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Survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞株HEPG2的抑制作用
目的 观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对肝癌细胞的增殖、凋亡的影响.方法 人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染肝癌细胞株HEPG2后,用M1T法检测细胞毒作用,流式细胞术检测细胞的凋亡;RT-PCR、Western blot检测survivin mRNA及蛋白的表达.结果 survivin ASODN抑制 HEPG2增殖,呈剂量依赖性;各survivin ASODN处理组HEPG2细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01);survivin ASODN处理组HEPG2细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降(P<0.01).结论 survivin ASODN能够抑制HEPG2细胞增殖、诱导凋亡.
关键词： survivin 反叉寡核苷酸 肝癌细胞株HEPG2 -
双氢青蒿素体外抑制人肝癌细胞株HepG2生长作用的实验研究
目的 研究双氢青蒿素(DHA)对体外培养的人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用及诱导凋亡作用.常规体外培养人肝癌细胞株HepG2,将不同浓度DHA在不同时间内作用于人肝癌细胞株HepG2,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.不同浓度DHA均可抑制体外培养的人肝癌细胞株HepG2细胞生长,并可诱导其发生凋亡,且呈一定的剂量-效应、时间-效应关系.DHA对体外培养的人肝癌细胞株HepG2有明显的生长抑制作用及诱导凋亡作用.
关键词： 双氢青蒿素 肝癌细胞株HEPG2 抗肿瘤作用 -
苦参素对肝癌细胞HepG2增殖及能量代谢的影响
目的:观察苦参素(OM)对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖、细胞内ATP含量、上清液乳酸生成速率的影响,探讨其可能的机制.方法:体外培养人肝癌细胞株HepG2,CCK-8法观察不同浓度、不同作用时间的OM对HepG2细胞增殖的影响;高效液相色谱技术、乳酸试剂盒分别检测苦参素作用48 h后细胞内ATP、上清液乳酸乳酸生成速率影响.结果:OM可以抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖,其作用效果随药物浓度、作用时间增加而增强(P<0.05);不同浓度苦参素作用48 h后细胞内ATP含量、上清液乳酸生成速率显著下降(P<0.05).结论:OM可以抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖,呈现时间-剂量依赖性,作用机制可能是抑制细胞有氧糖酵解使细胞内ATP含量下降有关.
关键词： 肝癌细胞株HEPG2 苦参素 三磷酸腺苷 糖酵解 -
蛋白质组学技术对肝癌细胞株HepG2的G2/M期细胞的热激蛋白的鉴定
目的:采用蛋白质组学技术鉴定肝癌细胞株HepG2的G2/M期细胞内的热激蛋白.方法:提取肝癌细胞株HepG2的G2/M期细胞的蛋白质,采用双向电泳的方法分离蛋白质,应用图像扫描仪及质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定HepG2的G2/M期细胞表达的蛋白质.结果:采用双向电泳技术分离,并用质谱成功鉴定出HepG2的G2/M期细胞的热激蛋白.结论:肝癌细胞株HepG2的G2/M期细胞内的热激蛋白的成功鉴定,为探讨HSP在细胞生长和增殖中的作用奠定了基础,并为临床上肿瘤的治疗提供参考依据.
关键词： 肝癌细胞株HEPG2 蛋白质组学 热激蛋白 -
肝癌HepG2细胞株胰岛素样生长因子1和表皮生长因子受体基因沉默后放疗增敏及机制
目的:探讨同时沉默胰岛素样生长因子1(IGF1)和表皮生长因子(EGF)二受体基因的抗瘤放疗增敏及机制.方法:分别构建靶向EGFR、IGF1R及两受体的小分子干扰RNA(siRNA-EGFR、siRNA-IGF1R、siRNA-EGFR& IGF1R),构建与任何基因无同源的阴性对照质粒(siRNA-HK),分别转染48照射肝癌HepG2细胞株.成克隆实验测定细胞存活分数,采用单击多靶模型和线性二次函数模型拟合细胞存活曲线,求出放射生物学参数Do、Dq、N和α、β、SF2值.流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化,细胞周期及相关蛋白、细胞凋亡及相关蛋白采用蛋白印迹.结果:同时沉默EGFR和IGF1R组与对照组及单基因干扰组相比抑制了细胞增殖、诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期G1/S期的进程,bcl-2和cdk2表达明显下调,而p21和bax表达增加.且同时沉默EGFR和IGF1R组和对照组细胞的耽值分别为0.588、2.070 4Gy; Dq值分别为0.562 5、2.030 7Gy；α值分别为0.515、0.021 6Gy-1；SF2值分别为0.22、0.619.同时沉默EGFR和IGF1R组Do、Dq和SF2值均减小,α值增大.结论:同时沉默EGFR和IGF1R基因具有更有效地干扰肝癌HepG2细胞株增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与bcl-2和cdk2表达下调和p21与bax表达增加有关,结合干扰多个受体分子可能是一种十分有前途的新的肝癌治疗途经.
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洛铂对肝癌细胞HepG2的放疗增敏效应
目的 探讨洛铂对肝癌细胞的放疗增敏效应.方法 用MTT法确定洛铂对肝癌细胞株HepG2半数抑制浓度(IC50),流式细胞仪检测1/4 IC50、1/8 IC50洛铂对HepG2细胞周期、凋亡的影响,蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达,细胞克隆形成实验研究洛铂对HepG2的放射增敏比.结果 洛铂对肝癌细胞株HepG2细胞毒作用呈剂量依赖性,半数抑制浓度为1.85μg/ml,不同浓度洛铂组(1/4 IC50组、1/8 IC50组)均观察到HepG2细胞凋亡和G2/M期阻滞明显增加(P＜0.05);两组洛铂干预组肝癌细胞Bcl-2表达下降,Bax、Caspase-3表达水平升高;洛铂对肝癌细胞HepG2的放疗增敏比分别是1.12、1.28.结论 洛铂具有放射增敏作用;其机制可能与促进肝癌细胞凋亡以及细胞G2/M期阻滞相关.
关键词： 洛铂 放射增敏 肝癌细胞株HEPG2 -
二甲双胍对人肝癌细胞 HepG2增殖及脂肪酸合酶的影响
目的：二甲双胍治疗的糖尿病患者癌症发生风险较其他药物治疗者显著降低。探讨二甲双胍在人肝癌细胞HepG2中的抗肿瘤活性与脂肪酸合酶的关系。方法选取不同浓度（1、5、10、15 mmol／L）二甲双胍处理HepG2细胞24、48、72 h，用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响。同时设阳性对照（紫杉醇10μg／mL），阴性对照（二甲双胍0 mmol／L）。设0、5、10、15 mmol／L二甲双胍处理72 h，用Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶（ adenosine monophosphate activated protein kinase， AMPK）、磷酸化AMPK（ P-AMPK）、脂肪酸合酶（ fatty acid synthase， FASN）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ P-mTOR）、磷酸化蛋白激酶B（ P-Akt）蛋白表达，RT-PCR 检测FASN mRNA的表达水平。结果1、5、10、15 mmol／L二甲双胍干预24、48、72 h，分别随二甲双胍浓度与处理时间的增加，HepG2细胞的增殖抑制作用逐渐增强（ P＜0．05），且呈时间和浓度依赖性。其中10 mmol／L二甲双胍处理后增殖抑制率在72 h接近50％、15 mmol／L二甲双胍处理后增殖抑制率均＞50％。0、5、10、15 mmol／L二甲双胍处理HepG2细胞72 h后，P-AMPK的蛋白表达随药物浓度增高而上调，P-mTOR、FASN的蛋白表达随药物浓度增高而下调，三者在10、15 mmol／L二甲双胍作用后的表达较阴性对照的差异均有统计学意义（ P＜0．05）；而P-Akt蛋白表达在二甲双胍各浓度间差异无统计学意义（ P＞0．05）。 FASN mRNA的表达随药物浓度增加呈下降趋势，5、10、15 mmol／L二甲双胍作用后表达量均较阴性对照显著下降（ P＜0．05）。结论二甲双胍的的抗肿瘤作用与其激活AMPK、抑制mTOR和FASN有关。二甲双胍虽然抑制了mTOR的活化，但没有造成Akt的反馈性激活。
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肝癌细胞株HepG2蛋白双向电泳条件的优化
目的 优化双向电泳条件,以获得高分辨率、重复性好的蛋白质双向电泳图谱.方法 比较不同的细胞总蛋白质裂解液、不同的蛋白上样量、不同的等电聚焦电泳条件,选择佳双向电泳条件.结果 确定了适合肝癌细胞株HepG2的佳细胞总蛋白质裂解液5、佳蛋白上样量650 μg和佳等电聚焦电泳条件为大电压34 kV、30 min.结论 优化双向电泳方法获得的肝癌细胞株HepG2蛋白质双向电泳图谱高分辨率、重复性好.
关键词： 肝癌细胞株HEPG2 双向电泳 条件 -
干扰素α-2b联合5-氟尿嘧啶对人肝癌细胞生物学行为的影响
目的 检测干扰素(IFNα-2b)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)在体外对肝癌细胞株HepG2的杀伤抑制作用,并探讨可能的作用机制.方法 体外复苏、培养人肝癌细胞,并单用IFNα-2b或5-FU,以及不同浓度的IFNα-2b联合5-FU对其进行干预.用MTr法测定IFNα-2b联合5-FU对体外培养的人肝癌细胞生长的抑制率；用HOECHST 染色法检测药物对人肝癌细胞凋亡的影响；用免疫细胞化学法检测用药后人肝癌细胞中突变型p53、c-myc表达的变化.结果 IFNα-2b和5-FU都能抑制HepG2细胞生长,并随着作用时间的延长而增强,IFNα-2b与5-FU联合用药比单用IFNα-2b或5-FU抑制效果更明显,并随着浓度的增加和作用时间的延长而增强；IFNα-2b和5-FU均能诱导肝癌细胞凋亡,二药联用时细胞凋亡更明显,可呈剂量依赖性地诱导肝癌细胞凋亡,不同浓度下的凋亡率均明显高于对照组；IFNα-2b和5-FU均可明显抑制突变型p53、c-myc蛋白的表达,二药联用抑制作用更明显.结论 IFNα-2b和5-FU联用可呈剂量和时间依赖性地抑制肝癌细胞的增殖,呈剂量依赖性地诱导肝癌细胞凋亡,下调突变型p53、c-myc蛋白的表达,表现出协同作用.这些可能是IFNα-2b和5-FU联合抗癌的部分机制.
关键词： 干扰素α-2b 5-氟尿嘧啶 肝癌细胞株HEPG2 P53蛋白 c-myc蛋白 -
干扰素α-2b联合5-氟尿嘧啶对肝癌细胞株HepG2生物活性的影响
目的 观察干扰素α-2b联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对肝癌细胞株HepG2在体外的杀伤抑制作用,同时检测药物作用后肝癌细胞突变型P53的表达情况.方法 用不同浓度的干扰素α-2b(100、500、1000、2000 U/ml)和5-FU (10 μg/ml) 联合对肝癌细胞株作用不同时间(24、48、72 h),用单四唑(MTT)法检测细胞生长抑制率,进而运用PV-9000二步法对突变型P53表达情况进行测定.结果干扰素α-2b和5-FU联合效果明显优于单用,并与对照组差异有统计学意义(P<0.05).经药物处理后,突变型P53表达差异有统计学意义(P<0.05).结论干扰素α-2b和5-氟尿嘧啶能有效抑制肝癌细胞的生长,导致突变型P53 因子表达的下调而发挥作用.
关键词： 干扰素α-2b 5-氟尿嘧啶 肝癌细胞株HEPG2 P53 -
四虫片对低氧培养人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响
目的 观察四虫片含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,以及对肝癌细胞突变型p53表达的影响.方法 用不同浓度的四虫片和氟尿嘧啶(5-FU)分别加入肝癌细胞株中一起培养.用单四唑(MTT)法检测其对肝癌细胞增殖的抑制作用,用PV-9000二步法对突变型p53表达进行测定.结果 MTT检测显示四虫片高浓度(25%)含药血清72h对肝癌细胞的抑制率为53%,5-FU(10μg/ml)对照组抑制率为22%,两组有明显差异(P＜0.05).经药物处理后,两组所测变异型p53表达差异明显(P＜0.05),HOECHST染色试剂盒所测细胞凋亡率亦有明显差异(P＜0.05).结论 四虫片能有效抑制肝癌细胞增殖,且能诱导肝癌细胞凋亡.其诱导肝癌细胞凋亡的机制可能与下调突变型p53蛋白的表达有关.
关键词： 四虫片 氟尿嘧啶 肝癌细胞株HEPG2 P53 -
拓扑替康诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的初步研究
背景与目的:拓扑替康(topotecan,TPT)是新一代水溶性、半合成喜树碱类衍生物,系拓扑异构酶I抑制剂、细胞周期特异性抗肿瘤药物;肝癌为我国发病率居第三位的恶性肿瘤,现有治疗方法的临床疗效均不理想.本文研究TPT诱导肝癌细胞株HepG2凋亡的作用,及其细胞毒作用.方法:运用MTT、HE染色、透射电镜、流式细胞仪、免疫组化技术等实验方法,对TPT杀伤HepG2细胞的程度进行了测定并观察了其诱导凋亡的过程.结果:TPT能通过诱导HepG2细胞凋亡的方式,杀伤HepG2细胞,TPT对HepG2细胞具有较强的体外杀伤作用,并存在明显的剂量、时间依赖关系,IC50约为95μg/L.TPT将HepG2细胞阻断在S期,并进一步诱导其凋亡.凋亡形态特征表现为典型的间期凋亡:细胞核染色质固缩,呈新月形聚集于核膜周缘,胞质浓缩,出现空泡.在TPT诱导HepG2细胞凋亡的过程中,不影响bcl-2基因蛋白正常表达(P>0.05).结论:TPT能诱导HepG2细胞凋亡,细胞毒性较强.
关键词： 拓扑替康 肝癌细胞株HEPG2 凋亡 -
两种细胞系用于建立体外脂肪肝模型的比较
目的 对比油酸诱导肝癌细胞株HepG2、正常肝细胞株L02建立的肝细胞脂肪变性模型,通过检验复方蛋氨酸胆碱的防治作用,寻找简便、稳定的体外药物筛选模型.方法 设正常组、HepG2模型组、HepG2不同浓度给药组、L02模型组、L02不同浓度给药组、用油酸诱导肝细胞脂肪变,复方蛋氨酸胆碱干预,以油红O染色镜下观察细胞内脂滴形成状况,并检测细胞上清中的ALT、AST、γ-GT水平.结果 油酸刺激HepG2、L02 肝细胞24 h,细胞内典型脂肪滴形成.复方蛋氨酸胆碱2次给药,药物难以使HepG2细胞内脂滴减少,L02细胞在加油酸48 h后油红O 染色证明细胞内脂滴可减少,脂滴表达的红色IOD值,各给药组与模型组比较,差异有极显著性(P<0.01).细胞上清液中ALT、AST、γ-GT,复方蛋氨酸胆碱各组与模型组比较差异有显著性,证实其对肝细胞损伤较小.结论 L02比HepG2更适合作为体外的筛药细胞模型,油酸刺激L02细胞形成脂肪变,药物提前24 h干预,24 h后再给药1次,这种造模和给药方案可作为一种可行的脂肪肝细胞筛药模型使用.
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多巴胺受体1在肝细胞癌中的表达与预后的关系及其对肝癌细胞增殖的影响
[目的]通过探讨多巴胺受体1(DRD1)蛋白在肝细胞癌组织的表达,分析其与肝癌患者临床病理因素及预后的关系,初步探讨DRD1的激动剂SKF38393和拮抗剂SCH23390对肝癌细胞株HepG2增殖的影响.[方法]采用免疫组织化学方法检测147例肝细胞癌组织中DRD1蛋白的表达情况,通过统计分析其与临床病理因素和预后的关系,同时使用SKF38393和SCH23390分别作用于肝癌细胞HepG2,利用细胞增殖实验检测其对细胞增殖率的影响.[结果]在147例肝癌组织中DRD1阳性表达的有89例(60.5％);相关性分析结果显示,DRD1在肝癌中高表达与乙肝表面抗原以及血管侵犯相关(P＜0.05).DRD1蛋白阳性表达的患者无复发生存期(P＜0.05)与总生存期(P＜ 0.001)明显较短.Cox多因素分析结果揭示,DRD1表达水平是肝癌患者术后无复发生存期独立危险因素之一(P＜ 0.05),且具有重要的预后预测价值.肝癌细胞HepG2的细胞增殖实验结果表明SCH23390明显抑制HepG2增殖(P＜0.05);SKF38393明显促进HepG2增殖(P＜0.05).[结论]DRD1蛋白在肝细胞癌组织中表达阳性与侵袭转移相关;DRD1可作为预测肝癌患者预后的独立分子标志物;DRD1可能与肝癌细胞的增殖相关.
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雷公藤红素对肝癌细胞株HepG2的影响及作用机制
目的：研究雷公藤红素（Celastrol）对肝癌细胞株HepG2增殖活力的影响。方法将人正常肝细胞LO2及人肝癌细胞株HepG2接种在DEME培养基中，传代后取对数生长期细胞进行实验，用MTT法测定不同浓度雷公藤红素对正常肝细胞LO2及肝癌细胞株HepG2增殖的量效关系（1、2、4、8、16、32μmol／L）和在0.5μg／mL浓度的雷公藤红素作用下的时效关系（1、2、4、8、12、24 h），Hoechst 荧光染色观察凋亡细胞形态变化以及Western blot检测肝癌细胞株HepG2中半胱氨酸蛋白酶（ caspase ）－3、caspase －8、caspase －9与胞内磷脂酰肌醇3激酶（p－PI3K）、t－胞内磷脂酰肌醇3激酶（t－PI3K）、磷酸化蛋白激酶（p－AKT）、t－AKT、细胞外信号调节激酶（p－ERK）、t－ERK的表达情况。结果经MTT法检测，不同浓度雷公藤红素对正常肝细胞的增殖没有明显抑制作用，而对肝癌细胞HepG2的抑制率依次为6.83％、15.11％、18.32％、21.77％、23.77％、25.51％，作用强度随着浓度的升高而增强；在浓度为0.5μg／mL雷公藤红素作用下，不同时间抑制率分别为6.66％、10.63％、13.31％、15.50％、20.54％、32.34％，呈时间依赖性；Hoechst 荧光染色在显微镜下均显现凋亡细胞。 Western blot结果显示， caspase－3、caspase－8、caspase－9、p－PI3K、p－AKT、p－ERK显影，caspase－3、caspase－8、caspase－9表达量增加，而p－PI3K、p－AKT、p－ERK表达量降低。结论雷公藤红素通过诱导HepG2凋亡及细胞自噬作用，发挥增殖活力抑制作用，可能与调控caspase－3、caspase－8、caspase－9、p－PI3K、p－AKT、p－ERK等相关因子的表达情况有关。
关键词： 雷公藤红素 肝癌细胞株HEPG2 增殖 细胞凋亡 -
沉默IGF1和EGF二受体基因的肝癌HepG2细胞株的抗瘤放疗增敏及机制
目的：探讨同时沉默IGF1与EGF二受体基因的抗瘤放疗增敏以及其病理机制。方法按照特定的方式创造出靶向EGFR、IGF1R以及两受体的小分子干扰RNA，并在一定的条件下设定出同所有基因不产生同源的阴性对照质粒，对其进行转染超过48 h之后选择使用射线对肝癌HepG2细胞株进行照射。在成克隆的研究过程中对细胞的存活分数进行检测，选择使用单击多靶模型与线性二次函数模型两种方式共同制定出细胞存活曲线，进而获取放射生物学参数DO、Dq、N以及α、β、SF2的数值。结果将两个组之间进行对比我们可了解到，其明显控制了细胞增殖以及起到诱导细胞死亡的作用，减缓G1／S期的发展过程，bcl－2与cdk2两者之间呈现出明显的下降趋势，p21与bax则呈上升趋势。并且同时沉默EGFR与IGF1R组与对照组细胞的D0数值则是0.588与2.0704 Gy；Dq的数值则是0.5625与2.0307 Gy；a值则是0.515与0.0216 Gy－1；SF2值则是0.22与0.619。这一组的DO、Dq以及SF2值全部呈下降趋势，α值则呈上升趋势。结论同时沉默EGFR与IGF1R基因对于肝癌HepG2细胞株增殖以及死亡起到干扰的效果，并且病理机制也同bcl－2与cdk2等有着直接的联系，结合多种方法对此疾病进行治疗是目前发展前景比较广阔的方式，可在临床上进行推广及使用。
关键词： EGF受体 IGF1受体 肝癌细胞株HEPG2 -
Livin,Survivin在肝癌细胞的表达及5-Fu对其的诱导作用
目的:研究凋亡抑制蛋白Livin,Survivin在肝癌细胞株HepG2的表达及5-Fu对肝癌细胞内凋亡抑制蛋白Livin.survivin 的诱导作用,探讨Livin,Survivin在肝痈化疗抵抗中的作用机制.方法:培养人肝癌细胞株HepG2,加入低浓度的化疗药物5-Fu,分别在加约前、加药后24 h和48h采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(westem-blot)检测livin,survivin mRNA和蛋白的表达.结果:给予低浓度的5-Fu可诱导Livin,Survivin mRNA和蛋白的表达发生变化,其中Livin mRNA在加药后24 h和48 h分别较加药前提高了0.6倍和1.1倍,Livin蛋白在加药后24 h和48 h分别较加药前提高了1.3倍和2.7倍,SurvivinmRNA在加药后24 h和48 h分别较未加药提高了1.5倍和2.2倍,Survivin蛋白在加药后24 h和48 h分别较未加药提高了0.9倍和1.9倍.结论:Livin,Survivin在HepG2中有表达,5-Fu可诱导肝癌细胞内livin,Survivin的表达增加抵抗化疗药物诱导的细胞凋亡.值得进一步研究以评价5-Fu对肝癌治疗的实用价值.
关键词： 肝癌细胞株HEPG2 Livin survivin -
miR-26a对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响及初步机制的研究
目的:探讨miR-26a对人肝癌细胞株HepG2侵袭迁移能力的影响及可能机制.方法:将miR-26a表达质粒及对照质粒分别转染HepG2细胞,qRT-PCR检测转染后miR-26a的表达,细胞划痕实验和Tran-swell侵袭实验检测HepG2细胞迁移和侵袭能力的改变,qRT-PCR和Western blot检测转染后AEG-1 mRNA和蛋白的表达.结果:转染miR-26a表达质粒后,HepG2细胞miR-26a表达明显增高(P＜0.01),迁移和侵袭能力显著降低(P＜0.05),AEG-1 mRNA及蛋白表达水平明显下调(P＜0.05).结论:过表达miR-26a,可抑制HepG2细胞迁移和侵袭,其机制可能与抑制AEG-1表达相关.
关键词： miR-26a 肝癌细胞株HEPG2 AEG-1 侵袭 迁移
