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机体运动中热激蛋白72的双重保护作用
1 HSP72的生物学概述热激蛋白(Heat Shock Protein,HSP)又称热休克蛋白,是广泛存在于原核和真核生物各种类型细胞中的一类保护性蛋白.在各种应激条件(如高温、缺氧、细胞损伤)和病理状况下,这类蛋白质的合成显著增加,以维持细胞与机体的稳态和生存[1].由于热激蛋白和肿瘤、心血管疾病、糖尿病、神经性疾病、衰老等人类重大疾病的发生都密切相关,所以已经成为药物治疗研究中的重要靶向蛋白[1].
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热激蛋白基因多态性与缺血性心力衰竭的研究进展
心力衰竭（心衰）是各种心脏疾病导致心功能不全的一种综合征。心衰的发病机制仍不明确，可能是一类多基因疾病。热激蛋白（ HSP）是一种高度保守的分子蛋白，在急性心肌梗死后心衰患者中高度表达。 HSP基因多态性可能是冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）的易患基因，其基因突变影响了HSP水平。炎症反应是心衰发病的病理生理学机制之一，由炎性因子编码的基因突变可能是缺血性心衰的致病因素。目前HSP基因多态性与缺血性心衰的相关研究较少。
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热激蛋白抑制剂与肿瘤的研究进展
热激蛋白(HSP)在协助人类细胞正确折叠、激活以及装配方面起关键作用,并影响肿瘤细胞增殖、分化、浸润、血管生成、转移和细胞凋亡. 同时,其还能促使肿瘤细胞刺激免疫系统并产生免疫应答,HSP作为新的肿瘤靶向治疗位点已经进入临床应用. 新的研究表明,格尔德霉素类似物以及其他新型小分子HSP抑制剂能抑制与肿瘤相关的HSP伴侣蛋白的活性,从而发挥抗肿瘤作用,但仍需进一步的临床试验对其进行评估. 该文就HSP抑制剂在抗肿瘤方面的应用进行综述.
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超高场强核磁共振中脑深部电刺激电极周围分子生物学变化的活体研究
目的 通过对超高场强核磁共振磁场中脑深部电刺激(DBS)电极周围组织病理学变化及分子生物学变化的观察和研究,深入探讨射频磁场中DBS电极热效应的机制和对周围组织的影响.方法 选取雄性新西兰白兔24只,随机分入电极植入组(n=12)和穿刺对照组(n=12).电极植入组以左侧丘脑腹后核为靶点,植入全套DBS电极和刺激器.穿刺对照组仅进行同靶点DBS电极穿刺,并不植入DBS设备.术后进行7.0T超高场强核磁共振扫描.术后24 h对针道周围脑组织进行western-blot及实时定量PCR(QPCR)检测,测定热激蛋白70(HSP-70)的变化.结果 Western-blot结果显示,穿刺道周围电极植入组与穿刺对照组HSP-70水平未见明显差异(P＞0.05).QPCR结果显示穿刺道周围电极植入组与穿刺对照组HSP-70 mRNA水平未见明显差异(P＞0.05).结论 本实验中DBS电极在超高场强核磁共振下的热效应并未造成周围脑组织出现明显热损伤,提示体内植入DBS设备的患者在限定条件下进行超高场强核磁共振扫描(＞1.5T)可能是安全的.
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蛋白质组学技术对肝癌细胞株HepG2的G2/M期细胞的热激蛋白的鉴定
目的:采用蛋白质组学技术鉴定肝癌细胞株HepG2的G2/M期细胞内的热激蛋白.方法:提取肝癌细胞株HepG2的G2/M期细胞的蛋白质,采用双向电泳的方法分离蛋白质,应用图像扫描仪及质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定HepG2的G2/M期细胞表达的蛋白质.结果:采用双向电泳技术分离,并用质谱成功鉴定出HepG2的G2/M期细胞的热激蛋白.结论:肝癌细胞株HepG2的G2/M期细胞内的热激蛋白的成功鉴定,为探讨HSP在细胞生长和增殖中的作用奠定了基础,并为临床上肿瘤的治疗提供参考依据.
关键词： 肝癌细胞株HEPG2 蛋白质组学 热激蛋白 -
HSP70与肿瘤免疫治疗
热激蛋白70(HSP70)家族是一类重要的应激蛋白,在肿瘤免疫中发挥免疫佐剂的功能,可协同抗原呈递细胞(APC)、αβT细胞、γδT细胞和NK细胞的作用.通过分子载体的作用将抗原肽呈递APC表面,激活CD8+T细胞,达到杀伤肿瘤细胞的目的.HSP70对开发肿瘤疫苗也有重要的意义.本文简要综述HSP70分子及其在肿瘤免疫治疗中的新进展.
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寄生虫烯醇酶的功能研究进展
烯醇酶不仅是糖酵解的关键酶,还具有其他多种功能,不仅存在于细胞质中,还在细胞膜、细胞核中存在.它在真核细胞和原核细胞表面具有纤溶酶原受体的功能.参与病原体与宿主纤溶酶原的结合,与病原体对宿主的侵袭和感染有关,是一个潜在的保护性抗原;它在细胞核内参与了基因转录的凋榨过程,具备热激蛋白(heat shock protein)的功能.该文着重对烯醇酶在寄生虫感染宿主、寄生虫与宿主相互作用的研究进展作简要综述,介绍烯醇酶在一系列生物学和疾病过程中结构与功能的相互关系.
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旋毛虫热激蛋白的研究进展
旋毛虫热激蛋白(heat shock protein,HSP)是一个高度保守的蛋白质家族,具有特殊的生物学作用,开展HSP的研究对旋毛虫病的免疫诊断和免疫预防具有重要意义.该文对旋毛虫与宿主HSP水平的变化、旋毛虫HSP的分离纯化、克隆表达及其检测方法等方面的研究进展进行了综述.
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寄生虫应激蛋白的研究进展
应激蛋白是细胞或生物体受到各种不同环境因素刺激后产生的一种非特异性蛋白,主要包括急性期反应蛋白、热激蛋白、某些酶或细胞因子等.其中,急性期反应蛋白是一种起动迅速的机体防御机制,属于分泌型蛋白;热激蛋白是细胞受到热应激后新合成的一类遗传上高度保守的蛋白,属于非分泌型蛋白,在应激蛋白中研究为深入.该文主要阐述了热激蛋白家族的历史和分类,对热激蛋白在寄生虫学领域的研究进展进行了综述.
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安氏隐孢子虫卵囊活力鉴别方法的探讨
目的 鉴别安氏隐孢子虫卵囊的活力.方法 取适量新鲜纯化卵囊,高温灭活.首先用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色法对灭活和未灭活卵囊进行染色,荧光显微镜下观察.同时提取灭活和未灭活两种卵囊的mRNA,反转录作为模板.基于隐孢子虫热激蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)基因设计特异引物,用RT-PCR法对卵囊进行鉴别.结果 灭活卵囊经P1染色在荧光显微镜下呈亮红色,而新鲜纯化卵囊无此颜色.新鲜纯化卵囊经RT-PCR法可检测到HSP70的特异条带,而灭活卵囊则无此条带.结论 P1染色法与基于HSP70 mRNA降解的RT-PCR法均可对隐孢子虫卵囊的活力进行鉴别.
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中华按蚊热激蛋白40(HSP40)cDNA序列的全长扩增
目的 为获取中华按蚊感染约氏疟原虫后24 h的高表达基因热激蛋白40(HSP40)cDNA的全长序列. 方法 运用抑制性消减杂交技术(suppression substractive hybridization,SSH)构建中华按蚊感染约氏疟原虫后24 h的差异表达基因文库,从高表达文库中获得长度为363 bp的HSP40基因的cDNA片段,运用RACE技术对其cDNA序列进行全长扩增. 结果 获得中华按蚊HSP40 cDNA的全长序列,总长度为1 159 bp,开放阅读框为1 014 bp,编码337个氨基酸. 结论 获得了中华按蚊HSP40 cDNA的全长序列.
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融合穿膜肽的HSP70基因联合CIK细胞对裸鼠胃癌移植瘤的治疗效果
目的:观察融合穿膜肽的HSP70基因联合CIK细胞对裸鼠胃癌移植瘤的治疗效应.方法:采用编码11个精氨酸(11R)的穿膜肽序列融合HSP70基因序列,构建重组腺病毒载体AdCMV-HSP70s、AdCMV-HSP70(无穿膜肽对照)和AdCMV-EGFV(空载体对照).Western blotting、ELISA法检测重组腺病毒介导的HSP70基因在胃癌SCG-7901细胞中的表达,MTT检测重组腺病毒感染后HSP70分泌性表达对胃癌细胞的抑制作用.裸鼠移植瘤模型的抗瘤实验检测HSP70基因联合CIK细胞对胃癌移植瘤的抗瘤效应.结果:与AdCMV-HSP70感染细胞比,AdCMV-HSP70s感染细胞的HSP70表达量明显增加[胃癌SGC-7901细胞:(360.72±20.89) vs(121.01±15.94) ng/ml,P＜0.05;胃黏膜上皮GES-1细胞:(188.62±10.82) vs(135.00 ±13.96) ng/ml,P＜0.05].融合11R的HSP70蛋白能够穿膜并分泌到细胞外后对胃癌细胞产生一定的增殖抑制作用[MOI=100 pfu/cell时,细胞存活率(66.33±4.33)％vs(101.33±7.64)％,P＜0.01].AdCMV-HSP70s+ CIK联合治疗对胃癌移植瘤的抑制率显著高于AdCMV-HSP70+ CIK组[(66.5±7.3)％vs(43.6±5.6)％,P＜0.05],该组移植瘤组织间质中CD3+T细胞浸润数量也明显多于后者.结论:融合穿膜肽可明显促进HSP70蛋白的表达和分泌,和CIK细胞联合治疗能增强抗瘤免疫效应,从而显著抑制裸鼠胃癌移植瘤.
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热激蛋白在多发性骨髓瘤硼替佐米耐药中的作用
热激蛋白( heat shock protein,HSP)作为分子伴侣,在蛋白质的折叠、装配、转运和降解、机体免疫、细胞凋亡等方面发挥重要作用.HSP在多发性骨髓瘤细胞中高表达,在骨髓瘤硼替佐米耐药的发生、发展中起极为重要的作用,并已成为多发性骨髓瘤治疗的一个新靶点.与骨髓瘤患者耐药相关的HSP主要包括HSP90、HSP70、HSP27.HSP90主要通过直接与其分子伴侣结合,扰乱客户蛋白( client protein)以及影响正常的凋亡途径发挥作用,临床上HSP90抑制剂正处于广泛研究中,并发现其可逆转骨髓瘤耐药.HSP70、HSP27亦与骨髓瘤耐药相关,但具体机制尚待进一步深入研究.本文主要介绍HSP家族在骨髓瘤硼替佐米耐药中的作用,对部分机制进行探讨,并对今后的研究重点进行展望.
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热激蛋白70B'启动子调控的热诱导型载体pHSP-shTERT的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞的抑制效应
目的:构建靶向端粒酶逆转录酶(telomerose reverse transcriptas,TERT)的热激蛋白(heat shock protein,HSP)70B'启动子调控的热诱导型RNAi表达载体,观察热诱导条件下其在人乳腺癌MCF-7细胞内的RNAi效应及其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.方法:PCR扩增HSP70B'启动子序列,用其构建热诱导型靶向TERT的重组载体并转染MCF-7细胞,倒置荧光显微镜和流式细胞术检测GFP的表达,优化转染和热诱导条件;以未经热诱导的转染细胞为对照组,RT-PCR和Western blotting检测重组载体转染与热诱导对MCF-7细胞内GFP与TERT的mRNA和蛋白表达的影响;MTT实验和流式细胞术分别检测对MCF-7细胞增殖与凋亡的影响.结果:成功构建热诱导型重组载体pHSP-GFP、pHSP-shGFP和pHSP-shTERT;在适热诱导条件(42℃、40 min)下,共转染质粒pHSP-shGFP和pCMV-GFP的MCF-7细胞中GFP表达量显著低于对照组(t=-48.35,P=0.000 43).pHSP-shTERT转染组MCF-7细胞内TERT mRNA[(12.24±1.96)％vs (80.18±2.28)％;t=-286.5,P=0.000 012]和蛋白[(1.64±0.42)％vs(63.45±3.12)％;t=-31.37,P=0.001]的表达均显著下调,细胞存活率显著下降[(58.93±2.95)％vs(91.22±4.16)％;t=15.747,P=0.004],细胞凋亡率显著提高[(40.97±4.80)％ vs(8.33±1.14)％;t=-11.672,P=0.007].结论:靶向TERT的pHSP-shTERT载体可以在热诱导条件下实现MCF-7细胞内靶基因的沉默,从而抑制MCF-7细胞的生长、诱导该细胞的凋亡.
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pHSP70P-EGFP真核表达载体的构建及其在人Chang's肝细胞中的表达
目的 构建HSP70启动子与绿色荧光蛋白重组真核表达载体,并在人Chang's肝细胞表达,建立一种新的体外药物肝毒性早期预测细胞模型.方法 提取人Chang's肝细胞基因组DNA,钓取HSP70启动子基因,构建重组载体,经脂质体转染人Chang's肝细胞,用G418筛选稳定转染细胞,用荧光显微镜观察绿色荧光表达情况,用实时荧光定量PCR检测EGFP基因表达量的变化.结果 成功钓取HSP70启动子基因并导入真核表达载体pEGFP-N1;G418以300 ng/mL的终浓度筛选出稳定转染的单克隆细胞;荧光显微镜观察到肝毒性药物酮康唑刺激人Chang's 肝细胞后,可诱导HSP70启动子调控增强型绿色荧光蛋白发出绿色荧光,药物刺激组EGFP mRNA相对表达量与正常对照组比较有统计学意义(t=-14.21,P<0.05).结论 成功构建HSP70启动子与绿色荧光蛋白共表达真核表达载体,获得稳定转染单克隆细胞,并证实HSP70在肝毒性药物刺激下的应激表达,为建立新的体外药物肝毒性早期预测细胞模型进行高通量筛选新药奠定了基础.
关键词： 热激蛋白 启动子 人Chang's肝细胞 基因重组
