分为实验组和对照组,每组各30只,实验组大鼠腹腔注射STZ溶液,对照组腹腔注射柠檬酸缓冲液.每4周监测大鼠血糖并用裂隙灯观察大鼠晶状体混浊情况,12周末取大鼠晶状体前囊膜,应用免疫组织化学和Western blot检测LEC中Cyt C和Caspase 3的表达.结果 12周末实验组大鼠空腹血糖为(24.04±2.40) mmol·L-1,对照组为(5.13 ±0.37)mmol·L-.裂隙灯观察显示实验过程中实验组大鼠晶状体出现混浊,而对照组大鼠晶状体均透明.免疫组织化学结果显示:实验组大鼠LEC中Cyt C和Caspase 3表达呈阳性,而对照组则为阴性.Western blot结果显示实验组胞浆内Cyt C含量(0.928 0±0.029 7)大幅度上升,远高于对照组(0.525 0±0.025 8),差异有统计学意义(P＜0.05),而实验组大鼠线粒体内Cyt C含量(0.510 5 ±0.0264)则大幅度下降,远低于对照组(0.846 0±0.033 5),差异有统计学意义(P＜0.05);实验组大鼠LEC中Caspase 3的表达量(0.906 0±0.027 6)明显高于对照组(0.430 5±0.025 2),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 STZ诱导糖尿病大鼠LEC中Cyt C由线粒体释放入胞浆且Caspase 3表达量增加,高血糖可能通过刺激LEC释放Cyt C和激活Caspase 3,诱导LEC凋亡从而形成白内障.
